Vi beskriver et forsknings-teknik til fiberoptisk bronkoskopi og bronchoalveolær udskylning ved hjælp af lavt tryk sug. Teknikken anvendes til at høste immunceller fra lunge bronchoalveolære overflader. Lokalbedøvelse og mild bevidst sedation (midazolam) anvendes. Emner tolerere procedure godt og opleve minimale bivirkninger.
Vi beskriver et forsknings-teknik til fiberoptiske bronkoskopi med bronchoalveolær lavage (BAL) ved hjælp af manuel håndholdt sugning for at fjerne ikke-adhærerende celler og lunge foring væske fra slimhindeoverfladen. I forskningsmiljøer, BAL tillader prøvetagning af medfødte (lungemakrofag), cellulære (B-og T-celler), og humorale (immunoglobulin) respons i lungerne.
BAL er internationalt accepteret til forskningsformål, og siden 1999 teknikken er blevet udført i> 1.000 forsøgspersoner i Storbritannien og Malawi med vores gruppe.
Vor teknik bruger mild håndholdt udsugning af indpodet væske; det er designet til at maksimere BAL volumen tilbage og anvende mindst forskydningskraft på cilierede epitel for at bevare strukturen og funktionen af celler i BAL-væsken og bevare levedygtigheden for at fremme væksten af celler i ex vivo-kultur. Forskningen teknik bruger derfor et større volumen insdestillat (typisk i størrelsesordenen 200 ml) og beskæftiger manuel sug til at reducere celleskader.
Patienterne får lokalbedøvelse, tilbød bevidst sedation (midazolam), og tolerere proceduren godt med minimale bivirkninger. Mundtlig og skriftlig emne information forbedrer tolerance og skriftligt informeret samtykke er obligatorisk. Sikkerhed af emnet er altafgørende. Emner er nøje udvalgt ved hjælp af klare inklusions-og eksklusionskriterier.
Denne protokol indeholder en beskrivelse af de potentielle risici, og de skridt, der træffes for at afbøde dem, en liste over kontraindikationer, præ-og efterfølgende kontrol procedure, såvel som præcise bronkoskopi og laboratoriemetoder.
Baggrund
Fiberoptisk bronkoskopi blev udviklet til klinisk praksis, og det er meget udbredt både diagnostisk og terapeutisk 1,2. Bronchoalveolar lavage (BAL) fjerner ikke-adhærerende celler og lunge foring væske fra slimhindeoverfladen, biopsi anvendes til prøveudtagning mucosale og submukøse væv. I forskningsmiljøer, BAL muliggør prøvetagning af medfødte (lungemakrofager 3-5), cellulære (B-og T-celler 6), og humorale (immunoglobulin 7) reaktioner i lungerne.
BAL er internationalt accepteret til forskningsformål 8 og siden 1999 teknikken er blevet udført i> 1.000 forsøgspersoner i Storbritannien og Malawi med vores gruppe. Vi bruger denne teknik i studier af medfødte, cellulære og humorale immunrespons til pneumokok antigen, herunder eksperimentel human pneumokok vogn 9,17, biomasse røg 5, hiv og vaccination, og adjungeret behandling studør i recovery fra lungebetændelse. Vor teknik bruger mild håndholdt udsugning af indpodet væske; det er designet til at maksimere BAL volumen tilbage og anvende mindst forskydningskraft på cilierede epitel for at bevare strukturen og funktionen af celler i BAL-væsken.
I forskningsmæssig sammenhæng BAL benytter en anden teknik fra den praktiseres af respiratoriske og intensivafdelinger læger (ofte betegnes bronkial vask, skyllevand lavage eller BAL), der ønsker at opnå diagnostisk eller terapeutisk fordel. Forskningen teknik er designet til at høste celler og bevare levedygtigheden for at fremme væksten af celler i ex vivo-kultur. Af disse grunde forskning teknik bruger en større volumen inddrypningspræparat (typisk i størrelsesordenen 200 ml) og beskæftiger manuel sug til at reducere celleskader. Patienterne får lokalbedøvelse, tilbød bevidst sedation (midazolam), og tolerere proceduren godt med minimale bivirkninger. Mundtlig og skriftlig subject information forbedrer tolerance og skriftligt informeret samtykke er obligatorisk 1..
Goal
Det overordnede mål er, at proceduren skal være sikre og effektive. Fag skal ikke opleve nogen fysiologiske forstyrrelser og operatører bør konsekvent samle over 100 ml BAL fra emner. Efter proceduren bør emner experience minimale bivirkninger.
Sikkerhed
Sikkerhed af emnet er altafgørende. Emner er nøje udvalgt ved hjælp af klare inklusions-og eksklusionskriterier. Denne protokol indeholder en beskrivelse af de potentielle risici og de skridt for at afbøde dem.
Kontraindikationer til forskning bronkoskopi kan udtrykkes som absolut eller relativt, og indgår i vores undersøgelse protokol som udelukkelses-og inklusion kriterier. Vores fag er alle screenet for at sikre fuld sundhed.
Absolutte kontraindikationeromfatter ustabil halshvirvelsøjlen, reagerer hypoxi, ustabil angina, blødende diatese, og malign hjertearytmi.
Relative kontraindikationer, herunder de betingelser forbundet med øgede komplikation satser, kan nævnes:
Generelt: dårligt kooperativ emne 1, enhver betydelig almen medicinsk problem f.eks epilepsi, tidligere dårligt tålt bronkoskopi, kendte bivirkninger til lidocain eller midazolam, graviditet, dårlig ernæring.
Respiratorisk: hypoxi [mætninger (SATS) på luft <94%], hyperkapni ustabil astma 1, signifikant nedsat lungefunktion 1 (FEV 1 <1 L), pulmonal hypertension.
Kardiovaskulær: uræmi, inden for 6 uger myokardieinfarkt 1, vena cava superior obstruktion.
Andet: immunosuppression (vores gruppe udfører jævnligt denne procedure i HIV-positive fag).
Se tabel 1 – Risici forbundet med BAL til forskning.
For at opnå gode resultater er følgende nyttige:
The authors have nothing to disclose.
Tak til Elena Mitsi (Research Assistant) og Sr Carole Hancock (Research sygeplejerske) og teater personale for deres bidrag til at filme, og David Shaw (forskning sygeplejerske) for hans støtte med vores forsknings bronchoscopies. Også tak til vores frivillige Rebecca Dunphy for at tillade denne procedure for at blive filmet.
Material |
Company |
Catalogue Number |
Comments |
Fibreoptic bronchoscope, light and suction source |
unspecified |
||
Surgical gown, sterile gloves |
unspecified |
||
Sphygnomanometer |
unspecified |
For continuous patient monitoring |
|
Pulse oximeter |
unspecified |
For continuous patient monitoring |
|
3 lead ECG monitor |
unspecified |
For continuous patient monitoring |
|
Nasal oxygen delivery 2-4l/min |
unspecified |
||
Lidocaine 10% spray (Xylocaine) |
AstraZeneca |
For topical anaesthesia |
|
Lidocaine hydrochloride 2% |
unspecified |
For topical anaesthesia |
|
Lidocaine gel (Instillagel) |
Farco-Pharma, Germany |
Alternative products available from other suppliers |
|
Normal saline, sterile 200ml |
unspecified |
Warm to 30oC |
|
10ml taper-end syringe (x10) |
unspecified |
For administration of lidocaine |
|
Intravenous cannula 18G |
unspecified |
For administration of midazolam |
|
Midazolam |
unspecified |
For sedation |
|
Flumazenil |
unspecified |
Reversal of benzodiazepine sedation (emergency use only) |
|
60ml taper-end syringes (x4) |
unspecified |
For normal saline injection and BAL fluid withdrawal. May require connector to attach to the injection port of the bronchoscope |
|
Sterile gauze swab |
Vernaid, UK |
Alternative products available from other suppliers |
|
Sterile container for BAL fluid |
See text and comments |
Siliconised glass bottles reduce macrophage adherence. Alternatively, 50ml centrifuge tubes may be used (total capacity 200ml) |
|
Sigmacote |
Sigma, UK |
SL2 |
Only if siliconised glass bottles used. NB: Harmful and flammable. If used, follow precautions detailed in manufacturer’s MSDS |
Centrifuge |
unspecified |
At least 4x50ml tube capacity. Refrigeration to 4oC preferred. |
|
Shandon Cytospin centrifuge |
Thermo Scientific, UK |
For differential count only |
|
RPMI 1640 medium with L-glutamine |
Sigma, UK |
R8758 |
Alternative products available from other suppliers |
Fetal bovine serum |
Sigma, UK |
F6178 |
Alternative products available from other suppliers |
Penicillin-Streptomycin |
Sigma, UK |
P4333 |
Alternative products available from other suppliers |
Amphotericin B |
Sigma, UK |
A2942 |
Alternative products available from other suppliers |
Tissue culture plates |
Greiner Bio-One, UK |
662160 |
Alternative products available from other suppliers |
Glass microscope slides |
unspecified |
For differential count only |
|
Shandon cytofunnel |
Thermo Scientific, UK |
A78710003 |
For differential count only |
Shandon cytoclip |
Thermo Scientific, UK |
59910052 |
For differential count only |
Hemacolor staining set (fixative, red and blue reagents) |
Merck, Germany |
111661 |
Use according to manufacturer’s instructions |