Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

Purifying Plasmid DNA från kolonier Använda Qiagen Miniprep Kit

doi: 10.3791/247 Published: July 29, 2007

Summary

Abstract

Plasmid DNA-rening från E. coli är en central teknik för molekylär kloning. Småskalig rening (miniprep) från mindre än 5 ml bakteriekultur är ett snabbt sätt för klon verifiering eller isolering av DNA, följt av ytterligare enzymatiska reaktioner (polymeraskedjereaktion och restriktionsenzymanalys matsmältningen). Här har vi video-inspelade de allmänna förfarandena i miniprep genom QIAGEN är QIAprep 8 Miniprep Kit, som syftar till att införa detta mycket effektiv teknik för att den allmänna nybörjare för molekylärbiologisk teknik. Hela proceduren är baserad på alkalisk lys av E. coli-celler följt av adsorption av DNA på kisel i närvaro av höga salt. Den består av tre steg: 1) förberedelse och clearing av en bakteriell lysat, 2) adsorption av DNA på QIAprep membran, 3) tvättning och eluering av plasmid-DNA. Alla steg utförs utan användning av fenol, kloroform, CsCl, etidiumbromid och utan alkohol nederbörd. Det tar vanligtvis mindre än 2 timmar att slutföra hela förfarandet.

Purifying Plasmid DNA från kolonier Använda Qiagen Miniprep Kit
Play Video
PDF DOI

Cite this Article

Zhang, S., Cahalan, M. D. Purifying Plasmid DNA from Bacterial Colonies Using the Qiagen Miniprep Kit. J. Vis. Exp. (6), e247, doi:10.3791/247 (2007).More

Zhang, S., Cahalan, M. D. Purifying Plasmid DNA from Bacterial Colonies Using the Qiagen Miniprep Kit. J. Vis. Exp. (6), e247, doi:10.3791/247 (2007).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter