Zuiveren Plasmide DNA van bacteriële kolonies Met behulp van de Qiagen Miniprep Kit

Abstract

Plasmide DNA-zuivering van E. coli is een kern-techniek voor moleculaire klonen. Kleinschalige zuivering (Miniprep) van minder dan 5 ml bacteriecultuur is een snelle manier voor het klonen verificatie of DNA-isolatie, gevolgd door verdere enzymatische reacties (polymerase kettingreactie en restrictie-enzym digestie). Hier hebben we video opgenomen van de algemene procedures van Miniprep door de QIAGEN's QIAprep 8 Miniprep Kit, gericht op de invoering van deze zeer efficiënte techniek om de algemene beginners voor moleculaire biologische technieken. De hele procedure is gebaseerd op alkaline lysis van E. coli-cellen gevolgd door adsorptie van DNA op silica in de aanwezigheid van hoge zout. Het bestaat uit drie stappen: 1) de voorbereiding en afwikkeling van een bacteriële lysaat, 2) adsorptie van DNA op het membraan QIAprep, 3) het wassen en elutie van het plasmide DNA. Alle stappen worden uitgevoerd zonder het gebruik van fenol, chloroform, CsCl, ethidiumbromide, en zonder alcohol neerslag. Het duurt meestal minder dan 2 uur tot het einde van de gehele procedure.