Fare meme bezi sulu reaktiflerin non-invazif intraduktal teslimat için bir protokol tarif edilmektedir. Bu yöntem, özellikle meme kanalları hedef meme bezlerinin meme lokalize enjeksiyon yararlanır. Bu teknik, siRNA, kemoterapötik maddeler ve küçük moleküller de dahil olmak üzere çeşitli bileşikler için uyarlanabilir.
Bu yazıda intraduktal enjeksiyon yoluyla fare meme bezinin çeşitli reaktifler teslim etmek için bir protokol açıklar. Lokalize ilaç verme ve knock-down meme epitel içinde genlerin nedeniyle bu tür gebelik ve emzirme gibi gelişim aşamaları bağımsız uygun hedefleme molekülünün eksikliği elde etmek zor olmuştur. Burada, farelerin meme intraduktal içine enjeksiyon ile erişkin herhangi bir aşamasında meme bezine reaktiflerin lokalize olarak verilmesi için kullanılan bir tekniği açıklar. Enjeksiyonlar anestezi altında, canlı farelerde gerçekleştirilen ve meme bezine bir non-invazif ve lokalize ilaç verilmesi için izin edilebilir. Ayrıca, enjeksiyon meme zarar vermeden birkaç ay boyunca tekrarlanabilir. Böyle Evans Blue gibi hayati boyalar tekniği öğrenmek için çok faydalıdır. Mavi boya intraduktal enjeksiyonu üzerine, bütün duktal ağaç gözle görünür hale gelir. Ayrıca, flüoresan etiketli reaktif maddeler de izin verirmeme bezinde görselleştirme ve dağıtım. Bu teknik, siRNA, kemoterapötik maddeler ve küçük moleküller de dahil olmak üzere çeşitli bileşikler için uyarlanabilir.
Fare meme bezi meme merkezi bir kanal içine yakınsayan kompleks duktal-alveolar ağaç oluşmaktadır. Farelerde hem de insanlarda, göğüs tümörlerinin çoğunluğu süt kanallarını astar epitel hücrelerinde kökenlidir. Şu an mevcut tedaviler intravenöz kemoterapi, radyasyon ve cerrahi içerir. Lokalize intraduktal tedaviler 1-3 araştırdı ve düşük toksisite ve yan etkiler açısından önemli avantajlar sunuyoruz edilmiştir. Bu daha yaygın olarak uygulanabilir önce Ancak, çeşitli zorluklar kalır. Fare meme bezinde benzer işlemleri gerçekleştirmek için yeteneği intraduktal müdahalelerin karakterizasyonu kolaylaştırır. Burada doğrudan fare meme kanal içine reaktiflerin teslimat için non-invaziv bir yöntem mevcut.
Meme kanseri hastalarında ve fare modellerinde hem de kemoterapötik maddelerin intraduktal dağıtım daha önce hiçbir kanıt ile son derece etkili olduğu gösterilmiştirsistemik toksisite ya da uzun vadeli histopatolojik 3-6 değiştirir. Bundan başka, tümör hücre enjeksiyonu ve onkogenlerin lentiviral vector teslim önce intraduktal enjeksiyon 7-10 ile uygun olduğu gösterilmiştir.
İlaç vermek için ek olarak, bu prosedür, siRNA intraduktal enjeksiyon yoluyla meme bezi genlerin yerel susturulması için yararlıdır. SiRNA çözüm küçük hacimli enjeksiyon meme bezinin anatomisi ve fizyolojisini değiştirmeden etkilidir. Laboratuarımızda yakın zamanda kendiliğinden (Brock ve diğ., Yayınlanmamış), tümör ilerlemesinin önlenmesi ile sonuçlanan meme tümörleri geliştirmektedir transgenik farelerde önemli aracı genlerin başarılı susturulması göstermiştir. Biz hiçbir görünür doku hasarı veya toksisite ile 2 haftalık aralıklarla 7 kata kadar aynı meme içine iki haftada enjeksiyonları tekrarlamak mümkün olmuştur.
İntraduktal enjeksiyonları devel adresine bir yetişkin fare zamanlı olabilirgebelik, emzirme ve involüsyon sırasında ya da tümör gelişimi ve ilerlemesi sırasında sonraki aşamalarını hedef meme bezi gelişimi ile ilgili opmentally özgü olaylar. Yaşı 8 hafta gibi genç bakire kadın Laboratuvarımızda non-invaziv enjekte edilmiştir.
Transgenik ve nakavt farenin göğüs kanserinde tek tek genlerin in vivo rolünü incelemek için çok değerli araçlardır. Bununla birlikte, pahalı ve zaman alıcı, bu hayvanlar oluşturmak için olan ve gen yok etme bazen meme bezi üzerinde bu genin özel etkileri fark bize önleyen bu genellikle yaygındır. Bu nedenle, hedef knockdown diğer organlarda spesifik olmayan yan etkiler ve toksisite sorunları giderecektir.
Burada sunulan siRNA intraduktal enjeksiyon fare meme bezi lokalize gen demonte sağlar. Bu teslimat siRNA ile sınırlı değildir meme bezi ile bir hedef ve lokalize ilaç verilmesi için hızlı bir yöntemdir. Bu gibi bir meme bezi özel ilaç verme diğer organlara spesifik olmayan yan etkiler ve toksisite önler ve meme bezi gelişimi ve göğüs tümör oluşumu sırasında belirli zaman noktalarında gen değişikliklerinin çalışma sağlar. Si hiçbir kanıt yokturOlmayan enjekte bezlerinde RNA parçacıklar, karaciğer ya da bu yöntem meme bezi lokalize gen demonte için tercih edilen bir yol sunar daha fazla kanıt temin etkilenebilir. Ayrıca, intraduktal enjeksiyon terapötik maddelerin uzun süreli izlenmesi için izin vermek için birkaç ay boyunca haftada bir veya iki haftada bir tekrarlanabilir.
Bu teknik, fare meme kanalları için çeşitli ajanların intraduktal teslim tahlil için olasılık açar. Iyi karakterize edilmiş fare modellerinde lokalize olarak verilmesi gelişmeler invazif olmayan uygulama hızlandırmak olmalıdır, insanlarda tedavi edici stratejiler hedef almıştır.
The authors have nothing to disclose.
Yazarlar hayvanlar ile ona yardım için stabilize SiRNA çözüm ve Heather Tobin hazırlamak için Michael Goldberg teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma DEI DOD Yenilikçi Ödülü W81XWH-08-1-0659 tarafından finanse edildi. SK doktora sonrası eğitim Susan G Komen vakıf (KG101329) tarafından desteklenmiştir. Yazarlar şematik hazırlanması için Kristin Johnson teşekkür etmek istiyorum.
Name of Reagent/Material | Company | Catalog Number | Comments |
isoflurane | 2-4% | ||
meloxicam | 5-10 mg/ml | ||
Evans blue dye | Sigma-Aldrich | E2129-10G | 0.2% in PBS |
hair removing cream | Veet | Choose sensitive option | |
stereoscope | Zeiss | Stemi DV4 | |
micro-dissecting tweezers | Roboz | rs-4976 | With a 0.10 x 0.06 mm tip made of dumostar |
Hamilton syringe | Hamilton | 7637-01 | |
33-gauge needle | Hamilton | 7803-05 | point style 4, 12 degree bevel (standard) |
siGLO cyclophilin B control siRNA | Dharmacon | D-001610-01-05 |