Vi præsenterer en protokol til brug af ætanol som opløsningsmiddel til at udtrække og karakterisere taiwanske grønne propolis, der udstiller antibakterielle aktivitet.
Taiwanske grønne propolis er rig på prenylated flavonoider og udstiller en bred vifte af biologiske aktiviteter, såsom antioxidant, antibakterielle, og anticancer ones. De bioaktive stoffer af taiwanske grønne propolis er propolins, nemlig C, D, F og G. Koncentrationen af propolins i taiwanske grønne propolis varierer afhængigt af sæson og geografisk placering. Det er således afgørende at indføre en standard og repeterbare procedure for bestemmelse af kvaliteten af taiwanske grønne propolis. Vi præsenterer her, en protokol, der bruger ethanol-baseret udvinding, high-performance væskekromatografi og antibakterielle aktivitet analyse for at karakterisere taiwanske grønne propolis kvalitet. Denne metode angiver, at 95% og 99,5% ethanol ekstraktioner opnå maksimal tørstof udbyttet fra taiwanske grønne propolis, hvilket giver de højeste koncentrationer af propolins, der har antibakterielle egenskaber. Ifølge disse resultater anses denne protokol for pålidelige og repeterbare for bestemmelse af kvaliteten af taiwanske grønne propolis.
Propolis er et naturligt harpiksholdige blanding fremstillet af arternes bi Apis mellifera. Propolis har været bredt anvendt siden oldtiden i folkemusik medicin. En undersøgelse for nylig rapporteret, at propolis er gavnlige for at forhindre mikrobielle infektioner og betændelse1. Talrige undersøgelser har vist, at de vigtigste bioaktive stoffer i propolis er flavonoider, phenol acid estere, prenylated p-coumaric syrer og diterpenic syrer2,3. Til dato, er 10 prenylated flavanone derivater fra taiwanske grønne propolis blevet identificeret gennem high-performance væskekromatografi (HPLC)4,5,6,7. Den mest udbredte blandt disse er propolins C, D, F og G5,7. De store biologiske effekter af taiwanske grønne propolis er korreleret med dens høje indhold af propolins8.
Koncentrationerne af bioaktive stoffer i propolis varierer meget afhængigt af sæson og geografiske placering som propolis er fremstillet. Europæiske propolis indeholder hovedsagelig flavonoid-aglycone og phenolforbindelser syrer-9. De store bioaktive stoffer i propolis fra Brasilien er prenylated p-coumaric syrer, såsom artepillin C10. En undersøgelse viste, at sæsonen er en kritisk faktor for bestemmelse af det samlede propolin indholdet i taiwanske grønne propolis11. Propolin indhold i taiwanske grønne propolis er højeste om sommeren (maj – juli) og lavest i vinteren11. Propolis antibakterielle ejendom har været almindeligt anset for at være en indikator for biologisk aktivitet. Generelt, prøver af propolis er indsamlet fra forskellige regioner har udstillet en lignende antibakterielle ejendom; for eksempel, det er generelt effektivt mod næsten alle gram-positive bakterier og udstiller en begrænset antibakterielle effekt mod gram-negative bakterier10,12,13. Synergistisk interaktioner mellem flavonoider i propolis påvistes for at har en antibakteriel virkning14. På samme måde, taiwanske grønne propolis blev rapporteret at have en antimikrobiel virkning mod gram-positive bakterier15. Derudover identificeret en undersøgelse også en antimikrobiel virkning af vekselvirkninger mellem propolins i taiwanske grønne propolis8.
Karakterisering af de bioaktive stoffer i propolis er vanskeligt, fordi dens kemiske sammensætning kan variere alt efter sit udspring af oprindelse. Det er derfor nødvendigt at fastsætte en realistisk og repeterbare metode til bestemmelse af kvaliteten af den taiwanske grønne propolis. Dog er der opstillet ingen standardprocedure for taiwanske grønne propolis ekstraktion og efterfølgende funktionalanalyse. Flere metoder, der skiftevis gælder organiske og uorganiske opløsningsmidler har været foreslået for propolis udvinding16,17,18,19,20. Da propolis er en lipofile blanding, har undersøgelser vist at økologisk udvinding er bedre end uorganiske udvinding8,18,19. Den samlede propolin koncentration i taiwanske grønne propolis og dens antibakterielle egenskaber er vigtige indikatorer for kvaliteten af taiwanske grønne propolis. Formålet med denne undersøgelse er således, at præsentere en protokol til brug af ætanol som opløsningsmiddel til at udtrække og karakterisere de antibakterielle egenskaber af taiwanske grønne propolis.
En undersøgelse rapporterede, at udblødning, ved hjælp af forskellige koncentrationer af ethanol, kunne anvendes til brasilianske propolis udvinding17; Men, processen var tidskrævende17. Det tog mindst 10 dage til at udtrække de bioaktive stoffer, såsom phenol indhold, fra brasilianske propolis17. Alternativt, ethanol udvinding i kombination med opvarmning ved 37 ° C, 50 ° C og 70 ° C i 30 min er blevet foreslået til at udtrække brasilians…
The authors have nothing to disclose.
Dette håndskrift blev redigeret af Wallace akademiske redigering.
ethanol | Sigma-Aldrich | E7023 | |
Whatman no. 4 filter paper | Sigma-Aldrich | WHA1004125 | |
methanol | Sigma-Aldrich | 34860 | |
reverse phase RP-18 column | Phenomenex Inc. | 00G-0234-E0 | |
Staphylococcus aureus | ATCC | BCRC 10780 | |
Escherichia coli | ATCC | BCRC 10675 | |
tryptic soy broth | Sigma-Aldrich | 22092 | |
nutrient broth | Sigma-Aldrich | 70122 | |
dimethyl sulfoxide | Sigma-Aldrich | D2650 | |
spice grinder | Waring | WSG60K | |
microplate Reader | Molecular Devices | EMAX PLUS | |
HPLC system | Agilent | 1200 Series | |
vacuum evaporation | BÜCHI | Rotavapor R-215 |