Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

טיהור פלסמיד דנ"א מ מושבות חיידקים באמצעות Miniprep Qiagen Kit

doi: 10.3791/247 Published: July 29, 2007

Summary

Abstract

טיהור פלסמיד דנ"א מן החיידק היא טכניקה הליבה של שיבוט מולקולרי. טיהור בקנה מידה קטן (miniprep) מתוך פחות מ 5 מ"ל של תרבית החיידקים הוא דרך מהירה לצורך אימות לשבט או בידוד ה-DNA, ואחריו עוד תגובות אנזימטיות (שרשרת פולימראז התגובה אנזים העיכול הגבלה). הנה, אנחנו וידאו מוקלט הנהלים הכללי של miniprep באמצעות ערכת QIAprep של QIAGEN Miniprep 8, במטרה להציג את הטכניקה היעילה ביותר על כללי למתחילים טכניקות הביולוגיה המולקולרית. ההליך כולו מבוסס על תמוגה אלקליין של תאים E. coli ואחריו ספיחה של ה-DNA על סיליקה בנוכחות מלח גבוהה. הוא מורכב משלושה שלבים: 1) הכנה וניקוי של lysate חיידקי, 2) ספיחה של ה-DNA על הממברנה QIAprep, 3) כביסה elution של DNA פלסמיד. כל הצעדים נעשים ללא שימוש פנול, כלורופורם, CsCl, ברומיד ethidium, ללא משקעים אלכוהול. בדרך כלל לוקח פחות מ 2 שעות כדי לסיים את ההליך כולו.

טיהור פלסמיד דנ"א מ מושבות חיידקים באמצעות Miniprep Qiagen Kit
Play Video
PDF DOI

Cite this Article

Zhang, S., Cahalan, M. D. Purifying Plasmid DNA from Bacterial Colonies Using the Qiagen Miniprep Kit. J. Vis. Exp. (6), e247, doi:10.3791/247 (2007).More

Zhang, S., Cahalan, M. D. Purifying Plasmid DNA from Bacterial Colonies Using the Qiagen Miniprep Kit. J. Vis. Exp. (6), e247, doi:10.3791/247 (2007).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter