SCIREQ इंक, मॉन्ट्रियल, QC, वर्तमान प्रोटोकॉल श्वसन प्रणाली यांत्रिकी के माप के रूप में अच्छी तरह से मजबूर दोलन तकनीक के प्रयोग चूहों में साँस methacholine को airway जवाबदेही का मूल्यांकन (flexiVent निष्पादित करने के लिए आवश्यक प्रक्रियाओं की एक विस्तृत कदम दर कदम विवरण प्रदान करता है , कनाडा).
मजबूर दोलन तकनीक (FOT) एक व्यापक, विस्तृत, सटीक और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य तरीके से चूहों में फेफड़ों के प्रायोगिक मूल्यांकन की अनुमति एक शक्तिशाली, एकीकृत और translational उपकरण है. यह पूर्वनिर्धारित, छोटे आयाम, जो आम तौर पर विषय की airway उद्घाटन के अवसर पर लागू कर रहे हैं जो oscillatory airflow की तरंग, की प्रतिक्रिया में अधिग्रहीत दबाव और मात्रा संकेतों के विश्लेषण के माध्यम से श्वसन प्रणाली यांत्रिकी के मापन प्रदान करता है. वर्तमान प्रोटोकॉल विवरण पर्याप्त रूप से एक कंप्यूटर नियंत्रित पिस्टन वेंटीलेटर (flexiVent; SCIREQ इंक, मॉन्ट्रियल, QC, कनाडा) के प्रयोग से चूहों में मजबूर दोलन माप निष्पादित करने के लिए आवश्यक कदम. तैयारी के चरण, यांत्रिक वेंटीलेशन, फेफड़ों माप, और डेटा विश्लेषण: विवरण चार भागों में बांटा गया है. यह भी anesthetized चूहों में साँस methacholine को airway जवाबदेही का आकलन करने के लिए कैसे का ब्यौरा, इस तकनीकों का एक आम आवेदन शामिलभी अन्य परिणामों और विभिन्न फेफड़ों विकृतियों तक फैली हुई है जो ई. एयरवे क्षति के एक oxidative तनाव संचालित मॉडल से और साथ ही भोले चूहों में प्राप्त की माप के साथ ही नए क्षेत्रों में अनुसंधान करने के लिए आवेदन के रूप में इस उपकरण का एक बेहतर लक्षण वर्णन और अध्ययन शारीरिक परिवर्तन या रोग मॉडल की समझ में योगदान कर सकते हैं वर्णन कैसे प्रस्तुत कर रहे हैं.
छोटे पशुओं में फेफड़ों के यांत्रिक गुणों की पर्याप्त लक्षण वर्णन श्वसन विज्ञान में murine मॉडल की बढ़ती के बाद आवश्यक हो गया है. मजबूर दोलन तकनीक (FOT), भी मानव विषयों में इस्तेमाल तकनीक का उपयोग किया है, इन मापों सार्थक शारीरिक परिवर्तनों का अध्ययन करने के लिए एक शक्तिशाली, एकीकृत और translational दृष्टिकोण प्रदान करते हैं. FOT माप आम तौर पर एक पूर्वनिर्धारित, छोटे आयाम, विषय की airway खोलने 1 पर लागू oscillatory airflow की तरंग (भी गड़बड़ी या इनपुट संकेत के रूप में) की प्रतिक्रिया में अधिग्रहीत दबाव और मात्रा संकेतों का विश्लेषण करके प्राप्त कर रहे हैं. इसके सरलतम रूप में, एक FOT गड़बड़ी एक अच्छी तरह से परिभाषित आवृत्ति पर एक sinusoidal तरंग होगा. अधिक जटिल perturbations आमतौर पर एक व्यापक स्पेक्ट्रम को कवर विशिष्ट (परस्पर प्रधानमंत्री) आवृत्ति waveforms की एक चयन की एक superposition से मिलकर बनता है. मल्टी आवृत्ति के अपघटनफूरियर का उपयोग करते हुए अपने समर्थकों में इनपुट और आउटपुट संकेतों श्वसन प्रणाली इनपुट प्रतिबाधा (Zrs) की गणना, गड़बड़ी 2 में शामिल हर आवृत्ति में, इनपुट और आउटपुट संकेतों के बीच हस्तांतरण समारोह यानी की अनुमति देता है. इसलिए, FOT एक भी तिकड़म 2 में आवृत्तियों की एक सीमा से अधिक श्वसन यांत्रिकी के एक साथ मूल्यांकन परमिट. प्रतिबाधा डेटा करने के लिए उपयुक्त उन्नत गणितीय मॉडल (जैसे लगातार चरण मॉडल 3) तो एयरवे (मध्य और परिधीय) और parenchymal फेफड़े के ऊतकों निर्भर पैरामीटर 1, 3 में प्रतिक्रिया का एक विभाजन की अनुमति. शारीरिक प्रतिक्रिया (जैसे सांस लेने की आवृत्ति, ज्वार की मात्रा, फेफड़ों की मात्रा, ऊपरी वायुमार्ग, सहज साँस लेने के प्रयासों, माप के समय) को प्रभावित करने वाले कई कारक माप प्रणाली और प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं द्वारा नियंत्रित और मानकीकृत कर रहे हैं, 1 तकनीक टोपी हैइसे सही ढंग से किया जाता है बशर्ते कि सटीक और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य माप पैदा करने के लिए सक्षम. इस लेख का उद्देश्य चूहों में इस तरह के मापन पर अमल करने के क्रम में आवश्यक प्रक्रिया का एक विस्तृत, कालानुक्रमिक वर्णन प्रदान करना है. तैयारी के चरण (अभिकर्मकों, उपकरण और विषयों), यांत्रिक वेंटीलेशन, फेफड़ों माप, और डेटा विश्लेषण: प्रोटोकॉल चार हिस्से होते हैं. श्वसन प्रणाली यांत्रिकी के प्रतिनिधि परिणामों के उदाहरण प्रदान कर रहे हैं एक कंप्यूटर नियंत्रित पिस्टन वेंटीलेटर (flexiVent, SCIREQ इंक, मॉन्ट्रियल, QC, कनाडा) का उपयोग कर उत्पन्न. ये रूप airway सूजन, उपकला कोशिका क्षति और साँस aerosolized methacholine 4 से बढ़ा airway जवाबदेही की विशेषता एयरवे क्षति के एक oxidative तनाव संचालित मॉडल से भोले चूहों के रूप में अच्छी तरह से प्राप्त किया गया. इस प्रोटोकॉल अक्सर साँस methacholine को airway जवाबदेही का आकलन किया जाता है, यह अन्य परिणामों और variou तक फैलीअस्थमा, क्रोनिक प्रतिरोधी फेफड़े के रोग (सीओपीडी), वातस्फीति, फेफड़ों तंतुमयता, फेफड़ों की चोट के रूप में अच्छी तरह से मानव रोग के लिए इसी तरह की विकृतियों के ट्रांसजेनिक माउस मॉडल के रूप में. सहित विकृतियों इस उपकरण का उपयोग कर शोध निष्कर्षों शारीरिक परिवर्तन या रोग मॉडल की एक बेहतर लक्षण वर्णन और समझ के साथ ही नए अनुसंधान के क्षेत्रों में विस्तार में योगदान कर सकते हैं.
यह अस्थमा और फेफड़े की अन्य विकारों से संबंधित एयरवे शिथिलता के निरंतर अध्ययन रोग और उपचार के विकल्प के विकास के अंतर्निहित तंत्र को समझने के लिए सर्वोपरि रहता है. मॉडल airway रोग के लिए चूहों का उपयोग इन रोग तंत्र में समझ पाने में अनिवार्य कर दिया गया है. फेफड़े की कार्यक्षमता को मापने के लिए महत्वपूर्ण है, जिसके द्वारा विश्वसनीय और सही उपकरण होने, एक माउस के रूप में छोटे रूप में एक विषय में मूल्यांकन के एयरवे शिथिलता पर विचार. इसके अलावा, एयरवे शिथिलता या उपचारात्मक प्रभाव के स्थान पर अंतर्दृष्टि प्रदान करने में सक्षम उपकरण होने अमूल्य है. FOT तकनीक इन सभी विशेषताओं को जोड़ती है और शारीरिक परिवर्तन का मूल्यांकन करने के लिए एक शक्तिशाली, एकीकृत और translational दृष्टिकोण प्रदान करता है.
चूहों में माप के इस प्रकार के साथ सफल करने के लिए, विशेष ध्यान अर्थात्, कुछ कदम के लिए इस प्रणाली की जांच, अंतःश्वासनलीय सीए के विरोध को दी जानी चाहिएnnula, छिटकानेवाला के प्रकार (और साथ ही अपने ऑपरेटिंग सेटिंग्स के रूप में) पशु और फेफड़ों की मात्रा इतिहास के मानकीकरण की स्थिति. इसके अलावा, यह विषय के श्वसन प्रणाली के मापन के दौरान निष्क्रिय बनी हुई है कि वैध डेटासेट प्राप्त करने के लिए आवश्यक है. इस एपनिया (1 टेबल देखें) उत्पन्न करने के लिए विषय संज्ञाहरण की गहरी विमान में या hyperventilating द्वारा काम कर, एक मांसपेशियों paralyzing एजेंट के प्रशासन के द्वारा प्राप्त किया जा सकता है. अगर वांछित चूहों में मापन के लिए आवश्यक कौशल प्राप्त करते हुए जांचकर्ता, परीक्षण भार के साथ, माहिर प्रणाली और इसके ऑपरेटिंग सॉफ्टवेयर के द्वारा शुरू कर सकते हैं. यह तो रोग मॉडल या इलाज चूहों में जाने से पहले भोले जानवरों में प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिणाम उत्पन्न करने के लिए तार्किक होगा. श्वसन अनुसंधान में रोग मॉडल की एक महत्वपूर्ण अनुपात ऐसी एलर्जी, जहर, प्रदूषण, सिगरेट का धुआँ या गैसों, measuremen साथ प्राप्त परिणामों में परिवर्तनशीलता के रूप में एजेंटों के लिए पशुओं को उजागर शामिल के बाद सेइस आलेख में वर्णित टी तकनीक इसलिए इस्तेमाल किया जोखिम प्रक्रिया से प्रभावित हो सकता है. कुंजी प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं के मानकीकरण (कंप्यूटर नियंत्रित जोखिम और माप सिस्टम 6, 13, 14 का उपयोग करते हुए जैसे) संभावित परिवर्तनशीलता को कम करने में एक महत्वपूर्ण प्रभाव हो सकता है.
ताकत के रूप में अच्छी तरह से तकनीक की सीमाओं पर प्रकाश डाला, जबकि इस लेख में प्रस्तुत उदाहरण भोले और क्लोरीन उजागर चूहों प्रयोगों से ठेठ परिणामों की एक चयन का प्रतिनिधित्व करते हैं. चित्रा 6 में उदाहरण के लिए देखा जा सकता है, तकनीक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य फेफड़ों समारोह माप पैदा करने में सक्षम है. इसी तरह के आधारभूत मूल्यों प्रतिरोध माउस तनाव के बीच सूचना मिली, वहीं elastance में मतभेद लेकिन 15 मनाया गया. काफी परिवर्तन शिशु और वयस्क चूहों 16 के बीच उम्मीद की जानी भी हैं. ऐसे वें के रूप में इन विवो शारीरिक मूल्यांकन, उच्च परिशुद्धता परिणाम, में अन्य के रूप मेंFOT द्वारा उत्पन्न ose, विषयों की प्राकृतिक राज्य के रूप में एक रियायत के साथ आते हैं. Phenotyping अनिश्चितता सिद्धांत 1 के रूप में जाना जाता है जो इस सिद्धांत, माप, संवेदनाहृत में किया (या मौखिक रूप से intubated) tracheotomised और यंत्रवत् विषयों हवादार होना करने की जरूरत है कि भावना में मौजूद प्रोटोकॉल के लिए लागू होता है. तकनीक की एक और सीमा डेटा को लगातार चरण मॉडल के फिट ब्रोन्कोकन्सट्रिक्शन के मध्यम स्तर से ऊपर गरीब है क्योंकि डेटा क्लोरीन उजागर समूह के लिए उच्चतम सांद्रता में उपलब्ध नहीं हैं, जहां चित्रा 5D-5F में मानने योग्य है. हालांकि, गंभीर रूप से bronchoconstricted जानवरों सीधे 15, या जैसे खाते में यांत्रिक कार्य 17 की विविधता ले रही है, और अधिक जटिल गणितीय मॉडल फिट करने के लिए तीसरे पक्ष के बाद विश्लेषण सॉफ्टवेयर का उपयोग करके Zrs विश्लेषण द्वारा मूल्यांकन किया जा सकता है. जानवर वायुमार्ग पर्याप्त पी नहीं रहे हैं अपवर्जित डेटासेट भी मनाया जा सकता हैassive या प्रवेशनी के प्रतिरोध बहुत अधिक है. अंगूठे का एक नियम के रूप में, प्रवेशनी के प्रतिरोध आधारभूत जानवर की प्रतिरोधक क्षमता अधिक नहीं होनी चाहिए. बड़े भीतरी व्यास और / या कम लंबाई की एक प्रवेशनी के साथ कार्य करना प्रवेशनी प्रतिरोध को कम करने में मदद मिलेगी. अंत में, चूहों में FOT माप के वर्तमान प्रदर्शन एक समय लेने वाली और इसलिए कम कुशल पद्धति या इनवेसिव तकनीक कम की तुलना में अनुदैर्ध्य अध्ययन को कम लागू के रूप में माना जा सकता है. हालांकि बाद के उनके परिणामों के आधार के रूप में अनिश्चितता का एक बड़ा सौदा के साथ जुड़े रहे हैं और 1 त्रुटिपूर्ण होने के रूप में कई द्वारा देखा जाता है. दोहराया आक्रामक माप तकनीकी रूप से और अधिक चुनौतीपूर्ण 17 हालांकि, मौखिक रूप से intubated पशुओं में संभव हो रहे हैं.
दिए गए उदाहरणों से, परिणाम श्वसन यांत्रिकी के मापन के उत्पादन में flexiVent प्रणाली की दो पीढ़ियों के तुल्यता, साथ ही एयरवे hyperreac का प्रदर्शनसाँस methacholine को tivity और अतिसंवेदनशीलता चूहों में क्लोरीन प्रदर्शन के बाद. शारीरिक परिवर्तन या रोग मॉडल, विशेषताएँ या समझने के लिए इस्तेमाल किया जब तकनीक से संबंधित विस्तृत माप पहलू ज्ञान की वर्तमान स्थिति का विस्तार करने के लिए योगदान कर सकते हैं.
The authors have nothing to disclose.
TKMcG कनाडा सोसायटी छाती रोगों से एक छात्रवृत्ति के द्वारा समर्थित है.
'लेखक योगदान
सभी लेखकों पांडुलिपि की अवधारणा में भाग लिया. इसके अलावा, TKMcG, परियोजना शुरू की प्रयोगात्मक परिणामों एकत्र, पांडुलिपि के लेखन और अपने महत्वपूर्ण समीक्षा के लिए योगदान दिया. एआर एकत्र और विश्लेषण प्रयोगात्मक परिणाम, पांडुलिपि तैयार की गई और इसके महत्वपूर्ण समीक्षा के लिए योगदान दिया. वामो प्रयोगात्मक परिणामों को एकत्र और पांडुलिपि की महत्वपूर्ण समीक्षा के लिए योगदान दिया. TFS और JGM पांडुलिपि की महत्वपूर्ण समीक्षा के लिए योगदान दिया.
Name of Reagent/Material | Company | Catalogue Number | Comments |
REAGENTS | |||
Acetyl-β-methylcholine chloride | Sigma-Aldrich | A-2251 | Methacholine |
Micro-Adson forceps, serrated 12 cm | Fine Science Tools | 11018-12 | |
Moria MC31 forceps, serrated-curved | Fine Science Tools | 11370-31 | |
Iris scissors-tough cut, straight 11.5 cm | Fine Science Tools | 14058-11 | |
Spring scissors-2.5 mm blades, straight | Fine Science Tools | 15000-08 | |
Non-sterile blunt needle (18g x ½”) | Brico Medical Supplies Inc. | BN1805 | Endotracheal cannula |
Non-sterile 5-0 silk suture | Seraflex | IDI58000 | |
Phosphate buffered solution | Gibco | 14190-144 | |
15 ml conical tubes | Starstedt | SS-4001 | |
1 ml TB syringes | Becton Dickinson | 309626 | |
200 μl filter tips | Biosphere | 70.760.211 | |
EQUIPMENT | |||
flexiVent FX | SCIREQ Inc. | sales@scireq.com | www.scireq.com |
Aerogen Aeroneb nebulizer | SCIREQ Inc. | sales@scireq.com | www.scireq.com |