我们旨在建立一个孤立和维护人类菌状的味道乳头细胞的长期文化重现协议。活检取自人体的菌状乳头细胞成功地保持了八个多通道(12个月)没有丧失活力的文化。
味觉细胞是高度专业化的,具有独特的组织学,分子生物学和生理特性,允许一个简单的刺激和食品中含有复杂的化学分子的广泛检测。在人类,个体的菌状乳头,包含从零到多达20个味蕾。有没有人的味觉细胞培养建立的协议,尽管保持文化品位乳头细胞的多种细胞周期的能力将是相当实用,这些独特的感官细胞的特征分子,再生和功能特性。味觉细胞的早先的研究已经完成,使用新鲜细胞原代培养,外植体培养,从啮齿类动物或半完整的味蕾,在组织切片1,2,3,4。虽然这些准备工作的每个人都有优势,将有长远的文化发展提供了重要的好处,特别是对味觉细胞增殖和复合驱研究rentiation。几个团体,包括我们在内,一直在味觉细胞培养模型的建立和发展有兴趣。大多数尝试以文化品位细胞报道有限的活力,细胞通常不超过3-5ð5,6,7,8持久。我们最近报道对啮齿动物的味觉细胞9扩展文化的一个成功的方法。我们在这里报告的第一次孤立的人类蕈状味觉乳头细胞在体外培养体系的建立。活检取自人体的菌状乳头细胞成功地保持了八个多通道(12个月)没有丧失活力的文化。细胞表现出成熟的味觉细胞特征的许多分子和生理功能。 Gustducin和β2,磷脂酶C(PLC – β2)的mRNA在许多细胞,通过逆转录 – 聚合酶链反应检测和测序证实。免疫细胞化学分析表明,在场的阵风ducin和PLC-β2培养味觉细胞中的表达。体外培养的人蕈状细胞也表现出适当的浓度表明,味觉受体和信号通路至少是目前的几种口味刺激细胞内钙离子的增加。这些结果充分表明,成年人类的味觉细胞可以产生和保持为至少8个通道。许多人保留着细胞的急性分离的从成年味道上皮细胞,以支持其作为一种模式味觉系统的使用和生理生化特性。这个系统将使参与增殖,分化和功能在哺乳动物味觉受体细胞, 在体外制备过程的进一步研究。
蕈状人的味觉乳头建立人力蕈状细胞培养的捐赠研究适当的知情同意后,根据研究进行了审查协议由IRB委员会批准。舒尔曼联营机构审查委员会公司,俄亥俄州辛辛那提市批准的协议(#0934)。书面协议下面是根据报告公布的参数由Ozdener 等 。 2011年10。
我们一直保持着味道从人类的蕈状乳头细胞获得超过8通道,横跨12个月的期限。这些文化产生新的细胞,其中许多在体外成熟的阶段,他们表示,除了味觉受体细胞的关键分子和生理属性的几个指标,成熟的味蕾细胞类型。存在gustducin和PLC-β2在培养的细胞亚群的免疫反应是与这一结论相一致。最重要的是,某些细胞对甜和苦味刺激的应用与细胞内钙离子的短暂增加,这是一个功能分离的味…
The authors have nothing to disclose.
我们感谢艾米迈尔斯和ESI Quayson技能和帮助。这项工作是支持部分由NSF 0216310和奇华顿公司授予(净入学率)。
Name of the reagent | Company |
MCDB 123 | Sigma-Aldrich |
Iscove’s DMEM Medium | MediaTech |
Elastase | Sigma-Aldrich |
Pronase E | Sigma-Aldrich |
Elastase | Worthington |
Soy bean trypsin inhibitor | Worthington |
Collagenase type 1 | Worthington |
Rat tail collagen type 1 | BD Sciences |
Fura-2 AM | Molecular Probes |
Superscript First Strand Synthesis System for RT-PCR | Invitrogen |
Leica TCS SP2 Spectral Confocal Microscope | Leica Microsystems Inc. |
Discovery-1 imaging station and Metamorph software | Molecular Devices |
Small fine-tip forceps and extra fine spring scissors | Fine Science Tools |