A high incidence of tumor recurrence after resection of liver metastases remains an unsolved problem. The illustrated mouse model may be useful to investigate the reasons for such recurrences. It combines a liver resection model with intrahepatic tumor cell injection for the first time.
השיעור הגבוה של הישנות הגידול לאחר כריתה של נגעים בכבד גרורתי נשאר בעיה לא פתורה. פיקדונות תאים סרטניים קטנים, אשר אינם יכולים לאתר הדמיה קלינית שיגרתית, עשויים להיות מגורה על ידי גורמי התחדשות כבדים לאחר כריתה כבדה. לא ברור לחלוטין, עם זאת, אשר גורם הם קריטיים עבור ישנות גידול.
מודל העכבר הציג עשויה להיות שימושי כדי לחקור את המנגנונים לשחק תפקיד בהתפתחות של נגעים ממאירים חוזרים לאחר כריתה כבדה. המודל משלב טכניקות הקלות לבצע לשחזור של כמויות מוגדרות של הסרת כבד רקמות אינדוקצית גידול (בזריקה) בעכברים. החיות טופלו או פיום בטן יחיד, כריתה כבדה 30%, או כריתה כבדה 70%. כל בעלי החיים אחרים-כך נתנו זריקת תאים סרטניים לתוך רקמת הכבד הנותרת. אחרי שבועיים של התבוננות, הכבדים וגידולים הוערכו על גודל ומשקלנבדק על ידי אימונוהיסטוכימיה.
לאחר כריתה כבדה 70%, היקף הגידול והמשקל הוגדלו באופן משמעותי לעומת פיום בטן בלבד (p <0.05). בנוסף, אימונוהיסטוכימיה (Ki67) הראתה קצב התפשטות גידול גדל בקבוצת הכריתה (p <0.05).
ממצאים אלה מעידים על השפעת מנגנוני התחדשות כבדות על צמיחת גידול intrahepatic. בשילוב עם שיטות כמו בדיקות היסטולוגית או ניתוח RNA, במודל העכבר תאר יכול לשמש יסוד להביא לבחינה מדוקדקת של גורמים שונים מעורבים צמיחת גידול וישן מחלה גרורתית בתוך הכבד. מספר לא מבוטל של משתנה כגון אורך תצפית לאחר ניתוח, הקו הסלולרי משמש להזרקה או העיתוי של הזרקת כריתה כבדה להציע מספר זוויות כאשר בוחן שאלה ספציפית בהקשר של גרורות שלאחר כריתה. המגבלות של הליך זה הן authorization לבצע את ההליך על בעלי חיים, גישה למתקן ניסויים בבעלי חיים מתאים ורכישת ציוד מסוים.
סרטן המעי הגס (CRC) מהווה כמעט 9% מכלל הגידולים הממאירים. זהו סוג הסרטן הנפוץ ביותר השלישי, הן בארצות הברית ובעולם. שיעורי תמותה עולמיים מטווח CRC מ 300,000 מעל 500,000 בשנת 1. עשרים אחוזים מהחולים סובלים גרורות בכבד עם גילוי הגידול הגס שלהם. גרורות Resectable מטופלים בדרך כלל על ידי 2,3 כריתה כבדה חלקית. טכניקות כירורגיות משופרות, אסטרטגיות multimodal חדשות הגדרות חדשות של גרורות resectable להפוך את הטיפול של כריתה חלקית בכבד אפשרית עבור מספר גדל והולך של חולים 4.
ישנות ממאירויות בכבד משני, לעומת זאת, הוא sequalae קליני מאתגר בכירורגיה העיכול מודרנית. חולים עם CRC שעברו כריתה של גרורות בכבד יש סיכוי של 30 עד 50% לפתח גידול חדש שריד הכבד שלהם 5. לכן, יש צורך במחקר נוסף עלהמנגנונים המעורבים הישנות גרורות בכבד.
כריתה כבדה של כ -70% מפוצית בדרך כלל תוך מספר שבועות על ידי רקמת כבד הנותרת. התחדשות זו כרוכה מספר מנגנונים, כולל ציטוקינים כמו אינטרלאוקין 6 (IL-6), אלפא tumor necrosis factor (TNF-α), גורם הגדילה hepatocyte (HGF) והפכו בטא גורם הגדילה (TGF-β), גורם (vascular endothelial growth VEGF metalloproteases מטריקס,) (MMP-2 ו MMP-9) ו CXC-כמוקינים 6-11. חומרים אלה תומכים התחדשות כבדה ויכולים גם להיות אחראי על שיעורי הישנויות הגבוהים של ממאירויות כבדה ראשונית ומשנית ידי גרימת הצמיחה של פיקדונות תאים סרטניים קטנים בכבדה הנותרים אשר אינם מזוהות על ידי הדמיה קלינית שיגרתית. סיבתיות זה לא הוכחה עד כה.
ההשערה הבאה הוקמה. לאחר כריתה חלקית בכבד, גורמי ההתפשטות שאחראים חיוהיפרטרופיה r עלולה גם לגרום לצמיחת תאים סרטניים וטרם ראו בכבד. במודל של עכברי תוכנן אשר בשילוב הטכניקות של כריתה כבדה אינדוקצית גידול. שלושים עכברים athymic בעירום-foxn1nu / נו חולקו לשלוש קבוצות של עשר חיות כל. כל אחד מהם טופל או פיום בטן לבד (קבוצת א '), כריתה כבדה 30% (הקבוצה B) או כריתה כבדה 70% (קבוצת ג'). בעלי חיים בכל הקבוצות לאחר מכן קבלו זריקת תאים סרטניים לתוך חלק נותר מוגדר של הכבד, כדי לדמות תאים סרטניים רדומים. בעלי חיים שבו נצפו במשך שבועות ומוערכים אז לצמיחת גידול היפרטרופיה כבד.
המטרה הייתה ליצור מודל שיכול לשמש כדי לחפש את הגורמים המולקולריים pathogenetic שעשוי לשחק תפקיד היווצרות גידול שלאחר כריתה. שיטה זו עשויה להיות מועילה בהערכה: מקורם של גורמי האנדוקרינית מעורבים התחדשות כבדה; המנגנונים האחראים Tum intrahepaticאו צמיחה לאחר כריתה כבדה; ואת נפח כבד הכריתה הכרחי לזירוז צמיחת גידול intrahepatic. השיטה הבאה שבוצעה רק על בעלי חיים משום שהם מבטיחים לתרום להבנת עקרונות ביולוגיים בסיסיים להתפתחות ידע שניתן צפוי להניב הטבות לבני אדם על ידי אפשרויות טיפול טובות. בשל המנגנונים המעורבים בעניינים אלה, זה היה צריך להיבדק in vivo, כמו שיטות במבחנה לא יכולות לספק ייצוג ריאליסטי של הפתולוגיה האנושית.
חקירות אלה עשויות להוביל לגילוי של יעדים רלבנטיים עבור אפשרויות טיפול מניעתי להפחתת ישנות גידול.
ניסויים קודמים לביצוע ניתוחים במכרסמים הצליחו לזהות משתנים מסוימים שיכול לשמש כמקורות משוא פנים. על מנת לקבל תוצאות מהימנות ותקפות, לשקול את אמצעי הזהירות הבאה.
צום טרום אופ שיגרתי יכול להוביל כבד steatosis 12, אשר עשוי לעכב התח?…
The authors have nothing to disclose.
תודות מיוחדות ללכת לד"ר בנימין Motsch עזרתו שאלות טכניות. המחברים גם רוצים להכיר ד"ר מרקוס פרשנר ו בירק מולר עבור תמיכה במולטימדיה שלהם, אריקה Magelky עבור המומחיות שלה העריכה וליסה הורנונג, ד"ר רולנד Jurgons ופרופ סטפן פון Hörsten (כל מן פרנץ-Penzoldt-מרכז, אוניברסיטת Erlangen) על המקצועיות שלהם טיפול לטיפול בבעלי חיים. אנו מודים פרופ 'מיכאל Neumaier במכון לכימיה קלינית, מנהיים הפקולטה לרפואה של אוניברסיטת היידלברג, גרמניה למתן תאים סרטניים MC38.
העבודה הנוכחית בוצעה מילוי הדרישות לקבלת תואר "דוקטור לרפואה". על פרידריך אלכסנדר-אוניברסיטת ארלנגן-נירנברג (FAU).
Equipment | |||
Operation Microscope | Zeiss | OPMI-1 FC S21 | |
Induction Cage (Plexiglas Box) | UNO BV, Netherlands | 180000132 | |
Flowmeter + Connection Kit | UNO BV, Netherlands | 180000008 | |
UNO Vaporizer Sigma Delta | UNO BV, Netherlands | 180000002 | |
Key Filler for Anesthetic | UNO BV, Netherlands | 180000010 | |
Activated Charcoal Filter Adsorber | UNO BV, Netherlands | 180000140 | |
Gas Exhaust Unit | UNO BV, Netherlands | 180000118 | |
Face Mask for mouse | UNO BV, Netherlands | 180000065 | |
Vaporizer Stand | UNO BV, Netherlands | 180000006 | |
Heat lamp | Physitemp Instruments | HL-1 | |
Styrofoam Pad | RAYHER | 30074000 | |
Third Hand Tool | TOOLCRAFT | ZD-10F | |
Precision Scales | Kern | EW 220-3NM | |
Scales | Kern | EMB 500-1 | |
Sliding Caliper | MIB | MIB 82026100 | |
Microdissection forceps | Braun/Aesculap | BD195R | |
Microdissection scissors | Braun/Aesculap | FD100R | |
Microdissection needle holder | Braun/Aesculap | BM563R | |
Retractor | Fine Science Tools (F.S.T.) | No. 17001-0 | Type: Bowmann |
Clamp | Braun/Aesculap | BJ002R | |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Expendable Items | |||
(NOTE: Quantities are per animal and procedure) | |||
Foliodrape sterile cover (45x75cm) | Hartmann | 2775001 | |
Sterile Cotton Swabs (2x) | Hartmann | 4700151 | Peha |
Sterile fluid (0,9%NaCl) | Braun | 3570310 | PZN=04454809 |
Disinfectant (Softasept – 250ml) | Braun | 3887138 | PZN=0762008808505018 |
2 x 1ml syringe (Injekt-F ) | Braun | 9166017V | |
26G canula (Sterican) – for Carprofen injection | Braun | 4665457 | |
30G canula (Sterican) – for Tumor injection | Braun | 4656300 | |
Caprofen (=Rimadyl) | Pfizer | QM01AE91 | |
Metamizole (=Novaminsulfon) | Ratiopharm | 16543.00.00 | |
4-0 Vicryl suture | Ethicon | J835G | |
5-0 Prolene suture | Ethicon | 8618G | |
SafeLock Flex-Tube 1.5mL | Eppendorf | 22363778 | |
4×4 Gauze Sponge | Kendall/Covidien | UPC: 728795135355 | ASIN: B005BFQTWM |
Large paperclip | ACCO | A7072510G | |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Animals | |||
Female athymic nude-foxn1nu/nu | Harlan Laboratories B.V. | Code 069 |