Ett optimerat protokoll för isolering av stamceller från mus spottkörteln beskrivs. Metoden använder enzymatiska och mekaniska matsmältningen, och tillåter isolering av salispheres som innehåller celler med egenskaper av stamceller.
Mogna spottkörtlar för både människors och mus ursprung bestå av minst fem celltyper, som alla underlättar produktion och utsöndring av saliv i munhålan. Serös och slemhinnor acinar celler är det protein och slemhinnor producerar fabriker av körteln respektive och representerar ursprung salivproduktion. När syntetiseras, är de olika enzymatiska och andra proteinrika komponenter i saliv utsöndras genom en serie av duktal celler med epiteliala-typ morfologi, tills den slutligen fördrivningen av saliv genom en stor kanal in i hålrummet i munnen. Sammansättningen av saliven också ändras av duktal celler under denna process.
I manifestationen av sjukdomar som Sjögrens syndrom och i vissa kliniska situationer såsom strålbehandling för huvud-och halscancer salivproduktion från körtlar minskar dramatiskt 1,2. Den resulterande muntorrhet, en subjektiv känsla av muntorrhet, påverkar inte bara patientens förmåga att svälja och tala, utan främjar också utvecklingen av karies och kan vara socialt handikappande för patienten.
Restaureringen av salivproduktion i de ovan nämnda kliniska förhållanden utgör därför en otillfredsställda kliniska behov och som sådan ett flertal studier har visat på förnyelseförmåga spottkörtlarna 3-5. Vidare till isolering av stamceller-liknande populationer av celler från olika vävnader i musen och mänskliga kroppar 6-8 har vi visat med hjälp av den beskrivna metoden att stamceller isolerade från musen spottkörtlar kan användas för att rädda salivproduktion i bestrålade saliv körtlar 9,10. Denna upptäckt banar väg för utvecklingen av stamceller terapier för behandling av xerostomic förhållanden hos människor, och även för undersökning av spottkörtlarna som en mikromiljö som innehåller celler med multipotenta själv förnya kapacitet.
Den vävnadskultur metod som beskrivs här utgör en reproducerbar protokoll för isolering av stamceller som innehåller salispheres från spottkörtlarna hos möss. Studier med celler som isolerats på detta sätt har lyft fram förnyelseförmåga saliv celler körtel stamceller 9. Transplantation av hundra av c-Kit + celler som härrör från salispheres inducerad funktionell återhämtning av bestrålat musen spottkörtlar. Dessa data är spännande och ge en startpunkt för utredning av stamcellsbaserad terapi för muntorrhet. Många vägar kvar att utforska dock, inklusive full markör proteinuttryck profil stamceller, förmåga submandibular körtlar att rädda funktion bestrålade parotideallymfknutorna spottkörtlar och vice versa, och karakterisering av den förmodade in vivo stamceller nisch av cellerna. Ytterst är översättningen av detta protokoll till mänskliga vävnadsprover och den efterföljande potential för behandling av muntorrhet hos människor med hjälp av isolerade celler de mest spännande tillämpning av den beskrivna metoden.
The authors have nothing to disclose.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Hyaluronidase | Sigma | H3506 | Store at – 20 °C | |
Collagenase II | Gibco | 17101-015 | Store at 4 °C | |
Epidermal Growth Factor-2 | Sigma | E9644 | Make a stock of 10 μg / mL in phosphate buffered saline (PBS). Store at – 20 °C in single use aliquots. | |
Fibroblast Growth Factor-2 | Sigma | F0291 | Make stock of 25 μg / mL in PBS. Store at – 20 °C in single use aliquots. | |
N2 supplement | Gibco | 17502-048 | As manufacturer instructions. | |
Insulin | Sigma | I6634 | Make stock of 2 mg / mL in tap water. Adjust water to pH 2-3 using glacial acetic acid prior to dissolving. | |
Dexamethasone | Sigma | D4902 | ||
100 μM pore-size sterile cell strainers | BD Falcon | 352360 | ||
Polystyrene round-bottomed tubes with cell strainer caps (50 μM pore size) | BD Falcon | 352235 |