Vi beskriver en forskningsteknik för fiberoptisk bronkoskopi och lungsköljning under lågtryck sug. Tekniken används för att skörda immunceller från lunga bronkoalveolära ytor. Lokalbedövning och mild sedering (midazolam) används. Ämnen tolerera de minimala biverkningar förfarande väl och erfarenhet.
Vi beskriver en forskningsteknik för fiberoptisk bronkoskopi med bronkoalveolär lavage (BAL) med användning av manuell handhållen sugning för att avlägsna icke-adherenta celler och lung lining fluid från slemhinneytan. I forskningsmiljöer, medger BAL provtagning av medfödd (lungmakrofager), cellulära (B-och T-celler), och humorala (immunglobulin) svar i lungan.
BAL är internationellt accepterat för forskningsändamål och sedan 1999 tekniken har utförts i> 1000 patienter i Storbritannien och Malawi med vår grupp.
Vår teknik använder skonsam handhållen sugning av instilleras fluidum, vilket är utformat för att maximera BAL volym återvände och tillämpa minsta skjuvkraft på cilierade epitel, för att bevara strukturen och funktionen av celler i BAL-vätskan och för att bevara livskraften för att underlätta tillväxt av celler i ex vivo-kultur. Forskningen tekniken använder därför en större volym insdestillat (typiskt i storleksordningen av 200 ml) och utnyttjar manuell sugning för att minska cellskador.
Patienterna får lokalbedövning, erbjöd sedering (midazolam), och tolererar proceduren väl med minimala biverkningar. Muntlig och skriftlig ämnesinformation förbättrar tolerans och skriftligt informerat samtycke är obligatoriskt. Säkerhet i ämnet är av största vikt. Ämnen är noga utvalda med hjälp av tydliga kriterier för intagning och uteslutning.
Detta protokoll innehåller en beskrivning av de potentiella riskerna och de åtgärder som vidtagits för att mildra dem, en lista med kontraindikationer, före och efter-förfarande kontroller, liksom exakta bronkoskopi och laboratorietekniker.
Bakgrund
Den fiberoptiska bronkoskopi utvecklades för klinisk praxis, det är allmänt används både diagnostiskt och terapeutiskt 1,2. Lungsköljning (BAL) avlägsnar icke-vidhäftande celler och lung foder vätska från slemhinneytan, biopsi används för att ta prov på slemhinnor och submukosala vävnader. I forskningsmiljöer, medger BAL provtagning av medfödd (lungmakrofager 3-5), cellulär (B-och T-celler 6), och humorala (immunglobulin 7) svar i lungan.
BAL är internationellt accepterade för forskningsändamål 8 och sedan 1999 tekniken har utförts i> 1000 patienter i Storbritannien och Malawi med vår grupp. Vi använder denna teknik i studier av medfödda, cellulära och humorala immunsvar mot pneumokock-antigen, inklusive experimentell mänsklig pneumokock vagn 9,17, biomassa rök 5, HIV och vaccinering, och tilläggsbehandling studör i återhämtning från lunginflammation. Vår teknik använder skonsam handhållen sugning av instilleras fluidum, vilket är utformat för att maximera BAL volym återvände och tillämpa minsta skjuvkraft på cilierade epitel, för att bevara strukturen och funktionen av celler i BAL-vätskan.
I forskningssammanhang BAL använder en annan teknik från den som praktiseras av andnings-och intensivvårdsläkare (ofta benämnt bronkial tvätt, skölj lavage eller BAL) som siktar på att få diagnostisk eller terapeutisk fördel. Forskningen tekniken är utformad för att skörda celler och bevara livskraften för att underlätta tillväxten av celler i ex vivo-kultur. Av dessa skäl har forskning teknik använder en större volym instillate (typiskt i storleksordningen av 200 ml) och utnyttjar manuell sugning för att minska cellskador. Patienterna får lokalbedövning, erbjöd sedering (midazolam), och tolererar proceduren väl med minimala biverkningar. Muntlig och skriftlig utsättst informationen förbättrar tolerans och skriftligt informerat samtycke är obligatoriskt 1.
Mål
Det övergripande målet är att förfarandet ska vara säker och effektiv. Ämnen bör inte uppleva några fysiologiska störningar och operatörer bör konsekvent samla över 100 ml BAL från ämnen. Efter ingreppet, bör patienter uppleva minimala biverkningar.
Säkerhet
Säkerhet i ämnet är av största vikt. Ämnen är noga utvalda med hjälp av tydliga kriterier för intagning och uteslutning. Detta protokoll innehåller en beskrivning av de potentiella riskerna och de åtgärder som vidtagits för att mildra dem.
Kontraindikationer för forsknings bronkoskopi kan uttryckas som absolut eller relativ, och ingår i vår studieprotokoll som uteslutning och inklusionskriterier. Våra ämnen är alla kontrolleras för att säkerställa full hälsa.
Absoluta kontraindikationeromfattar instabil halsryggen, svarar hypoxi, instabil angina, blödningsbenägenhet, och malign hjärtarytmi.
Relativa kontraindikationer, inklusive de villkor som är förknippade med ökade komplikationer, inkluderar:
Allmänt: dåligt kooperativ ämne 1, varje betydande allmän medicinskt problem t.ex. epilepsi, tidigare dåligt tolereras bronkoskopi, kända biverkningar av lidokain eller midazolam, graviditet, dålig kost.
Andningsskydd: hypoxi [mätt (sats) på luft <94%], hyperkapni, instabil astma 1, signifikant försämrad lungfunktion 1 (FEV 1 <1 L), pulmonell hypertension.
Kardiovaskulära: uremi, inom 6 veckor efter hjärtinfarkt 1, övre hålvenen obstruktion.
Övrigt: immunsuppression (vår grupp utför regelbundet detta förfaranderande i HIV-positiva patienter).
Se Tabell 1 – Risker förknippade med BAL för forskning.
För att uppnå bra resultat är följande användbara:
The authors have nothing to disclose.
Tack till Elena Mitsi (Forskarassistent) och Sr Carole Hancock (forskningssköterska) och teater personal för deras bidrag till att filma, och David Shaw (forskningssköterska) för hans stöd med våra forsknings bronchoscopies. Tack också till vår volontär Rebecca Dunphy för att låta detta förfarande som skall filmas.
Material |
Company |
Catalogue Number |
Comments |
Fibreoptic bronchoscope, light and suction source |
unspecified |
||
Surgical gown, sterile gloves |
unspecified |
||
Sphygnomanometer |
unspecified |
For continuous patient monitoring |
|
Pulse oximeter |
unspecified |
For continuous patient monitoring |
|
3 lead ECG monitor |
unspecified |
For continuous patient monitoring |
|
Nasal oxygen delivery 2-4l/min |
unspecified |
||
Lidocaine 10% spray (Xylocaine) |
AstraZeneca |
For topical anaesthesia |
|
Lidocaine hydrochloride 2% |
unspecified |
For topical anaesthesia |
|
Lidocaine gel (Instillagel) |
Farco-Pharma, Germany |
Alternative products available from other suppliers |
|
Normal saline, sterile 200ml |
unspecified |
Warm to 30oC |
|
10ml taper-end syringe (x10) |
unspecified |
For administration of lidocaine |
|
Intravenous cannula 18G |
unspecified |
For administration of midazolam |
|
Midazolam |
unspecified |
For sedation |
|
Flumazenil |
unspecified |
Reversal of benzodiazepine sedation (emergency use only) |
|
60ml taper-end syringes (x4) |
unspecified |
For normal saline injection and BAL fluid withdrawal. May require connector to attach to the injection port of the bronchoscope |
|
Sterile gauze swab |
Vernaid, UK |
Alternative products available from other suppliers |
|
Sterile container for BAL fluid |
See text and comments |
Siliconised glass bottles reduce macrophage adherence. Alternatively, 50ml centrifuge tubes may be used (total capacity 200ml) |
|
Sigmacote |
Sigma, UK |
SL2 |
Only if siliconised glass bottles used. NB: Harmful and flammable. If used, follow precautions detailed in manufacturer’s MSDS |
Centrifuge |
unspecified |
At least 4x50ml tube capacity. Refrigeration to 4oC preferred. |
|
Shandon Cytospin centrifuge |
Thermo Scientific, UK |
For differential count only |
|
RPMI 1640 medium with L-glutamine |
Sigma, UK |
R8758 |
Alternative products available from other suppliers |
Fetal bovine serum |
Sigma, UK |
F6178 |
Alternative products available from other suppliers |
Penicillin-Streptomycin |
Sigma, UK |
P4333 |
Alternative products available from other suppliers |
Amphotericin B |
Sigma, UK |
A2942 |
Alternative products available from other suppliers |
Tissue culture plates |
Greiner Bio-One, UK |
662160 |
Alternative products available from other suppliers |
Glass microscope slides |
unspecified |
For differential count only |
|
Shandon cytofunnel |
Thermo Scientific, UK |
A78710003 |
For differential count only |
Shandon cytoclip |
Thermo Scientific, UK |
59910052 |
For differential count only |
Hemacolor staining set (fixative, red and blue reagents) |
Merck, Germany |
111661 |
Use according to manufacturer’s instructions |