Qiagen Miniprep किट का उपयोग बैक्टीरियल कालोनियों से प्लास्मिड डीएनए शुद्ध

Abstract

ई. कोलाई से प्लास्मिड डीएनए शुद्धीकरण आणविक क्लोनिंग के लिए एक कोर तकनीक है. बैक्टीरियल संस्कृति के कम से कम 5 मिलीलीटर से लघु शुद्धि (miniprep) क्लोन सत्यापन या डीएनए अलगाव, आगे एंजाइमी प्रतिक्रियाओं (पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन और प्रतिबंध एंजाइम पाचन) द्वारा पीछा के लिए एक त्वरित तरीका है. यहाँ, हम QIAGEN QIAprep 8 Miniprep किट के माध्यम से miniprep की सामान्य प्रक्रियाओं, आण्विक जीव विज्ञान तकनीक के लिए यह सामान्य शुरुआती के लिए इस अत्यधिक कुशल तकनीक शुरू करने के लिए लक्ष्य वीडियो दर्ज की. पूरी प्रक्रिया सिलिका पर डीएनए के सोखना द्वारा उच्च नमक की उपस्थिति में पीछा ई. कोलाई कोशिकाओं के alkaline lysis पर आधारित है. यह तीन चरणों के होते हैं: 1) और एक जीवाणु lysate, 2) QIAprep झिल्ली, 3) धोने और प्लास्मिड डीएनए के elution पर डीएनए के सोखना की तैयारी समाशोधन. सभी चरणों phenol, क्लोरोफॉर्म, CSCL, ethidium ब्रोमाइड, के उपयोग के बिना और शराब वर्षण के बिना प्रदर्शन कर रहे हैं. यह आमतौर पर कम से कम 2 घंटे लगते हैं पूरी प्रक्रिया खत्म.