マウス乳腺水性試薬の非侵襲管内送達のためのプロトコルが記載されている。この方法は、特に乳管を対象とした乳腺の乳首にローカライズ注入を利用しています。この技術は、siRNA、化学療法剤および小分子を含む化合物の様々な適合可能である。
ここに私たちは、管内注射を経由して、マウスの乳腺への様々な試薬を提供するためのプロトコルを記述します。局所的な薬物送達およびノックダウン乳腺上皮内の遺伝子のは、そのような妊娠や授乳などの発達段階とは無関係である、適切な標的化分子の不足のために達成することは困難であった。ここで、我々はマウスの乳首に管内注射によって成人期にどの段階で乳腺に試薬の局所送達するための技術について説明します。注射は、麻酔下で、生きたマウスで行い、乳腺に対して非侵襲的で局所的な薬物送達を可能にすることができる。さらに、注射は、ニップルを損傷することなく、数ヶ月にわたって繰り返すことができる。このようなエバンスブルーなどの重要な染料は、テクニックを学ぶことは非常に有用である。青色色素の管内注入すると、全体の乳管ツリーは、目に見えるようになる。さらに、蛍光標識された試薬も可能にする乳腺内の可視化と配布。この技術は、siRNA、化学療法剤、および小分子を含む種々の化合物に適応可能である。
マウス乳腺腺は乳首の中央ダクトに収束する複雑な乳管肺胞ツリーで構成されている。マウスだけでなくヒトでは、乳房の腫瘍の大部分は、乳管の内側を覆う上皮細胞に由来する。現在利用可能な治療は、静脈内化学療法、放射線、手術が含まれる。ローカライズされた管内の治療は、1〜3を探検し、減少した毒性や副作用の点で重要な利点を提供しています。これらは、より広く適用することができる前に、しかし、いくつかの課題が残っている。マウス乳腺腺で同等の手順を実行する能力は、管内介入の特徴付けを容易にする。ここでは、直接マウス乳腺ダクト内に試薬を送達するための非侵襲的方法を提示する。
乳癌患者およびマウスモデルの両方における化学療法剤の管内送達は、以前の証拠を有する高度に有効であることが示された全身毒性や長期の組織病 理学的には3-6に変更されます。さらに、腫瘍細胞注射と癌遺伝子のレンチウイルスベクター送達は、管内噴射7-10を介して実現可能であることが以前に示されている。
薬物送達に加えて、この手順は、siRNAの管内注入による乳腺遺伝子のサイレンシングローカルに有用である。 siRNA溶液の小容量の注入は乳腺の解剖学と生理学を変更することなく、効果的である。当研究室では最近、自然発生的に(Brockさんら 、未発表)腫瘍進行の予防になり乳腺腫瘍を発症するトランスジェニックマウスでの重要なメディエーター遺伝子の正常な抑制を示している。私たちは、目に見える組織損傷または毒性を2週間間隔で7回まで同じ乳首に隔週注射を繰り返すことができました。
管内注射は開発に取り組むための成体マウスでタイムアウトすることができます妊娠、授乳、そして退行中または腫瘍の発生および進行の間に、後の段階をターゲットに乳腺発達に関連するopmentally固有のイベント。 8週齢の幼い処女雌は、私たちの研究室で非侵襲的に注入されている。
トランスジェニックおよびノックアウトマウスは、乳癌における個々の遺伝子のインビボでの役割を研究するための非常に貴重なツールである。しかしながら、これらの動物を生成するために、コストと時間がかかり、遺伝子ノックダウンは、時には乳腺上のその遺伝子の特異的な効果を認識するから私たちを排除する通常ユビキタスである。したがって、標的ノックダウンは、他の器官における非特異的な副作用および毒性の問題を軽減するであろう。
ここに提示されたsiRNAの管内注入は、マウスの乳腺の局所的な遺伝子ノックダウンを可能にします。これは、siRNA送達に限定されるものではなく、乳腺を標的とし、局所的な薬物送達のための迅速な方法である。このような乳腺特異的薬物送達は、他の器官への非特異的な副作用および毒性を回避し、乳腺発達および乳房腫瘍形成の間の特定の時点での遺伝子変化の研究を可能にする。済州の証拠はない非注射腺中のRNAの粒子、肝臓やこのメソッドは乳腺の局所的な遺伝子ノックダウンのための好ましい方法を提示していることのさらなる証拠を提供する他の臓器。さらに、管内注射は、治療剤の長期モニタリングを可能にするために数ヶ月にわたって毎週または隔週に繰り返すことができる。
この技術は、マウス乳腺管に様々な試薬の管内送達をアッセイするための可能性を開く。よく特徴付けられたマウスモデルにおける局所的送達における進歩は、非侵襲性の適用を加速する必要があり、ヒトにおける治療戦略の標的化。
The authors have nothing to disclose.
著者は、動物との彼女の援助のために安定化siRNA溶液とヘザートービンを製造するための、マイケル·ゴールドバーグに感謝したいと思います。この研究は、DEIのDODイノベーター賞W81XWH-08-1から0659によって資金を供給された。 SKのポスドクトレーニングはスーザンGコーメン財団(KG101329)によってサポートされていました。著者は、回路図の作成のためのクリスティン·ジョンソンに感謝したいと思います。
Name of Reagent/Material | Company | Catalog Number | Comments |
isoflurane | 2-4% | ||
meloxicam | 5-10 mg/ml | ||
Evans blue dye | Sigma-Aldrich | E2129-10G | 0.2% in PBS |
hair removing cream | Veet | Choose sensitive option | |
stereoscope | Zeiss | Stemi DV4 | |
micro-dissecting tweezers | Roboz | rs-4976 | With a 0.10 x 0.06 mm tip made of dumostar |
Hamilton syringe | Hamilton | 7637-01 | |
33-gauge needle | Hamilton | 7803-05 | point style 4, 12 degree bevel (standard) |
siGLO cyclophilin B control siRNA | Dharmacon | D-001610-01-05 |