De plus-maze åtgärder ångest-liknande beteende hos gnagare. Det finns två motsatta slutna och två motsatta öppna armar, ängsliga gnagare undvika öppna armar. Det centrala området är varken helt öppen eller stängd, så tid här är tvetydig och svår att tolka. Här en modifiering av plus-labyrinten protokoll eliminerar detta område beskrivs.
Den plus-labyrinten härleddes från det tidiga arbetet av Montgomery. Han konstaterade att råttor tenderade att undvika de öppna armar av en labyrint, föredrar de slutna sådana. Handley Mithani och Arkiv<em> Et al.</em> Utfört de första studierna på plus-mazedesign vi använder i dag, och 1987 Lister publicerade en design för användning med möss. Tid som spenderas på, och posterna i de öppna armarna är ett index av ångest, desto lägre dessa index, desto mer angelägen musen. Alternativt är en mus som tillbringar det mesta av sin tid i de slutna armarna klassas som angelägen. Ett av problemen med plus-labyrinten är att, medan tid på, och posterna i, är de öppna armar en ganska entydig mått av ångest, är tiden i det centrala området mer svårtolkad, men tiden här har klassificerats som "beslutsfattande". I många tester centrala området tid är en avsevärd del av den totala testtiden. Shepherd<em> Et al.</em> Producerat en sinnrik konstruktion för att eliminera det centrala området, som de kallade "noll-labyrinten". Men även användas av flera forskargrupper, har det aldrig varit så stor spridning eftersom plus-labyrinten. I denna artikel beskriver jag en modifiering av plus-maze design som inte bara eliminerar det centrala området men innehåller också element från andra ångest test, såsom ljus-mörk låda och tester uppkomst. Det är en linjär serie av fyra gränder, har var och en ökande anxiogena egenskaper. Det har gett liknande resultat till plus-labyrint i allmänhet. Även om det inte kan vara känsligare än plus-labyrint (mer data behövs innan en säker slutsats kan nås på denna punkt), ger det en bra bekräftelse på plus-maze resultat som skulle vara användbar när, till exempel, bara ett enda exempel på en mutant mus var tillgängliga, såsom, till exempel, i ENU-baserade mutagenes-program.
Den förhöjda plus-maze härstammar från det tidiga arbetet i Montgomery. Han observerade att råttor tenderade att undvika de öppna armar av en labyrint, föredrar de inneslutna och kära 27. Handley och Mithani, och Fil et al. 22,29 utfört de första studierna på plus-mazedesign vi använder i dag, och 1987 Lister publicerat en design för användning med mus 25. Det är nu en vanlig analys för ångestdämpande behandling 23, och flera protokoll har publicerats 36,24 http://www.jove.com/video/1088 ; http://currentprotocols.com/protocol/ph0538 .
Den förhöjda plus-labyrinten består av två motstående öppna och två motstående slutna armar skär varandra i ett centralt område, i form av ett + i plan. Procentuell tid på, och procentuella inmatning till de öppna armarna är ett indexav ångest-liknande beteende, desto lägre dessa index, desto mer orolig musen är. Alternativt är en mus som tillbringar det mesta av sin tid i de slutna armarna klassas som angelägen.
Faktor analys har visat att medan index för öppen arm aktivitet belastning tungt på en faktor som betecknas som ångest-liknande beteende, och slutna arm poster till stor del speglar motorisk aktivitet, gränserna mellan faktorer inte är definitiv, även andra faktorer såsom prospektering, riskbedömning och beslutsfattande innefattar profilen beteende på plus-labyrinten, 12,32. Tid i det centrala området är mer problematiskt att tolka, även om tid här har klassificerats som "beslutsfattande" 32. Även möss tillbringar merparten av sin tid i de slutna armarna, och relativt lite tid på de öppna armar, i många studier mycket tid spenderas i det centrala området där armarna gå. Även om detta kan utgöra beslutsunderlag 32, är det oklart i terms av ångest-liknande beteende, även om mycket angelägna möss kan förväntas för att undvika det centrala området samt de öppna armarna. Ett tidigt försök att eliminera denna tvetydiga centrala området var att konstruera en cirkulär labyrint med två slutna kvadranter omväxlande med två öppna ettor 33. I detta "noll-maze" ett djur är entydigt i en öppen (ångestökande) eller en sluten (nonanxiogenic) zonen. Men även användas av flera forskargrupper, har det aldrig varit så stor spridning eftersom plus-labyrinten. I vårt laboratorium har vi funnit att medan plus-labyrint (och efterföljande gränder) visade ångestdämpande effekter i hippocampus skadade råttor, var dessa inte sett på ett noll labyrint konstruerad precis likt Shepherd et al. 13
Den successiva gränder Apparaten var därför tagit fram med det primära syftet att eliminera den centrala delen av plus-labyrinten. Sekundärt var delar av andra tester av ångest-liknande beteende införlivas. Genom att startadjur i den bifogade gränd 1, var en framväxt komponent införs, liknande den i Stones "stovepipe" test 34. Färgen av gränderna ändras från svart (alley 1) genom grå (gränd 2) till vitt (gränder 3 och 4). Detta kommer från observationer att möss föredrar mörkare områden, såsom exemplifieras i ljus-mörker box test 11. Väggarna i de successiva gränderna också sakta sjunka i höjd, till skillnad från i plus-labyrint där det finns en abrupt övergång mellan höga murar och inga väggar. Bredden av gränderna minskar progressivt att successivt öka exponeringen av musen till högt läge i labyrinten, i samförstånd med den gradvisa minskningen i väggen höjd. Alla dessa faktorer har införlivats i ett försök att öka testets känslighet och spänner över ett bredare spektrum av ångest-liknande beteende än plus-labyrinten gör. Den successiva gränder apparat var ett försök att fästet ett bredare spektrum av ångest-liknande beteende baslinjer, i samma way att de fyra grundläggande villkoren för social interaktion testet som ursprungligen utförts av fil 17 medger detektering av subtila ändringar av ångest-liknande beteende. Arkiv, i en studie av effekterna av nikotin, bara såg skillnader i de två mellanliggande ångest-liknande beteende förhållanden, inte den högsta eller lägsta 20.
Samt plus-maze, ett annat mycket använt test av ångest-liknande beteende är det ljus och mörker ruta 11. Resultat från den ljus-mörker-box och plus-labyrinten inte alltid korrelerar med varandra 35. Det anses nu att ångest-liknande beteende är inte ett enhetligt fenomen 19. Den successiva gränder Testet kan därför mycket väl ge resultat skiljer sig från dem som erhålls med ljus-mörk låda, och möjligen även från plus-labyrinten, eftersom det är subtilt annorlunda från den senare, men skulle resultat mellan den förra och den senare förväntas att vara i stort sett desamma.
<p class="Jove_content"> Det har visats att upprepade tester på plus-labyrinten förändrar den typ av ångest observerades. 8,21 Det kan vara att utsätta ett djur för plus-labyrinten följt av successiva gränderna eliminerar förändring i typen av ångest-liknande beteende mätas om plus-labyrinten testet upprepas. Ett exempel på detta sågs då plus-labyrint och successiva gränder användes för att testa mediala prefrontala cortex-skadade och kontroll möss i ett tidsmässigt uppvägs sätt. De skadade möss visade signifikant lägre ångest-liknande beteende i båda typerna av apparater, oavsett om provning skett med de successiva gränder eller plus-labyrint först 15. Det är också möjligt att sekventiell användning av plus-labyrint och successiva gränder kan bevara känsligheten för ångestdämpande läkemedel ses när plus-labyrinten testet upprepas. 18Råttor kan också testas på en större version av de successiva gränderna. Proceduren är exakt than samma som för möss.
Som i fallet med tester för hyponeophagia, den tidigare allmänna erfarenheten av djuren, förutom förhöjd labyrint ångest-liknande beteende tester per se, kan påverka resultatet. 1,16
Sammanfattningsvis ger den successiva gränder testet generellt liknande resultat till plus-labyrinten när skador i hippocampus komplexa eller mediala prefrontala cortex är gjorda, men ytterligare arbete krävs för att bedöma effekterna av lesioner i andra hjärnområden tros vara relaterade till ångest -liknande beteende. Ibland resultat på plus-labyrinten skilja sig markant från de i de på varandra följande gränderna, ett exempel på detta är vårt arbete med Kir6.2 KO möss 14. När de testades på båda apparaterna, tillät det oss att visa att KO möss visade inte en allmän enkelriktad förändring i ångest-liknande beteende, eftersom de tillbringade mer tid än vildtyp möss på de öppna plus-maze armar (visar mindre ångest -liknande beteende), men mer tid i gränd 1 av de successiva gränder (visar ökad ångest-liknande beteende). Således kan kombinerad användning av plus-labyrint och successiva gränder eliminera falskt positiva eller falskt negativa resultat, eftersom de två testerna, även omliknande, inte är funktionellt identiska.
Liksom i plus-labyrinten, leder hyperaktivitet inte en icke-selektiv ökning av antalet inmatade gränder. Studier har visat att organisationen av beteendet hos möss varierar oberoende av aktivitet 28. Medial septala skadade råttor, som visade sig vara markant hyperaktiva i ett separat test i photobeam burar aktivitet övervakning visade bara avsevärt större poster i gränder 2 och 3,. Inträden gränder 1 och 4 var inte annorlunda kontroller 5 Så mindre ängsliga septal skadade råttor var skytteltrafik fram och tillbaka mellan de två måttligt anxiogena områden av de successiva gränder, visar vad apparaten var utformad för att upptäcka, det vill säga deras ställning på ett spektrum av ångest. Om de hade varit ännu mindre orolig, skulle en ökning av korsningar mellan gränder 3 och 4 har setts.
Andra bevis som hyperaktivitet inte leder till ett falskt positivt på den successiva gränder testet är att råttor med rygg hippocampus skador är hyperaktiva men visar inte ångestdämpande effekter i de successiva gränderna 7. I en relaterad prov med linjär apparater, svart-vita gränd testet, GluRA KO kvinnliga möss visar snarare mer ångest-liknande beteende än kontroller medan män är likvärdiga med kontrollerna, men båda könen är markant hyperaktiva 3. Kir6.2 KO möss var mer aktiva i sina hem burar än vildtypmöss men visade les ångest i de successiva gränderna 14. Noterbart hoppade 8 KO möss eller föll av plus-labyrinten men ingen från de successiva gränderna.
En begränsning hos de successiva gränder testet såsom för närvarande används är att med tanke på varierande färgen på golvet, skulle video-tracking system vara svårt att använda. Emellertid kunde golvet förmodligen målas en enhetlig färg som färg är endast en av de faktorer i anordningen som genererar ångest.
nt "> De successiva gränder Testet är dock osannolikt att inte drabbas av variabiliteten problem med liknande etologiskt baserade test som plus-maze 10,23, men testa ett parti djur på båda uppgifterna kan bidra till att klargöra ett osäkert plus-maze testa 30,31,37, en multipel-test strategi kan ha fördelar vid test ångest-liknande beteende.The authors have nothing to disclose.
The Wellcome Trust för att ge Open Access finansiering till Oxford University. Robert Deacon är medlem i Oxford OXION gruppen, som finansieras av Wellcome Trust bidrag WT084655MA.