Qiagen Miniprep 키트를 사용하여 세균의 플라스미드 식민지에서 DNA를 정화

Abstract

E. 대장균에서 플라스미드 DNA 정제는 분자 클로닝을위한 핵심 기술입니다. 세균성 문화 미만 5 ML에서 소규모 정화 (miniprep)는 더 효소 반응 (중합 효소의 연쇄 반응 및 제한 효소 분해)에 의해 다음 클론 확인 또는 DNA의 격리를위한 빠른 방법입니다. 여기, 우리는 분자 생물학 기술에 대한 일반적인 초보자에게 매우 효율적인 기술을 도입을 목표로 QIAGEN의 QIAprep 8 Miniprep 키트를 통해 miniprep의 일반적인 절차를 영상 기록했다. 전체 절차는 높은 소금의 면전에서 이산화 규소에 DNA의 흡착 다음 E. 대장균 세포의 알칼리성 용해에 따라 달라집니다. 1) QIAprep 막, 3) 세정과 플라스미드 DNA의 용출에 DNA의 흡착 세균성 lysate, 2)의 준비 및 삭제 : 그것은 세 단계로 구성되어 있습니다. 모든 단계 페놀, 클로로포름, CsCl, ethidium의 브로마이드의 사용없이 알코올 석출하지 않고 수행됩니다. 그것은 일반적으로 모든 절차를 완료 미만 2 시간 정도 소요됩니다.