Summary

Synthese und Kalibrierung von Phosphorescent Nanoprobes für Oxygen Imaging in Biological Systems

Published: March 03, 2010
doi:

Summary

Wir präsentieren Prinzipien der Sauerstoff-Messungen durch Phosphoreszenz Abschrecken und Überprüfung Gestaltung der Porphyrin-basierte dendritische Nanosensoren für Sauerstoff Bildgebung in biologischen Systemen.

Abstract

Sauerstoff-Messung durch Phosphoreszenz Abschrecken [1, 2] besteht aus folgenden Schritten: 1) wird die Sonde in das Medium von Interesse (zB Blut oder interstitielle Flüssigkeit) geliefert, 2) das Objekt wird mit Licht einer geeigneten Wellenlänge beleuchtet, um zu begeistern die Sonde in die Triplett-Zustand, 3) die emittierte Phosphoreszenz gesammelt, und ihr zeitlicher Verlauf wird analysiert, um die Phosphoreszenz Lebensdauer, die in die Sauerstoff-Konzentration (oder Partialdruck pO umgewandelt wird Ertrag<sub> 2</sub>). Die Sonde muss nicht mit der biologischen Umgebung interagiert und in einigen Fällen bis 4 sein) ausgeschieden aus dem Medium auf der Messung der Fertigstellung. Jeder dieser Schritte stellt Anforderungen an das molekulare Design von den phosphoreszierenden Sonden, die die einzige invasive Komponente des Messprotokolls darstellen. Hier beschreiben wir das Design von dendritischen phosphoreszierende Nanosensoren für Sauerstoff-Messungen in biologischen Systemen. Die Sonden bestehen aus Pt oder Pd-Porphyrin-basierte polyarylglycine (AG)-Dendrimere, peripher mit Polyethylenglykol (PEG)-Reste modifiziert. Für eine effektive Zwei-Photonen-Anregung kann Termini der Dendrimere mit Zwei-Photonen-Antenne Chromophore, die die Anregungsenergie einzufangen und leiten es in den Triplett-Kerne der Sonden über intramolekulare FRET (Förster Resonance Energy Transfer) geändert werden. Wir beschreiben die wichtigsten photophysikalischen Eigenschaften der Sonden und präsentieren detaillierte Kalibrierprotokolle.

Protocol

1. Allgemeine Beschreibung der Sauerstoff Messprotokoll (Dieser Abschnitt hat keine Wirkung, ist aber von entscheidender Bedeutung für das Verständnis der Rest des Papiers. Es gefilmt kann zum Beispiel sein, als eine Folge von ein paar Power Point Folien, begleitet von der Stimme.) 1,1) Die Sonde in das Medium von Interesse geliefert wird, zum Beispiel im Blut oder interstitielle Flüssigkeit eines Tieres injiziert. 1,2) Das Objekt (O…

Acknowledgements

Unterstützung der Zuschüsse EB007279 und HL081273 von der NIH USA gedankt.

Materials

Abbreviation Full name
NMP N-methylpyrrolidinone
TFA trifluoroacetic acid
DIPEA diisopropylethylamine
HBTU 2-(1H-benzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluronium hexafluorophosphate
DMSO dimethylsulfoxide
CDMT CDMT=1-chloro-3,5-dimethoxytriazine
NMM NMM=N-methylmorfoline

References

  1. Vanderkooi, J. M., Maniara, G., Green, T. J., Wilson, D. F. An optical method for measurement of dioxygen concentration based on quenching of phosphorescence. J. Biol. Chem. 262, 5476-5482 (1987).
  2. Rumsey, W. L., Vanderkooi, J. M., Wilson, D. F. Imaging of phosphorescence: A novel method for measuring the distribution of oxygen in perfused tissue. Science. 241, 1649-1651 (1988).
  3. Lebedev, A. Y. Dendritic phosphorescent probes for oxygen Imaging in biological systems. Acs Applied Materials and Interfaces. 1, 1292-1304 (2009).
  4. Finikova, O. S., Cheprakov, A. V., Beletskaya, I. P., Carroll, P. J., Vinogradov, S. A. Novel versatile synthesis of substituted tetrabenzoporphyrins. Journal of Organic Chemistry. 69, 522-535 (2004).
  5. Lindsey, J. S., Schreiman, I. C., Hsu, H. C., Kearney, P. C., Marguerettaz, A. M. Rothemund and Adler-Longo Reactions revisited: Synthesis of tetraphenylporphyrins under equilibrium conditions. Journal of Organic Chemistry. 52, 827-836 (1987).
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Cite This Article
Sinks, L. E., Roussakis, E., Esipova, T. V., Vinogradov, S. A. Synthesis and Calibration of Phosphorescent Nanoprobes for Oxygen Imaging in Biological Systems. J. Vis. Exp. (37), e1731, doi:10.3791/1731 (2010).

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