Nous présentons les principes de mesures d'oxygène par trempe phosphorescence et la conception de la révision à base de porphyrine nanocapteurs dendritiques pour l'imagerie d'oxygène dans les systèmes biologiques.
Abstract
Mesure de l'oxygène par trempe phosphorescence [1, 2] est constituée des étapes suivantes: 1) la sonde est livrée dans le milieu d'intérêt (par exemple le sang ou le liquide interstitiel), 2) l'objet est éclairé par une lumière de longueur d'onde appropriée afin d'exciter la sonde dans son état triplet, 3) la phosphorescence émise est collectée, et son cours du temps est analysée pour obtenir la durée de vie de phosphorescence, qui est converti en la concentration d'oxygène (ou pression partielle, pO<sub> 2</sub>). La sonde ne doit pas interagir avec l'environnement biologique et, dans certains cas être 4) excrété dans le milieu lors de l'achèvement de mesure. Chacune de ces étapes impose des exigences sur la conception moléculaire des sondes phosphorescents, qui constituent la seule composante invasive du protocole de mesure. Ici nous passons en revue la conception de dendritiques nanocapteurs phosphorescentes pour les mesures de l'oxygène dans les systèmes biologiques. Les sondes sont constituées de Pt ou Pd à base de porphyrine polyarylglycine (AG) dendrimères, modifié en périphérie avec du polyéthylène glycol (PEG) de résidus. Pour effective excitation à deux photons, terminus des dendrimères peuvent être modifiées avec deux photons chromophores antennes qui captent l'énergie d'excitation et de les diriger vers les noyaux triplet des sondes FRET intramoléculaire via (Transfert Förster Resonance Energy). Nous décrivons les principales propriétés photophysiques des sondes et de présenter des protocoles d'étalonnage détaillé.
Protocol
1. Description générale du protocole de mesure de l'oxygène (Cette section ne dispose pas de toute action, mais elle est cruciale pour comprendre le reste du papier. Il peut être filmé, par exemple, comme une séquence de quelques diapositives Power Point, accompagné par la voix.) 1.1) La sonde est livrée dans le milieu de l'intérêt, par exemple, injecté dans le sang ou de liquide interstitiel d'un animal. 1.2) L&#…
Acknowledgements
Soutien de l'EB007279 subventions et HL081273 NIH des Etats-Unis est grandement appréciée.
Sinks, L. E., Roussakis, E., Esipova, T. V., Vinogradov, S. A. Synthesis and Calibration of Phosphorescent Nanoprobes for Oxygen Imaging in Biological Systems. J. Vis. Exp. (37), e1731, doi:10.3791/1731 (2010).