マウス唾液腺由来の幹細胞の単離のため最適化されたプロトコルが記述されています。方法は、酵素と機械的な消化を採用しており、幹細胞の特性を持つ細胞を含むsalispheresの分離を可能にします。
ヒトとマウスの両方由来の成熟した唾液腺は口腔内に唾液の生産と排泄を促進するそれぞれの5つの細胞型、の最小値を含んで。漿液性と粘液腺房細胞は、それぞれ蛋白質と腺の粘液産生工場であり、唾液の生産の原点を表しています。一度合成さ、唾液の様々な酵素や他のタンパク質性の成分が口の中の空洞に一つの主要なダクトを介して唾液の最終的な追放されるまで、上皮型の形態をもつ管細胞の一連の分泌される。唾液の組成物はまた、このプロセス中に乳管細胞によって変更されます。
このようなシェーグレン症候群などの疾患の症状で、そのような頭頸部癌に対する放射線治療のようないくつかの臨床状況において、腺によって唾液の生産が飛躍的に1,2を削減されます。結果として口腔乾燥、口内乾燥の主観的な感覚は、飲み込むと話すように患者のだけでなく、能力に影響を与えるだけでなく、虫歯の開発を奨励し、被害者のための社会的に衰弱させることができます。
上記の臨床症状で唾液の生産の回復は、したがって、満たされていない臨床上の必要性を表し、そしてそのようないくつかの研究では、唾液腺3-5の再生能力を実証しているとして。幹細胞のようなマウスおよびヒトの体6から8までの様々な組織からの細胞集団の単離にさらに、我々はマウス唾液腺から単離された幹細胞を照射唾液で唾液の産生を救出するために使用できることを説明した方法を用いて示されている腺9,10。この発見は、多能性自己再生機能を持つ細胞を含む微小環境としての唾液腺の探査のためにも、ヒトのxerostomic状態の治療に幹細胞ベースの治療法の開発のための道を開く、と。
ここで説明した組織培養法は、幹細胞を含むマウスの唾液腺からsalispheresを単離するための再現可能なプロトコルを表します。この方法で単離した細胞を用いた研究は、9唾液腺幹細胞の再生能力を強調している。 salispheresから派生したのc – Kit +細胞の百の移植は、照射したマウス唾液腺の機能回復を誘導した。これらのデータは、エキサイティングであり、口腔乾燥のための幹細胞ベースの治療法の調査の出発点を提供しています。多くの道は、幹細胞の完全なマーカータンパク質の発現プロファイル、照射された耳下腺唾液腺およびその逆の機能を救出するために顎下腺の能力、とのin vivoで幹細胞のニッチにおける推定の特性評価を含む、しかし調査されずに残っている細胞。最終的に、ヒトの組織サンプルや単離細胞を用いて、ヒトの患者における口腔乾燥症の治療のためのその後の可能性に、このプロトコルの変換は、記載された方法の中で最もエキサイティングなアプリケーションです。
The authors have nothing to disclose.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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Hyaluronidase | Sigma | H3506 | Store at – 20 °C | |
Collagenase II | Gibco | 17101-015 | Store at 4 °C | |
Epidermal Growth Factor-2 | Sigma | E9644 | Make a stock of 10 μg / mL in phosphate buffered saline (PBS). Store at – 20 °C in single use aliquots. | |
Fibroblast Growth Factor-2 | Sigma | F0291 | Make stock of 25 μg / mL in PBS. Store at – 20 °C in single use aliquots. | |
N2 supplement | Gibco | 17502-048 | As manufacturer instructions. | |
Insulin | Sigma | I6634 | Make stock of 2 mg / mL in tap water. Adjust water to pH 2-3 using glacial acetic acid prior to dissolving. | |
Dexamethasone | Sigma | D4902 | ||
100 μM pore-size sterile cell strainers | BD Falcon | 352360 | ||
Polystyrene round-bottomed tubes with cell strainer caps (50 μM pore size) | BD Falcon | 352235 |