Ein Protokoll für die nicht-invasive intraductal Lieferung von wässrigen Reagenzien zu der Brustdrüse der Maus beschrieben. Die Methode nutzt lokalisierte Injektion in den Brustwarzen der Brustdrüsen Targeting Milchgänge speziell. Diese Technik ist für eine Vielzahl von Verbindungen, einschließlich siRNA, chemotherapeutischen Mitteln und kleinen Molekülen anpaßbar.
Hier beschreiben wir ein Protokoll, um verschiedene Reagenzien zu der Brustdrüse der Maus über intraduktalen Injektionen zu liefern. Lokalisierten Arzneimittelabgabe und Knock-down von Genen innerhalb der Brust Epithel war schwierig, aufgrund des Fehlens geeigneter Targeting-Moleküle, die unabhängig von Entwicklungsstufen wie Schwangerschaft und Stillzeit zu erzielen. Hier beschreiben wir eine Technik für die lokale Verabreichung von Reagenzien an der Brustdrüse bei über intraduktale Injektion in die Brustwarzen von Mäusen jeder Phase im Erwachsenenalter. Die Injektionen können auf lebende Mäuse unter Anästhesie durchgeführt werden, und damit für eine nicht-invasive und lokalisierte Arzneimittelabgabe auf die Brustdrüse. Ferner können die Injektionen über mehrere Monate ohne Beschädigung der Brustwarze wiederholt. Vital-Farbstoffe, wie Evans Blue sind sehr hilfreich, um die Technik zu lernen. Nach intraductal Injektion des blauen Farbstoffs wird das gesamte Milchgangbaum für das Auge sichtbar. Weiterhin fluoreszierend markierten Reagenzien ermöglichen auchVisualisierung und Verteilung in der Brustdrüse. Diese Technik ist für eine Vielzahl von Verbindungen, einschließlich siRNA, chemotherapeutische Mittel und kleine Moleküle anpassbar.
Die Maus-Brustdrüse eines komplexen duktalen-alveoläre Struktur, die in einen zentralen Kanal an der Brustwarze konvergiert besteht. Bei Mäusen als auch Menschen, die Mehrheit von Brusttumoren entstehen in den Epithelzellen der Milchgänge. Aktuell verfügbare Behandlungen gehören intravenöse Chemotherapie, Bestrahlung und Operation. Lokalisierte intraduktalen Behandlungen erforscht worden 1-3 und bieten erhebliche Vorteile in Bezug auf reduzierte Toxizität und Nebenwirkungen. Allerdings bleiben einige Herausforderungen bevor diese weiter verbreitet angewandt werden. Die Fähigkeit, vergleichbare Verfahren in der Brustdrüse der Maus ausführen erleichtert die Charakterisierung von intraduktalen Interventionen. Hier präsentieren wir eine nicht-invasive Methode für die Lieferung von Reagenzien direkt in die Maus-Brustkanal.
Intraduktales Lieferung von Chemotherapeutika in beiden Brustkrebspatienten und Mausmodellen wurde zuvor gezeigt, als hoch wirksam ohne Anzeichen vonsystemische Toxizität oder langfristige histopathologischen Veränderungen 6.3. Außerdem Tumorzellinjektion und Lentivirusvektor Lieferung von Onkogenen sind gezeigt worden, zuvor möglich sein über intraduktale Injektion 10.07.
Neben der Medikamentenabgabe, ist diese Vorgehensweise sinnvoll für lokale Schweigen der Brustdrüse Gene durch intraduktale Injektion von siRNA. Injektion kleiner Mengen von siRNA-Lösung wirksam ist, ohne die Anatomie und Physiologie der Milchdrüse. In unserem Labor haben wir vor kurzem erfolgreich Silencing Schlüsselvermittler Genen in transgenen Mäusen, die spontan resultierenden Brusttumoren in der Prävention von Tumorprogression (Brock et al., Unveröffentlicht) gezeigt. Wir waren in der Lage, alle zwei Wochen Injektionen in die gleiche Nippel bis zu 7 mal in 2-wöchigen Intervallen ohne sichtbare Gewebeschädigung oder toxische Wirkungen zu wiederholen.
Intraduktale Injektionen können in einer erwachsenen Maus, um Ent-Adresse zeitgesteuert werdenrelevant Entwicklung der Brustdrüse opmentally spezifische Ereignisse während der Schwangerschaft, Stillzeit und Rückbildung oder späteren Stadien während der Tumorentstehung und Progression Ziel. Virgin Frauen so jung wie Alter von 8 Wochen haben nicht-invasiv in unserem Labor injiziert.
Transgene und Knockout-Mäuse sind wertvolle Werkzeuge für die Untersuchung der in vivo-Rolle der einzelnen Gene bei Brustkrebs. Es ist jedoch kostspielig und zeitaufwendig, diese Tiere zu erzeugen, und das Gen Zuschlags gewöhnlich überall die manchmal schließt uns Erkennen der spezifischen Wirkung des Gens auf die Brustdrüse. Daher wäre eine gezielte Zuschlags Probleme der unspezifischen Nebenwirkungen und Toxizitäten in anderen Organen zu verringern.
Die intraduktale Injektion von siRNA hier vorge ermöglicht die lokalisierte Gen-Knockdown in der Maus Brustdrüse. Es ist eine schnelle Methode für eine gezielte und lokale Arzneimittelabgabe an der Brustdrüse nicht siRNA begrenzt. Solch eine Brustdrüse spezifische Arzneimittelabgabe vermeidet unspezifische Nebenwirkungen und Toxizität für andere Organe und ermöglicht die Untersuchung von Gen-Veränderungen zu bestimmten Zeitpunkten während der Entwicklung der Brustdrüse und Brusttumorbildung. Es gibt keine Beweise für siRNA-Partikel in nicht-injizierten Drüsen, der Leber oder anderen Organen ein weiterer Beweis, dass dieses Verfahren stellt eine bevorzugte Weise zur lokalisierten Gens Zuschlag in der Brustdrüse. Darüber hinaus können die intraduktalen Injektionen pro Woche oder alle zwei Wochen über mehrere Monate wiederholt werden, um langfristige Überwachung von therapeutischen Wirkstoffen ermöglichen.
Diese Technik eröffnet die Möglichkeit zur Untersuchung der intraductal Lieferung verschiedener Reagenzien auf die Maus-Brustkanälen. Fortschritte in der lokalisierte Abgabe in gut charakterisierten Mausmodellen sollte die Anwendung der nicht-invasiven beschleunigen, gezielte Therapiestrategien beim Menschen.
The authors have nothing to disclose.
Die Autoren bedanken sich bei Michael Goldberg zur Herstellung von stabilisierten siRNA-Lösung und Heather Tobin für ihre Unterstützung bei den Tieren bedanken. Diese Studie wurde von DOD Innovator Award W81XWH-08-1 bis 0659 um DEI finanziert. Die Postdoc-Ausbildung von SK wurde von der Susan G Komen Stiftung (KG101329) unterstützt. Die Autoren bedanken sich bei Kristin Johnson für die Vorbereitung der schematische danken.
Name of Reagent/Material | Company | Catalog Number | Comments |
isoflurane | 2-4% | ||
meloxicam | 5-10 mg/ml | ||
Evans blue dye | Sigma-Aldrich | E2129-10G | 0.2% in PBS |
hair removing cream | Veet | Choose sensitive option | |
stereoscope | Zeiss | Stemi DV4 | |
micro-dissecting tweezers | Roboz | rs-4976 | With a 0.10 x 0.06 mm tip made of dumostar |
Hamilton syringe | Hamilton | 7637-01 | |
33-gauge needle | Hamilton | 7803-05 | point style 4, 12 degree bevel (standard) |
siGLO cyclophilin B control siRNA | Dharmacon | D-001610-01-05 |