Ein optimiertes Protokoll für die Isolierung von Stammzellen aus der Maus Speicheldrüse beschrieben. Die Methode nutzt enzymatische und mechanische Verdauung, und erlaubt Isolierung salispheres enthaltenden Zellen mit Eigenschaften von Stammzellen.
Ältere Speicheldrüsen von Mensch und Maus Herkunft aus einem Minimum von fünf Zelltypen, von denen jede die Produktion und Ausschüttung von Speichel erleichtert in die Mundhöhle. Serösen und Schleimhäuten Azinuszellen sind die Protein-und Schleim produzieren Fabriken der Drüse bzw. und stellen den Ursprung der Speichelproduktion. Sobald synthetisiert werden die verschiedenen enzymatischen und anderen proteinhaltigen Komponenten des Speichels durch eine Reihe von duktalen Zellen, die epithelial-Art-Morphologie abgesondert wird, bis die eventuellen Ausweisung der Speichel durch einen großen Kanal in der Mundhöhle. Die Zusammensetzung des Speichels wird auch durch den duktalen Zellen während dieses Prozesses verändert.
In der Manifestation von Krankheiten wie Sjögren-Syndrom, und in einigen klinischen Situationen wie Strahlentherapie bei Kopf-Hals-Tumoren, die Speichelproduktion durch die Drüsen ist dramatisch 1,2 reduziert. Die daraus resultierenden Xerostomie, ein subjektives Gefühl der Mundtrockenheit, betrifft nicht nur die Fähigkeit des Patienten zu schlucken und sprechen, sondern fördert auch die Entwicklung von Karies und kann sozial schwächenden für den Erkrankten.
Die Wiederherstellung der Speichel-Produktion in den oben genannten klinischen Bedingungen stellt daher einen ungedeckten klinischen Bedarf, und als solche haben mehrere Studien die Regenerationsfähigkeit der Speicheldrüsen 3-5 gezeigt. Im Anschluss an die Isolierung von Stammzellen, wie Populationen von Zellen aus verschiedenen Geweben innerhalb der Maus und menschlichen Körpern 6-8, haben wir gezeigt, mit dem beschriebenen Verfahren, dass Stammzellen aus der Maus Speicheldrüsen isoliert verwendet werden, um die Speichelproduktion in bestrahlten Speicheldrüsen zu retten Drüsen 9,10. Diese Entdeckung ebnet den Weg für die Entwicklung von Stammzell-basierten Therapien für die Behandlung von Xerostomie Verhältnisse beim Menschen, aber auch für die Erforschung der Speicheldrüse als Mikroumgebung enthaltenden Zellen mit multipotenten selbst erneuernde Fähigkeiten.
Die Gewebekultur hier beschriebene Methode stellt eine reproduzierbare Protokoll für die Isolierung von Stammzellen mit salispheres aus den Speicheldrüsen der Mäuse. Studien unter Verwendung von Zellen auf diese Weise isoliert wurden, die Regenerationsfähigkeit der Speicheldrüse Stammzellen Zellen 9 hervorgehoben. Die Transplantation von hundert von c-Kit +-Zellen aus dem salispheres abgeleitet induzierte funktionelle Erholung von bestrahlten Maus Speicheldrüsen. Diese Daten sind spannend und bieten einen Ausgangspunkt für die Untersuchung von Stammzell-Therapie für Xerostomie. Viele Wege bleiben jedoch untersucht werden, einschließlich der vollständigen Markerprotein Expressionsprofil der Stammzellen, die Fähigkeit der submandibularis, um die Funktion der bestrahlten Parotis Speicheldrüsen und umgekehrt zu retten, und die Charakterisierung der putativen in vivo Stammzellnische der der Zellen. Letztlich ist die Übersetzung dieses Protokoll für die menschliche Gewebeproben und die anschließende Potenzial für die Therapie der Xerostomie bei menschlichen Patienten unter Verwendung der isolierten Zellen der aufregendsten Anwendung der beschriebenen Methode.
The authors have nothing to disclose.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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Hyaluronidase | Sigma | H3506 | Store at – 20 °C | |
Collagenase II | Gibco | 17101-015 | Store at 4 °C | |
Epidermal Growth Factor-2 | Sigma | E9644 | Make a stock of 10 μg / mL in phosphate buffered saline (PBS). Store at – 20 °C in single use aliquots. | |
Fibroblast Growth Factor-2 | Sigma | F0291 | Make stock of 25 μg / mL in PBS. Store at – 20 °C in single use aliquots. | |
N2 supplement | Gibco | 17502-048 | As manufacturer instructions. | |
Insulin | Sigma | I6634 | Make stock of 2 mg / mL in tap water. Adjust water to pH 2-3 using glacial acetic acid prior to dissolving. | |
Dexamethasone | Sigma | D4902 | ||
100 μM pore-size sterile cell strainers | BD Falcon | 352360 | ||
Polystyrene round-bottomed tubes with cell strainer caps (50 μM pore size) | BD Falcon | 352235 |