キアゲンミニプレップキットを用いて細菌のコロニーからプラスミドDNAを精製

Abstract

大腸菌からのプラスミドDNAの精製は、分子クローニングのためのコア技術です。細菌培養の100分の5以下mlの小規模の精製（ミニプレップ）は、さらに酵素反応（ポリメラーゼ連鎖反応および制限酵素消化）に続くクローンの検証またはDNAの分離のための手っ取り早い方法です。ここで、我々は分子生物学的手法の一般的な初心者にはこの非常に効率的な手法を導入することを目指し、QIAGENのQIAprep 8ミニプレップキットを介してミニプレップの一般的な手順をビデオ記録した。全体の手順は、高い塩の存在下でシリカにDNAの吸着に続いて大腸菌細胞のアルカリ溶解に基づいています。 1）QIAprep膜、3）洗浄し、プラスミドDNAの溶出にDNAの吸着細菌溶解物、2）の準備とクリア：それは3つのステップで構成されています。すべてのステップは、フェノール、クロロホルム、塩化セシウム、臭化エチジウムを使用せずに行われ、アルコール沈殿せずにされています。それは通常、この手順全体を完了するために2時間未満かかります。