Back to chapter

13.13:

细菌转化

JoVE Core
Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.  Sign in or start your free trial.
JoVE Core Biology
Bacterial Transformation

Languages

Share

细菌转化是细菌 摄取外源DNA的一个过程。 或来自细胞外的来源的DNA。 一些细菌可以自然地进行转化。 它也可以在实验室环境中诱导, 作为DNA克隆过程的一部分, 研究基因及其编码蛋白质 的序列和功能的重要基石。 为了转化,细菌必须是有能力的, 意味着要么它们拥有将DNA片段运输 到细胞壁和细胞膜上的分子机制, 要么它们已经过化学处理 以使其细胞壁可透过DNA。 在实验室中,将目的DNA序列 插入质粒中,该质粒是圆形的DNA片段。 质粒通常还含有 一个序列,如抗生素抗性基因, 使科学家能够筛选转录, 即接收质粒的细菌。 添加质粒的许多拷贝 将许多拷贝的质粒加入到液体培养基中的感受态细菌中, 热休克迫使细菌吸收DNA。 然后细菌在选择培养基上生长, 选择培养基由促进 某些细菌生长的组分制成, 并抑制其他细菌的生长。 只有制造质粒拷贝的细菌 才能在选择培养基上存活, 并繁殖到菌落中, 细菌生长的可见斑点 来自单个细胞。

13.13:

细菌转化

1928年,细菌学家弗雷德里克 格里菲斯(Frederick Griffith)研究了一种由肺炎链球菌细菌引起的肺炎疫苗。格里菲斯在小鼠中研究了两种肺炎菌株:一种是致病性的,一种是非致病性的。只有致病菌株能杀死宿主小鼠。

格里菲斯在杀死致病菌株并将其遗体与活的非致病菌株混合后,有了一个意想不到的发现。这种混合物不仅杀死了宿主小鼠,而且还含有能产生致病后代的活的致病菌。格里菲斯的结论是,非致病性菌株从死亡的致病性菌株中获得某种东西,并将其转化为致病性菌株;他称之为转化原理。

在格里菲斯进行研究时,围绕遗传物质的身份展开了激烈的争论。许多早期证据表明蛋白质是遗传分子。格里菲斯的细菌转化实验提供了一些最早的数据,证明DNA是遗传物质。

细菌通过转化吸收外部DNA。转化是自然发生的,但在实验室也经常被诱导来克隆DNA。为了克隆一个特定的基因,科学家可以将该基因插入一个质粒中,这个质粒是一个可以独立复制的环状DNA分子。质粒中常含有一种抗生素抗性基因。细菌通过转化吸收质粒。然后科学家将细菌暴露在抗生素下。存活的菌落应该含有质粒,因为质粒含有抗生素抗性基因。DNA分析可以证实基因在质粒中的存在。具有所需基因的细菌菌落繁殖,可用于制造更多的质粒或蛋白质。

为什么细菌会吸收外来DNA?与有性繁殖的有机体不同,细菌基本上是自我克隆的。这种被称为二元裂变的繁殖方法,几乎没有遗传变异的机会。虽然突变带来了一些多样性,但许多突变是有害的。通过转化、结合和转导共享基因,允许原核生物进化。

Suggested Reading

Lerminiaux, Nicole A., and Andrew D.s. Cameron. 2019. “Horizontal Transfer of Antibiotic Resistance Genes in Clinical Environments.” Canadian Journal of Microbiology 65 (1): 34–44. [Source]

Sieber, Karsten B., Robin E. Bromley, and Julie C. Dunning Hotopp. 2017. “Lateral Gene Transfer between Prokaryotes and Eukaryotes.” Experimental Cell Research 358 (2): 421–26. [Source]