Purificazione del DNA plasmidi da colonie batteriche Utilizzando il kit Qiagen Miniprep

Abstract

Purificazione del DNA plasmidico da E. coli è una tecnica di base per la clonazione molecolare. Purificazione su piccola scala (miniprep) da meno di 5 ml di coltura batterica è un modo rapido per la verifica clone o isolamento del DNA, seguita da ulteriori reazioni enzimatiche (reazione a catena della polimerasi e la digestione enzimatica di restrizione). Qui, il video-registrato le procedure generali di miniprep attraverso il QIAGEN QIAprep 8 Kit Miniprep, con l'obiettivo di introdurre questa tecnica altamente efficiente per i principianti generale di tecniche di biologia molecolare. L'intera procedura si basa sulla lisi alcalina delle cellule di E. coli seguito da adsorbimento del DNA su silice in presenza di sale. Si compone di tre fasi: 1) la preparazione e la rimozione di un lisato batterico, 2) l'adsorbimento del DNA sulla membrana QIAprep, 3) lavaggio e l'eluizione del DNA plasmidico. Tutti i passaggi vengono eseguiti senza l'utilizzo di fenolo, cloroformio, CsCl, bromuro di etidio, senza precipitazione e alcool. Di solito ci vogliono meno di 2 ore per completare l'intera procedura.