Vi beskriver forskningsteknikk for fiberoptisk bronkoskopi og bronchoalveolar kylling av lavtrykk sug. Teknikken som brukes for å høste immunceller fra lunge bronchoalveolar overflater. Lokalbedøvelse og mild sedasjon (midazolam) brukes. Emner tolerere behandlingen godt og oppleve minimale bivirkninger.
Vi beskriver en forsknings-teknikk for fiberoptiske bronkoskopi med bronchoalveolar lavage (BAL) ved hjelp av manuell hånd sug for å fjerne ikke-adherente celler og lunge-foring væske fra slimhinneoverflaten. I forskningsmiljøer, tillater BAL prøvetaking av medfødt (lungemakrofager), cellulære (B-og T-celler), og humoral (immunglobulin) svar innen lunge.
BAL er internasjonalt akseptert for forskningsformål, og siden 1999 har teknikken blitt utført i> 1000 fag i Storbritannia og Malawi med vår gruppe.
Vår teknikk benytter milde håndholdt suging av innpodet fluid, og dette er utformet for å maksimere BAL volum returneres og anvende minimum skjærkraft på ciliated epitel for å bevare strukturen og funksjonen av celler i BAL fluid og for å opprettholde levedyktigheten for å lette veksten av celler ex vivo i kultur. Forskningen teknikken bruker derfor større volum instillate (typisk i størrelsesorden 200 ml), og benytter manuell sug for å redusere celleskader.
Pasientene får lokalbedøvelse, tilbudt sedasjon (midazolam), og tåler behandlingen godt med minimale bivirkninger. Muntlig og skriftlig forbehold informasjon forbedrer toleranse og skriftlig informert samtykke er obligatorisk. Sikkerhet for faget er det viktigste. Fag er nøye valgt ved hjelp klare inklusjons-og eksklusjonskriterier.
Denne protokollen inneholder en beskrivelse av de potensielle risikoer, og de skritt som er tatt for å redusere dem, en liste med kontraindikasjoner, pre-og post-prosedyre sjekker, samt presise bronkoskopi og laboratorieteknikker.
Bakgrunn
Fiberoptiske bronkoskopi ble utviklet for klinisk praksis, det er mye brukt både diagnostisk og terapeutisk 1,2. Bronchoalveolar lavage (BAL) fjerner ikke-festede celler og lunge lining væske fra slimhinnen, biopsi brukes til å smake på slimhinnene og submukøst vev. I forskningsmiljøer, tillater BAL prøvetaking av medfødt (lungemakrofager 3-5), cellulære (B-og T-celler 6), og humorale (immunglobulin 7) responser innenfor lunge.
BAL er internasjonalt akseptert for forskningsformål 8, og siden 1999 har teknikken blitt utført i> 1000 fag i Storbritannia og Malawi med vår gruppe. Vi bruker denne teknikken i studier av medfødte, mobilnettet, og humorale immunresponser mot pneumokokk antigen inkludert eksperimentell menneskelig pneumokokk vogn 9,17, biomasse røyk 5, HIV og vaksinering, og medhjelper behandling studør til utvinning av lungebetennelse. Vår teknikk bruker skånsom håndholdt suging av innpodet væsken, dette er designet for å maksimere BAL volum tilbake og bruke minimum skjærkraft på ciliated epithelia for å bevare strukturen og funksjonen til celler i BAL væske.
I forskningssammenheng BAL benytter en annen teknikk fra det praktiseres av luftveis-og intensiv leger (ofte kalt bronkial vask, vasker, lavage, eller BAL) som tar sikte på å få diagnostisk eller terapeutisk effekt. Forskningen teknikk er konstruert for å høste celler og opprettholde levedyktigheten for å lette vekst av celler i kulturen ex vivo. Av disse grunner forskningen teknikken bruker et større volum instillate (typisk i størrelsesorden 200 ml), og benytter manuell sug for å redusere celleskader. Pasientene får lokalbedøvelse, tilbudt sedasjon (midazolam), og tåler behandlingen godt med minimale bivirkninger. Muntlig og skriftlig subject informasjon forbedrer toleranse og skriftlig informert samtykke er obligatorisk en.
Goal
Det overordnede målet er at prosedyren skal være trygg og effektiv. Fagene skal ikke oppleve noen fysiologiske forstyrrelser og operatører bør konsekvent samle i overkant av 100 ml BAL fra fag. Etter prosedyren bør fag oppleve minimale bivirkninger.
Sikkerhet
Sikkerhet for faget er det viktigste. Fag er nøye valgt ved hjelp klare inklusjons-og eksklusjonskriterier. Denne protokollen inneholder en beskrivelse av de potensielle risikoer og tiltak for å redusere dem.
Kontra til forskning bronkoskopi kan uttrykkes som absolutt eller relativ, og inngår i vår studie protokoll som kriterier for eksklusjon eller inklusjon. Våre fag er alle vist å sikre full helse.
Absolutte kontrainkluderer ustabil cervicalcolumna, svarer hypoksi, ustabil angina, blødningsdiatese, og ondartet hjertearytmi.
Relative kontraindikasjoner, inkludert disse forholdene knyttet til økte komplikasjoner, blant annet:
Generelt: dårlig samarbeidslagt en, noen betydelig generell medisinsk problem f.eks epilepsi, tidligere dårlig tolerert bronkoskopi, kjent bivirkninger av lidokain eller midazolam, graviditet, dårlig ernæring.
Åndedrett: hypoksi [saturations (SATS) på luft <94%], hyperkapni, ustabil astma en betydelig svekket lungefunksjon 1 (FEV1 <1 L), pulmonal hypertensjon.
Cardiovascular: uremi, innen seks uker etter hjerteinfarkt 1, superior vena cava obstruksjon.
Annet: immunsuppresjon (vår gruppe utfører jevnlig denne prosedure i HIV-positive pasienter).
Se tabell 1 – Risiko knyttet til BAL for forskning.
For å oppnå gode resultater er følgende nyttig:
The authors have nothing to disclose.
Takk til Elena Mitsi (Vitenskapelig assistent) og Sr Carole Hancock (Research sykepleier) og teater ansatte for deres bidrag til filming, og til David Shaw (forskningssykepleier) for sin støtte med våre forsknings bronchoscopies. Takk også til våre frivillige Rebecca Dunphy for å la denne prosedyren for å bli filmet.
Material |
Company |
Catalogue Number |
Comments |
Fibreoptic bronchoscope, light and suction source |
unspecified |
||
Surgical gown, sterile gloves |
unspecified |
||
Sphygnomanometer |
unspecified |
For continuous patient monitoring |
|
Pulse oximeter |
unspecified |
For continuous patient monitoring |
|
3 lead ECG monitor |
unspecified |
For continuous patient monitoring |
|
Nasal oxygen delivery 2-4l/min |
unspecified |
||
Lidocaine 10% spray (Xylocaine) |
AstraZeneca |
For topical anaesthesia |
|
Lidocaine hydrochloride 2% |
unspecified |
For topical anaesthesia |
|
Lidocaine gel (Instillagel) |
Farco-Pharma, Germany |
Alternative products available from other suppliers |
|
Normal saline, sterile 200ml |
unspecified |
Warm to 30oC |
|
10ml taper-end syringe (x10) |
unspecified |
For administration of lidocaine |
|
Intravenous cannula 18G |
unspecified |
For administration of midazolam |
|
Midazolam |
unspecified |
For sedation |
|
Flumazenil |
unspecified |
Reversal of benzodiazepine sedation (emergency use only) |
|
60ml taper-end syringes (x4) |
unspecified |
For normal saline injection and BAL fluid withdrawal. May require connector to attach to the injection port of the bronchoscope |
|
Sterile gauze swab |
Vernaid, UK |
Alternative products available from other suppliers |
|
Sterile container for BAL fluid |
See text and comments |
Siliconised glass bottles reduce macrophage adherence. Alternatively, 50ml centrifuge tubes may be used (total capacity 200ml) |
|
Sigmacote |
Sigma, UK |
SL2 |
Only if siliconised glass bottles used. NB: Harmful and flammable. If used, follow precautions detailed in manufacturer’s MSDS |
Centrifuge |
unspecified |
At least 4x50ml tube capacity. Refrigeration to 4oC preferred. |
|
Shandon Cytospin centrifuge |
Thermo Scientific, UK |
For differential count only |
|
RPMI 1640 medium with L-glutamine |
Sigma, UK |
R8758 |
Alternative products available from other suppliers |
Fetal bovine serum |
Sigma, UK |
F6178 |
Alternative products available from other suppliers |
Penicillin-Streptomycin |
Sigma, UK |
P4333 |
Alternative products available from other suppliers |
Amphotericin B |
Sigma, UK |
A2942 |
Alternative products available from other suppliers |
Tissue culture plates |
Greiner Bio-One, UK |
662160 |
Alternative products available from other suppliers |
Glass microscope slides |
unspecified |
For differential count only |
|
Shandon cytofunnel |
Thermo Scientific, UK |
A78710003 |
For differential count only |
Shandon cytoclip |
Thermo Scientific, UK |
59910052 |
For differential count only |
Hemacolor staining set (fixative, red and blue reagents) |
Merck, Germany |
111661 |
Use according to manufacturer’s instructions |