Очищающий плазмидной ДНК из бактериальных колоний Использование Qiagen Miniprep Kit

Abstract

Плазмиды очистки ДНК из E.coli, является одним из основных техника для молекулярного клонирования. Малый очистки шкале (miniprep) с менее чем 5 мл бактериальной культуры быстрый способ для проверки клона или выделения ДНК, после чего дальнейшее ферментативных реакций (полимеразной цепной реакции и пищеварение энзима ограничения). Здесь мы видеокассету общей процедуры miniprep через QIAprep QIAGEN в 8 Kit Miniprep, с целью введения этого высокоэффективный метод к общему для начинающих методов молекулярной биологии. Вся процедура основана на щелочных лизис клетки кишечной палочки последующей адсорбцией ДНК на кремнезема в присутствии высоких соли. Она состоит из трех этапов: 1) подготовка и очистка бактериальной лизат, 2) адсорбции ДНК на мембраны QIAprep, 3) мытье и элюирования плазмидной ДНК. Все действия выполняются без применения фенол, хлороформ, CsCl, бромистый этидий, и без алкоголя осадков. Обычно это занимает менее 2 часов, чтобы закончить всю процедуру.