هذه الورقة توضح أساليب مختلفة من النمو<em> الزائفة الزنجارية</em> الأغشية الحيوية على الخلايا المستنبتة الهوائية الظهارية البشرية. ويمكن تكييف هذه البروتوكولات لدراسة الجوانب المختلفة لتشكيل بيوفيلم ، بما في ذلك التصور للبيوفيلم ، وتلطيخ لبيوفيلم ، وقياس مستعمرة (CFU) من بيوفيلم ، ودراسة السمسة بيوفيلم.
وقد ارتبطت الأغشية الحيوية البكتيرية مع عدد من الأمراض التي تصيب الإنسان المختلفة ، ولكن عموما كانت التنمية بيوفيلم درس على الأسطح غير الحية. في هذه الورقة ، ونحن تصف بروتوكولات لتشكيل الأغشية الزائفة الزنجارية على الخلايا الظهارية البشرية الهوائية (خلايا CFBE) نمت في الثقافة. في الأسلوب الأول (يطلق عليه نموذج ثابت بيوفيلم المشارك الثقافة) ، P. وحضنت الزنجارية مع الخلايا كما نمت CFBE monolayers متكدسة على مستوى لوحات زراعة الأنسجة. على الرغم من أن البكتيريا السامة جدا على الخلايا الظهارية ، وبالإضافة إلى ذلك التأخير أرجينين تدمير المونولاير طويلة بما يكفي لتشكيل الأغشية الحيوية على الخلايا CFBE. الأسلوب الثاني (وهو ما يسمى التدفق الخلوي بيوفيلم النموذجي المشارك الثقافة) ، ويشمل التكيف من خلية جهاز بيوفيلم التدفق ، والتي كثيرا ما تستخدم في البحوث بيوفيلم ، ساترة لاستيعاب الزجاج دعم أحادي الطبقة من الخلايا CFBE متموجة. هذا هو تحصين المونولاير مع P. الزنجارية ومضخة تمعجية تدفقات ثم متوسطة جديدة عبر الخلايا. في كلا النظامين ، الأغشية الحيوية البكتيرية شكل داخل 6-8 ساعات بعد الحقن. ومما يعزز التصور للبيوفيلم عن طريق استخدام P. سلالات الزنجارية constitutively معربا عن بروتين الفلورية الخضراء (GFP). وتدفق ثابت الخلية المقايسات بيوفيلم المشارك الثقافة هي نظم في وقت مبكر نموذجا للP. العدوى الزنجارية في الرئة الكيسي (CF) التليف ، وتسمح هذه التقنيات مختلف جوانب P. أن يكون درس الزنجارية تشكيل بيوفيلم والفوعة ، بما في ذلك السمسة بيوفيلم ، وقياس CFU بيوفيلم ، وتلطيخ والرؤية وبيوفيلم.
الأغشية الحيوية هي مجتمعات من البكتيريا التي تشكل استجابة للمؤثرات البيئية. هذه الاشارات البيئية تؤدي إلى تغييرات تنظيمية عالمية ضمن كل بكتيريا ، مما أدى إلى الربط إلى السطح ، والتجميع ، وإنتاج exopolysaccharides ، والظواهر الأخرى مثل زيادة مقاومة المضادات الحيوية 10. ?…
The authors have nothing to disclose.
نود أن نشكر G. O تول عن التوجيه والاقتراحات في تطوير هذه النماذج. وأيد هذا العمل من قبل مؤسسة التليف الكيسي (ANDERS06F0 لGGA ، وSTANTO07RO STANTO08GA لوبا) ، والمعاهد الوطنية للصحة (T32A107363 لGGA وR01 – HL074175 لوبا) ، والمركز الوطني لبحوث الموارد مراكز البحوث الطبية الحيوية للتميز (كوبر P20 – RR018787 لوبا).
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
FCS2 (Focht Live-Cell) chamber | Bioptechs, Butler, PA | 060319131616 | ||
FCS2 chamber controller | Bioptechs, Butler, PA | 060319-2-0303 | ||
40 mm glass coverslips | Bioptechs, Butler, PA | PH 40-1313-0319 | ||
MEM | Mediatech, Manassass, VA | #10-010-CV | ||
MEM without phenol red | Mediatech, Manassass, VA | Mediatech, Manassass, VA |