की मौखिक संचरण<em> लिस्टेरिया monocytogenes</em> दूषित भोजन की घूस के माध्यम से चूहों में
Summary
यह कागज का उपयोग कर चूहों के मौखिक संक्रमण के लिए एक उपन्यास विधि का वर्णन<em> लिस्टेरिया monocytogenes</emभोजन>-दूषित. प्रोटोकॉल आसानी से अन्य खाद्य जनित बैक्टीरियल रोगज़नक़ों के साथ प्रयोग के लिए अनुकूलित किया जा सकता है.
Abstract
एल monocytogenes मानव में खाद्य जनित संक्रमण का कारण है कि ऐच्छिक इंट्रासेल्युलर बैक्टीरियल रोगज़नक़ों हैं. बहुत कम निकट मानव रोग mimics कि एक छोटे पशु मॉडल की कमी के कारण listeriosis की जठरांत्र चरण के बारे में जाना जाता है. इस पत्र एल के मौखिक संचरण के लिए एक उपन्यास माउस मॉडल का वर्णन monocytogenes. चूहों खिलाया एल, इस मॉडल का उपयोग monocytogenes-दूषित रोटी अतिसंवेदनशील (BALB / ग / जम्मू द्वारा /) या प्रतिरोधी (C57BL / 6) माउस उपभेदों में प्रणालीगत प्रसार की डिग्री बदलती द्वारा पीछा गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल संक्रमण का एक असतत चरण में है. संक्रमण के बाद के चरणों के दौरान, पित्ताशय और मस्तिष्क के लिए प्रसार में मनाया जाता है. listeriosis के भोजन जनित मॉडल, अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य है विशेष कौशल की आवश्यकता नहीं है, और बैक्टीरियल आइसोलेट्स और प्रयोगशाला माउस उपभेदों की एक विस्तृत विविधता के साथ प्रयोग किया जा सकता है. जैसे, यह एल द्वारा इस्तेमाल किया दोनों डाह रणनीतियों का अध्ययन करने के लिए आदर्श मॉडल है monocytogenes </उन्हें> आंतों बसाना है, साथ ही आक्रामक भोजन वहन जीवाणु संक्रमण के लिए मेजबान प्रतिक्रिया को बढ़ावा देने के लिए.
Introduction
लिस्टेरिया monocytogenes मानव में खाद्य जनित संक्रमण का कारण है कि ऐच्छिक इंट्रासेल्युलर बैक्टीरियल रोगज़नक़ों हैं. बैक्टीरिया नमकीन, इस तरह सुखाने के रूप में हमारे भोजन की आपूर्ति की रक्षा के लिए प्रयोग किया जाता प्रक्रियाओं के कई करने के लिए प्रतिरोधी रहे हैं, या प्रशीतन 1,2 और संक्रमण आम तौर पर उपभोग करने से पहले गर्म नहीं कर रहे हैं कि प्रसंस्कृत, "रेडी टू ईट" खाद्य पदार्थों से जुड़े होते हैं . एल के कई पिछले प्रकोप में, स्रोत monocytogenes-दूषित भोजन की पहचान की थी, और उजागर व्यक्तियों के प्रतिबंधित समूह बारीकी से 3-6 नजर रखी थी. उन उदाहरणों में, अन्यथा स्वस्थ व्यक्तियों में नैदानिक रोग एक हल्के, खुद को सीमित आंत्रशोथ से अधिक गंभीर आंतों और प्रणालीगत संक्रमण के लिए आवश्यक है कि अस्पताल में भर्ती. एल करने के लिए विविध नवजात शिशुओं और बुजुर्ग दोनों सहित प्रतिरक्षा समझौता व्यक्तियों, में monocytogenes संक्रमण भी एंटीबायोटिक उपचार के साथ, एक उच्च मृत्यु दर (25-30%) के साथ संबद्ध किया गया है <s7,8> ऊपर. लिटिल एल के लिए संक्रामक खुराक के बारे में जाना जाता है monocytogenes, या एक छोटे पशु मॉडल की कमी के कारण मुख्य रूप से मौखिक संचरण के बाद संक्रमण के लिए संवेदनशीलता को नियंत्रित करने वाले मेजबान कारकों है कि संक्रमण के परिणामों का स्मरण दिलाता है यह विस्तृत श्रृंखला.
listeriosis की सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल मॉडल चूहों की नसों (चार) टीका है. चार मॉडल अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य है, और संक्रमण 9,10 दौरान भोले और स्मृति दोनों टी सेल प्रतिक्रिया का अध्ययन करने के लिए अत्यंत उपयोगी है. चार मॉडल का दोष यह है कि यह पूरी तरह से संक्रमण की आंतों चरण नजरअंदाज करता है. खाद्य जनित प्रसारण के बाद, पेट म्यूकोसा संभवतः धीमा कर देती है और लगातार परिधि के ऊतकों का प्रसार कर सकते हैं कि जीवाणुओं की संख्या को सीमित करता है कि एक बाधा प्रदान करता है. इसके विपरीत, पूरे inoculum चतुर्थ प्रशासन के मिनट के भीतर प्लीहा और जिगर में पाया जा सकता है, और जीव के इस बड़े सांस सहज प्रतिरक्षा घ हिला सकती हैइन ऊतकों में efenses. बड़ी खुराक (10 9 -10 11 CFU) आमतौर पर आंतों बसाना 10 प्राप्त करने के लिए आवश्यक हैं क्योंकि नलिका – पोषण द्वारा चूहों के मौखिक संक्रमण कम सामान्यतः प्रयोग किया जाता है. इसके अलावा, एक खिला सुई के साथ intragastric (आईजी) टीका प्रणालीगत प्रसार करने से पहले गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल संक्रमण की एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य अवधि उत्पन्न नहीं करता है. कुछ प्रयोगशालाओं कि एल की सूचना दी है दूसरों 48 HPI 11-15 तक कोई प्रणालीगत प्रसार से पता चला है, जबकि monocytogenes, 4-12 घंटे बाद संक्रमण (HPI) के भीतर प्लीहा और यकृत तक पहुँचने. इस प्रयोगशाला से प्रयोगशाला भिन्नता घुटकी के अस्तर को मामूली आघात में परिणाम कर सकते हैं, आईजी टीका का आक्रामक स्वभाव का परिणाम हो, और बैक्टीरिया के प्रत्यक्ष खून आक्रमण को बढ़ावा देने सकता है.
हमने हाल ही में मौखिक एल के एक उपन्यास माउस मॉडल विकसित बारीकी से मानव रोग 16 के सभी चरणों mimics कि monocytogenes संक्रमण. चूहों cont के टुकड़े निगलना जब संक्रमण होता हैखाद्य, गैर दर्दनाक है कि एक ऐसी प्रक्रिया है, aminated और प्रयोगशाला जांचकर्ताओं द्वारा विशेष कौशल की आवश्यकता नहीं है. समय की एक असतत अवधि (36-48 घंटे) के लिए, एल monocytogenes reproducibly इस प्रकार पेट म्यूकोसा भर सरकाना और परिधि के ऊतकों के लिए प्रसार करने के लिए लिस्टेरिया रोगजनक द्वारा इस्तेमाल किया तंत्र की जांच के लिए अनुमति देता है, केवल जठरांत्र पथ उपनिवेश. महत्वपूर्ण बात है, मॉडल संक्रमण के लिए मेजबान जन्मजात प्रतिरोध में मतभेद का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. पिछले एक अध्ययन में, हम BALB / ग / जम्मू चूहों द्वारा / एल की घातीय प्रतिकृति के साथ, भोजन जनित listeriosis को अत्यधिक अतिसंवेदनशील थे कि पता चला आंत, तिल्ली, जिगर, और पित्ताशय 16 में होने वाली monocytogenes. इसके विपरीत, C57BL 6 / चूहों एल का केवल क्षणिक उपनिवेशवाद के साथ, भोजन जनित संक्रमण के लिए प्रतिरोधी रहे थे monocytogenes इन ऊतकों में से प्रत्येक में होने वाली. बारीकी से मानव रोग mimics कि खाद्य जनित मॉडल की एक और विशेषता यह है कि प्राकृतिक प्रसार हैमस्तिष्क संक्रमण के बाद के चरणों (5-7 डीपीआई) के दौरान हुई है.
Protocol
Representative Results
Discussion
जन्मजात चूहों दिन के हर समय खिलाने के लिए समान रूप से स्वीकार नहीं कर रहे हैं, और दूषित रोटी खाने के लिए अपनी इच्छा दोनों तनाव प्रकार और चूहों 17 साल की उम्र पर निर्भर करेगा. हमारे अनुभव में, 6-9 सप्ताह प?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम SEFD को सम्मानित राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान (AI079442 और AI091918) से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया
Materials
| Name of Reagent/Material | Company | Catalog Number | Comments |
| Brain Heart Infusion Agar | Difco | BD-241830 | |
| Lithium chloride | Sigma | L9650 | |
| Glycine | Omnipur | 4840 | |
| EDTA | Gibco | 15575-038 | |
| DTT | Sigma | D5545 | |
| Collagenase, type IV | Worthington | LS004089 | |
| DNAse I | Worthington | LS002007 | |
| Diff-Quik | Dade-Behring | B4132-1A | |
| PowerGen 1000 homogenizer | Fisher | 14-261-06 | |
| stainless steel type 304 mesh #80 | Small Parts, Inc. | CX-0080-C | |
| Cytospin | Statspin | M801-22 |
References
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