Back to chapter

13.13:

Bakteriyel Dönüşüm

JoVE Core
Biology
A subscription to JoVE is required to view this content.  Sign in or start your free trial.
JoVE Core Biology
Bacterial Transformation

Languages

Share

– [Eğitici] Bakteriyel dönüşüm, bakterilerin eksojen DNA’yı aldıkları süreçlerden biridir. Veya hücre dışındaki kaynaklardan gelen DNA’yı aldıkları… Bazı bakteriler doğal olarak dönüşüm geçirebilir. Ayrıca bakteri dönüşümü, DNA klonlama işleminin bir parçası olarak laboratuar ortamlarında da oluşturulabilir. DNA klonlama, genlerin ve kodladıkları proteinlerin dizilerini ve işlevlerini incelemek için önemli bir basamaktır. Dönüşümün gerçekleşmesi için bakteri yetkin olmalıdır. Bunun anlamı, DNA fragmanlarını hücre duvarı ve hücre zarı boyunca taşıyacak moleküler düzeneğe sahip olmaları veya hücre duvarlarını DNA’ya geçirgen hale getirmek için kimyasal olarak işlem görmeleridir. Laboratuvarda, ilgili DNA dizisi, dairesel bir DNA parçası olan plazmidin içine yerleştirilir. Plazmid genellikle, aynı zamanda bilim adamlarının plazmidi alan bakteri olan transformansı taramasını sağlayan antibiyotik direnç geni gibi bir dizi de içerir. Plazmidin çok sayıda kopyası sıvı bir ortamda yetkin bakterilere eklenir. Ve bir ısı şoku bakterileri DNA’yı almaya zorlar. Daha sonra bakteriler, bazı bakterilerin büyümesini destekleyen ve diğerlerinin büyümesini engelleyen içerik maddeleriyle oluşturulan seçim ortamlarında büyütülür. Yalnızca plazmidin kopyalarını yapan bakteriler seçim ortamı üzerinde hayatta kalır ve tek bir hücreden türetilen görünür bakteri üreme noktaları şeklindeki koloniler halinde çoğalırlar.

13.13:

Bakteriyel Dönüşüm

1928'de bakteriyolog Frederick Griffith, Streptococcus pneumoniae bakterilerinin neden olduğu zatürre için bir aşı üzerinde çalıştı. Griffith farelerde iki pnömoni suşu üzerinde çalıştı: biri patojenik diğeri patojenik değil. Yalnızca patojenik suş, konakçı fareleri öldürdü.

Griffith, patojenik suşu öldürdüğünde ve kalıntılarını canlı, patojenik olmayan suşla karıştırdığında beklenmedik bir keşif yaptı. Karışım sadece konakçı fareleri öldürmekle kalmadı, aynı zamanda patojenik yavrular üreten canlı patojenik bakterileri de içeriyordu. Griffith, patojenik olmayan suşun, onu patojenik suşa dönüştüren ölü patojenik suştan bir şey aldığı sonucuna vardı; bunu dönüştürücü ilke olarak adlandırdı.

Griffith'in çalışmaları sırasında, genetik materyalin kimliğiyle ilgili hararetli tartışmalar vardı. Pek çok erken kanıt, proteinleri kalıtsal moleküller olarak gösterdi. Griffith’ in bakteriyel dönüşüm üzerine deneyleri, DNA'nın genetik materyal olduğunu gösteren en eski verilerden bazılarını sağladı.

Bakteriler, dönüşüm yoluyla dış DNA'yı birleştirir. Dönüşüm doğal olarak gerçekleşir, ancak aynı zamanda laboratuvarlarda da sıklıkla DNA'yı klonlamak için indüklenir. Bilim adamları, belirli bir geni klonlamak için, geni bağımsız olarak kopyalayabilen dairesel bir DNA molekülü olan bir plazmitin içine yerleştirebilirler. Plazmid genellikle bir antibiyotik direnç geni içerir. Bakteriler, plazmiti dönüşüm yoluyla alır. Bilim adamları daha sonra bakterileri antibiyotiklere maruz bırakırlar. Hayatta kalan bakteri kolonileri plazmidi içermelidir çünkü plazmit bir antibiyotik direnç geni içerir. DNA analizi, genin plazmiddeki varlığını doğrulayabilir. İstenilen gene sahip bakteri kolonileri çoğalır ve daha fazla plazmit veya protein yapmak için kullanılabilir.

Bakteriler neden yabancı DNA'yı alır? Cinsel olarak üreyen organizmalardan farklı olarak, bakteriler esasen kendilerini klonlarlar. İkili fisyon adı verilen bu üreme yöntemi, genetik çeşitlilik için çok az fırsat sunuyor. Mutasyonlar bir miktar çeşitlilik getirse de, çoğu mutasyon zararlıdır. Dönüşüm, konjugasyon ve transdüksiyon yoluyla genlerin paylaşılması prokaryotların evrimleşmesine olanak tanır.

Suggested Reading

Lerminiaux, Nicole A., and Andrew D.s. Cameron. 2019. “Horizontal Transfer of Antibiotic Resistance Genes in Clinical Environments.” Canadian Journal of Microbiology 65 (1): 34–44. [Source]

Sieber, Karsten B., Robin E. Bromley, and Julie C. Dunning Hotopp. 2017. “Lateral Gene Transfer between Prokaryotes and Eukaryotes.” Experimental Cell Research 358 (2): 421–26. [Source]