마우스 유방 동맥에 수성 시약의 비 침습성 췌관 전달을위한 프로토콜이 설명되어 있습니다. 이 방법은 특히 유방 덕트를 대상으로 유 방 땀 샘의 젖꼭지로 지역화 주입을 활용합니다. 이 기술은 siRNA를, 화학 요법 제와 작은 분자를 포함한 화합물의 다양한 적응할 수있다.
여기에서 우리는 췌관 내 주사를 통해 마우스의 유방 동맥에 여러 가지 시약을 제공 할 수있는 프로토콜을 설명합니다. 현지화 된 약물 전달 및 노크 다운 유방 상피 세포 내 유전자로 인해 이러한 임신과 수유 등의 발달 단계와 무관 한 적절한 표적 분자의 부족으로 달성하기 어렵다. 여기서, 우리는 생쥐의 젖꼭지에 췌관 내 주사를 통해 성년의 모든 단계에서 유선에 시약의 지역화 전달을위한 기술을 설명합니다. 주사 마취, 살아있는 쥐에서 수행하고, 유선에 대한 비 침습 및 지역화 된 약물 전달을 허용 할 수 있습니다. 또한, 주사는 유두를 손상하지 않고 몇 개월에 걸쳐 반복 될 수있다. 같은 에반스 블루 같은 중요한 염료 기술을 습득하는 것은 매우 도움이됩니다. 청색 염료의 췌관 주입하면, 전체 유관 나무는 눈에 보이지됩니다. 또한, 형광 표지 시약도 허용유선 내에서 시각화 및 유통. 이 기술은 siRNA를, 화학 요법 제, 작은 분자를 포함하는 화합물의 다양한 적응할 수있다.
마우스 유방 선은 젖꼭지에서 중앙 덕트에 수렴 복잡한 유관-폐포 나무로 구성되어있다. 마우스뿐만 아니라 인간, 유방 종양의 대부분은 우유 덕트 안감 상피 세포에서 유래. 현재 가능한 치료는 정맥 화학 요법, 방사선 및 수술을 포함한다. 현지화 된 췌관 치료는 1-3 탐구 감소 독성과 부작용의 측면에서 상당한 이점을 제공하고 있습니다. 이러한 널리 적용 할 수 있습니다 전에 그러나, 몇 가지 과제가 남아있다. 마우스 유방 동맥의 비교 절차를 수행 할 수있는 능력은 췌관 개입의 특성을 용이하게한다. 여기에 우리가 직접 마우스 유방 덕트에 시약의 전달을위한 비 침습적 인 방법을 제시한다.
유방암 환자와 마우스 모델 모두에서 화학 요법 제의 췌관 배송은 이전의 증거와 매우 효과적인 것으로 표시되었습니다독성 또는 장기 조직 병리학 적 3-6을 변경합니다. 또한, 종양 세포 주입 및 암 유전자의 렌티 바이러스 벡터 배달 이전에 췌관 주입 7-10을 통해 가능한 것으로 표시되었습니다.
약물 전달뿐만 아니라,이 절차는 siRNA를 췌관 내 주입을 통해 유선 유전자의 지역 침묵에 유용합니다. siRNA의 솔루션의 작은 볼륨의 주입은 유선의 해부학과 생리학을 변경하지 않으면 효과가있다. 우리의 실험실에서 우리는 최근에 자발적으로 (브록 등., 게시되지 않은) 종양의 진행의 예방의 결과로 유방 종양을 개발하는 형질 전환 마우스의 주요 매개체 유전자의 성공적인 침묵을 보여 주었다. 우리는 눈에 보이는 조직의 손상 또는 독성 2 주 간격으로 7 번까지 같은 젖꼭지에 격주 주사를 반복 할 수있게되었습니다.
췌관 내 주사는 DEVEL를 해결하기 위해 성인 마우스를 초과 할 수임신, 수유 및 퇴화 동안이나 종양 발생과 진행 과정 이후 단계를 대상으로 유선 개발과 관련된 opmentally 특정 이벤트. 8 주령 한 젊은 처녀 암컷은 우리의 실험실에서 비 침습적으로 주입되었다.
형질 전환 및 녹아웃 마우스는 유방암의 개별 유전자의 생체 내 역할을 연구하기위한 귀중한 도구입니다. 그러나, 많은 비용과 시간이 소요되는 이러한 동물을 생성 할 수 있으며 유전자 녹다운 때때로 유선 해당 유전자의 특정 효과를 인식 저희 배제하는 통상 유비쿼터스이다. 따라서, 대상 최저 다른 장기에 비 특정 부작용과 독성의 문제를 완화하는 것이다.
여기에 소개 된 siRNA의 췌관 주입 마우스 유방 동맥의 지역화 된 유전자 최저 수 있습니다. 그것은 siRNA를 전달로 제한되지 유선에 대한 대상 및 지역화 된 약물 전달을위한 빠른 방법입니다. 이러한 유선 특정 약물 전달은 다른 장기에 불특정 부작용 및 독성을 방지하고 유선의 발달과 유방 종양을 형성하는 동안 특정 시간 지점에서 유전자 변화를 연구 할 수 있습니다. SI의 증거는 없다비 주입 땀샘에서 RNA 입자 간 또는이 방법이 유선에서 지역화 된 유전자 최저에 대한 선호하는 방법을 제공합니다 추가 증거를 제공하는 다른 기관. 또한, 췌관 주사 치료제 장기간 모니터링을 허용하도록 수개월 동안 매주 또는 격주로 반복 될 수있다.
이 기술은 마우스 유방 덕트 다양한 시약 췌관 대금 시금위한 가능성을 연다. 잘 특성화 마우스 모델에서 현지화 된 배달의 발전은 비 침습의 응용 프로그램을 가속한다, 인간의 치료 전략을 대상으로.
The authors have nothing to disclose.
저자는 동물들과 함께 그녀의 도움을 안정화 siRNA의 솔루션과 헤더 토빈을 준비하는 마이클 골드버그에게 감사의 말씀을 전합니다. 이 연구는 DEI에 DOD 혁신 상 W81XWH – 08 – 1-0659에 의해 투자되었다. SK의 박사 학위 취득 후 교육을 수잔 G 코멘 재단 (KG101329)에 의해 지원되었다. 저자는 설계도의 준비를 위해 크리스틴 존슨에게 감사의 말씀을 전합니다.
Name of Reagent/Material | Company | Catalog Number | Comments |
isoflurane | 2-4% | ||
meloxicam | 5-10 mg/ml | ||
Evans blue dye | Sigma-Aldrich | E2129-10G | 0.2% in PBS |
hair removing cream | Veet | Choose sensitive option | |
stereoscope | Zeiss | Stemi DV4 | |
micro-dissecting tweezers | Roboz | rs-4976 | With a 0.10 x 0.06 mm tip made of dumostar |
Hamilton syringe | Hamilton | 7637-01 | |
33-gauge needle | Hamilton | 7803-05 | point style 4, 12 degree bevel (standard) |
siGLO cyclophilin B control siRNA | Dharmacon | D-001610-01-05 |