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Chemistry

SNS 코발트(II) 간알코올탈수소효소의 집게 모델 복합체 의 제조

doi: 10.3791/60668 Published: March 19, 2020

Summary

간 알코올 탈수소효소의 SNS 핀서 코발트(II) 모델 복합체의 제조가 여기에 제시된다. 복합체는 CoCl2·6H2O로 리간드 전구체를 반응시킴으로써 제조될 수 있고, 디에틸 에테르가 코발트 복합체를 함유하는 아세토니트릴 용액으로 천천히 확산되도록 함으로써 재결정화될 수 있다.

Abstract

화학 모델 복합체는 효소의 활성 부위를 나타내기 위해 제조된다. 이 프로토콜에서 삼각측량 집게 리간드 전구체(각각 2개의 유황 및 1개의 질소 공여자 원자 기능(SNS)를 소유하고 비스-이미다졸 또는 비스트리아졸 화합물을 기반으로)의 패밀리는 CoCl2·6H2O와 함께 금속화되어 삼지창 면체 코발트(II) 복합체를 감당할 수 있다. 코발트(II) 모델 복합체의 간 알코올 탈수소효소의 제제는 허구이다. 리간드 전구체를 함유하는 아세토니트릴 용액에 CoCl2·6H2O를 첨가할 때 빠른 색상 변화에 기초하여, 복합체는 빠르게 형성된다. 금속 복합체의 형성은 용액이 하룻밤 동안 역류할 수 있도록 허용한 후에 완료된다. 이러한 코발트(II) 복합체는 간 알코올 탈수소효소(LADH)에서 아연 활성 부위의 모델역할을 한다. 복합체는 단결정 X선 회절, 전기 분무 질량 분광법, 자외선 이시광선 분광법 및 원소 분석을 사용하는 것이 특징입니다. 정확하게 복잡한의 구조를 결정하기 위해, 그 단결정 구조를 결정해야합니다. X 선 회절에 적합한 복합체의 단결정은 디에틸 에테르의 느린 증기 확산을 통해 코발트 (II) 복합체를 포함하는 아세토나이트트릴 용액으로 성장합니다. 고품질 결정의 경우, 재결정화는 일반적으로 1주일 이상 또는 그 이상에 걸쳐 이루어집니다. 이 방법은 다른 모델 조정 단지의 준비에 적용 될 수 있으며 학부 교육 실험실에서 사용할 수 있습니다. 마지막으로, 다른 사람들이 자신의 연구에 유익한 단결정을 얻기 위해이 재결정 방법을 찾을 수 있다고 믿어진다.

Introduction

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제시된 방법의 목적은 금속로효소의 촉매 활성을 더 이해하기 위해 LADH의 소분자 유사체를 제조하는 것이다. LADH는 보조 인자 결합 도메인 및 아연(II) 금속 함유 촉매 도메인1을포함하는 디메릭 효소이다. LADH는, 공동 인자 NADH의 존재, 케톤 및 알데히드각각의 알코올 유도체2를감소시킬 수 있다. NAD+의존재에서, LADH는 케톤과 알데히드2에알코올의 산화의 역 촉매를 수행 할 수 있습니다. LADH의 활성 부위의 결정 구조는 그것의 아연 (II) 금속 센터가 히스티딘 측사슬과 2 개의 유황 원자에 의해 제공되고 두 개의 시스테인 리간드3에의해 제공되는 하나의 질소 원자에 결합되어 있음을 보여줍니다. 추가 연구는 아연 금속 센터가 비질 물 분자로 결찰되어 금속 센터 주위에 의사 - 적층 기하학의 결과로4.

우리는 이전에 보고및 활용 SNS 핀터 리간드 전구체뿐만 아니라 삼각리그 리간드 전구체를 포함하는 Zn (II) 복합체를 형성하기 위해 ZnCl2와 리간드 전구체를 금속화5,,6,,7. 이러한 리간드 전구체는 도 1에도시되어 있다. 이러한 아연(II) 복합체는 전자 가난한 알데히드의 공양량 감소를 위한 활성을 나타내었으며, 따라서 LADH를 위한 모델 복합체이다. 이어서, 일련의 구리(I) 및 구리(II) 복합체의 합성 및 특성화는 SNS 리간드 전구체를 함유하고 있는8,,9,,10으로보고되었다.

LADH는 아연(II) 효소이지만, LADH의 코발트(II) 유사체에 대한 더 많은 분광 정보를 얻기 위해 LADH의 코발트(II) 모델 복합체를 준비하는 데 관심이 있습니다. 코발트(II) 복합체는 착색된 반면 아연(II) 복합체는 흰색이 아닙니다. 코발트 (II) 복합체가 착색되기 때문에, 코발트 (II) 복합체에서 리간드 필드의 강도에 대한 정보도 수집 할 수있는 복합체의 자외선 가시 스펙트럼을 얻을 수 있습니다. 가우시안 계산과 실험적으로 얻은 자외선 가시 스펙트럼의 정보를 사용하여 리간드 필드의 강도에 대한 정보를 추론할 수 있습니다. 코발트(II)는 아연(II)을 대체할 수 있는 좋은 데, 이는 두 이온 모두 이온 산도가 유사하고 루이스 산도가11,,12이기때문에.

제시된 방법은 LADH5,,6의자연적인 촉매 거동을 모방하려고 시도하는 모델 복합체를 합성하고 특성화하는 것을 포함한다. 우리는 이전에 ZnCl2와 리간드 전구체 의 가족을 금속화하여 LADH4에서아연 활성 부위의 구조와 반응성을 모델링한 LADH의 아연(II) 모델 복합체를 형성했습니다. 여러 실험을 통해, 이러한 핀처 리간드는 서로 다른 환경 조건하에서 견고하다는 것이 입증되었으며 부착된 R-그룹의 다양한 컬렉션으로 안정적으로 유지되었습니다. 5,,6

삼지창 리간드는 삼지연관현안의 강한 킬레이트 효과로 인해 금속화에 더 성공하는 것으로 밝혀졌기 때문에 모노덴테이트 리간드에 비해 바람직하다. 이러한 관찰은 모노덴테이트리간드(13)에비해 삼지창 집게 리간드 형성의 보다 선호되는 엔트로피에 기인한다. 더욱이, 삼각피압기 리간드(tridentatate pincer ligands)는 금속 복합체의 이각을 방지할 가능성이 높으며, 이는 이분화가복합체(14)의촉매 활성을 느리게 할 가능성이 있기 때문에 선호된다. 따라서, 삼지창 집게 리간드를 사용하여 촉매 활성 및 강력한 복합체의 제조에서 유기 금속 화학에서 성공한 것으로 입증되었습니다. SNS 핀서 복합체는 일반적으로 제2 및 제3 열 전이금속(15)을함유하고 있기 때문에 다른 핀체 시스템보다 덜 연구되었다.

금속 효소에 대한 이 연구는 생물학의 다른 영역에 적용 될 수있는 효소 활성의 이해를 더 도울 수 있습니다. 대안적인 방법(LADH의 전체 단백질을 합성)에 비해 모델 복합체를 합성하는 이 방법은 여러 가지 이유로 유리하다. 첫 번째 장점은 모델 복합체가 분자 량이 적고 천연 효소의 활성 부위의 촉매 활성 및 환경 조건을 정확하게 표현 할 수 있다는 것입니다. 둘째, 모델 컴플렉스는 안정적이고 공감할 수 있는 데이터로 작업하고 생성하기가 더 간단합니다.

이 원고는 LADH의 두 코발트(II) 집게 모델 복합체의 합성 제제 및 특성화를 설명합니다. 두 복합체 모두 유황, 질소 및 유황 공여자 원자를 포함하는 집게 리간드를 특징으로합니다. 제1복합체(4)는이미다졸 전구체를 기초로 하고, 제2(5)는 트리아졸 전구체를 기초한다.5 복합체는 수소 공공체가 있는 전자 가난한 알데히드의 공조량량량 감소에 대한 반응성을 보여준다. 이러한 반응성 결과는 후속 원고에 보고될 것이다.

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Protocol

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1. 클로로-(n3-S,S,N)-[2,6-비스(N-이소프로필-N'-메틸렌에미다졸-2-티오네)피리딘]코발트(II)테트라클로로코발테이트 [4]

  1. 복잡한 4를준비하려면 2,6-bis (N-isopropyl-N'-methyleneimidazole-2-thione)의 0.121 g (3.12 x 10-4 mol)을 추가하십시오.피리딘 (C19H25N5S2)100 mL 의 아세토니트릴 6 ~ 15 mL. 다음으로, 이 용액에 0.0851 g (3.58 x 10-4 mol)의 코발트 염화물 (II) 헥사 하이드레이트 (CoCl2·6H2O)를 추가하십시오. 반응 용액은 코발트(II) 염화물 헥사하이드레이트가 첨가된 직후 밝은 노란색에서 에메랄드 그린으로 변해야 합니다.
  2. 플라스크에 볶음 바를 추가합니다. 역류및 완전한 반응을 보장하기 위해 20 시간 동안 반응을 저어. 감소된 압력하에서 로토바를 사용하여 용매를 제거합니다.

2. 클로로-(n3-S,S,N)-[2,6-비스(N-이소프로필-N'-메틸렌에미다졸-2-티오네)피리딘]코발트(II)테트라클로로코발테이트[4]의 느린 증기 확산에 의한 재결정화

  1. 용질을 아세토니트릴(7.5mL)에 녹이고 용액을 걸레질한 다음 용액을 1개의 드람 바이알에 고르게 놓습니다. 1.5 mL의 아세토니트릴 용액으로 각 바이알을 채웁니다.
    1. 면소재를 추가하여 바이알을 덮어 증기 확산이 느려집니다. 면은 유리병 의 상단에 있는 개구부에 꼭 맞습니다.
    2. 바이알을 50 mL의 디에틸 에테르가 들어있는 240 mL 항아리에 놓습니다. 뚜껑을 닫고 항아리를 닫습니다.
    3. 결정이 1 주일 동안 성장할 수 있도록하십시오.
      참고: 재결정화는 1일 이상 걸릴 수 있습니다.

3. 클로로-(n3-S,S,N)-[2,6-비스(N-이소프로필-N'-메틸레네트리아졸-2-티오네)피리딘]코발트(II)테트라클로로코발트테이트 [5]

  1. 복잡한 5를준비하려면 2,6-비스 (N-isopropyl-N'-methylenetriazole-2-thione)의 0.183 g (4.70 x 10-4 mol)을 추가하십시오.피리딘 (C17H23N7S2)100 mL 의 아세토니트릴 6 ~ 15 mL. 이 용액에, 코발트 염화물 헥사 하이드레이트 (CoCl2·6H2O)의 0.223 g (9.37 x 10-4 mol)을 추가하십시오. 반응 용액은 코발트 (II) 염화물 헥사 하이드레이트가 첨가 된 직후 밝은 노란색에서 로얄 블루로 색상을 변경해야합니다.
    1. 플라스크에 볶음 바를 추가합니다. 역류및 완전한 반응을 보장하기 위해 20 시간 동안 반응을 저어. 감소된 압력하에서 로토바를 사용하여 용매를 제거합니다.

4. 클로로-(n3-S,S,N)-[2,6-비스(N-이소프로필-N'-메틸레네트리아졸-2-티오네)피리딘]코발트(II)테트라클로로코발트테이트[5]의 느린 증기 확산에 의한 재결정화

  1. 용질을 아세토니트릴(9.0 mL)에 녹이고 용액을 걸레질한 다음 용액을 1개의 드람 바이알에 고르게 놓습니다. 1.5 mL의 아세토니트릴 용액으로 각 바이알을 채웁니다.
    1. 면소재를 추가하여 바이알을 덮어 증기 확산이 느려집니다. 면은 유리병 의 상단에 있는 개구부에 꼭 맞습니다.
    2. 바이알을 50 mL의 디에틸 에테르가 들어있는 항아리에 놓습니다. 뚜껑으로 바이알을 닫습니다.
    3. 결정이 1 주일 동안 성장할 수 있도록하십시오.
      참고: 재결정화는 1일 이상 걸릴 수 있습니다.

5. 엑스레이 결정학

  1. 나일론 루프에 4의 크리스탈을 장착합니다. 리가쿠 옥스포드 회절 회절 회절 디로토미터에 대한 데이터를 수집합니다. 여기서, X선 회절 데이터는 173(2) K. 직접 방법을 사용하여 Olex216 및 ShelXT17 구조 용액 프로그램을 사용하여 결정 구조를 해결한다. 최소한의 정사각형 최소화를 사용하여 ShelXL18 미세 조정 패키지로 구조를 구체화합니다.
  2. 나일론 루프에 5의 크리스탈을 장착합니다. 리가쿠 옥스포드 회절 회절 회절 계측기에서 X선 회절 데이터를 수집합니다. 여기서, X선 회절 데이터는 173(2) K. 직접 방법을 사용하여 Olex216 및 ShelXT17 구조 용액 프로그램을 사용하여 결정 구조를 해결한다. 최소한의 정사각형 최소화를 사용하여 ShelXL18 미세 조정 패키지로 구조를 구체화합니다.

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Representative Results

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합성
복합체 45의 합성은 코발트(II) 염화물 헥사하이드레이트와 함께 비스티온 리간드 전구체를 함유하는 아세토니트릴 용액을 반응시킴으로써 성공적으로 수행되었다(도2). 이 반응은 공기가있는 환류 온도에서 발생했습니다. 일반적으로, 복합체 45는 아세토니트릴, 디메틸 설폭사이드, 디클로로메탄 및 메탄올에 용해되는 것으로 관찰되었다. 복합 4는 녹색이고 복잡한 5는 파란색이었습니다. 단지 4와 5의 백분율 수율은 양적이었습니다.

엑스레이 결정학
복합체 45의 단결정은 화합물을 아세토니트릴에 용해시킨 느린 증기 확산 방법을 통해 수득되었고, 디에틸 에테르 증기는 각 용액 내로 천천히 확산될 수 있었다. 이 재결정화 방법은 결정화하기 어려운 시료를 위해 단결정을 성장시키는 훌륭한 방법입니다. 표 1은 두 복합체에 대한 정제 데이터를 나타내고, 단결정 구조는 도 3도 4에도시되어 있다. 단결정 구조에 기초하여, 각 단위 세포는 2개의 코발트(II) SNS 집게 양이온과 1개의 [CoCl4]2-카운터 음이온을 함유한다. 양이온 및 항이온에서 코발트 이온의 산화 상태는Co2+입니다. 단지 4와 5의 결정 구조는 케임브리지 구조 데이터베이스 (증착 번호 1946448 및 1946449)에 퇴적되었습니다.

두 복합체 모두 코발트(II) 금속 중심에 대한 의사-사위 적층 기하학적 기하학적 특징을 표시하며, 1개의 질소와 2개의 황 공여자 원자가 금속 중심에 조정되어 있습니다. 또한 두 복합체 모두 사염화물 반대 항진을 특징으로 합니다. 복합단지 4와 5의 Co-N 및 Co-S 본드 길이는 거의 동일합니다. Co-N 본드 길이는 2.084(3) Å in 4 및 2.0763(16) Å in 5입니다. 4의 Co-S 채권 길이는 2.2927 (12) Å 및 2.3386 (11) Å입니다. 유사하게, 5의 Co-S 채권 길이는 2.3180(6) Å 및 2.3227(6) Å이다. 단지 45의경우, 결합 길이는 이전에 보고된19와유사합니다. Co-Cl 채권 길이는 2.2256(13) Å in 4 및 2.2116(6) Å in 5.

탄소 유황 결합 길이는 1.710(4) Å 및 1.714(4) Å 4 및 1.693(2) Å 및 1.698(2) Å 5에서 유사하며 C-S 단일 결합(1.83 Å) 및 C=S 이중 결합(1.61 Å)20에대해 전형적으로 관찰된다.

앞서 언급했듯이, 복합체 4와 5는 모두 사염화물 반대 항진을 함유하고 있다. 4에 대한 카운터 음이온 Co-Cl 채권 길이는 2.2709 (12) Å, 2.2709 (12) Å, 2.2949 (11) Å 및 2.2950 (11) Å입니다. 이들은 2.2737 (6) Å, 2.2737 (6) Å, 2.2956 (6) Å 및 2.2956 (6) Å인 복잡한 5의 것과 비슷합니다. 45의 Co-N 및 Co-S 결합 길이는 코발트(II) 용내 의 Co-N(histidine) 및 Co-S(시스테인) 결합 길이와 양호한 합의를 이루며 간 알코올 탈수소효소의 유사체를 대체한다. 이 효소에서, 코발트-N(히스티딘) 결합 길이는 2.04 Å이고, 코발트-S(시스테인) 결합 길이는 2.29 Å 및 2.33 Å.21입니다.

복잡한 4에서N-Co-S 본드 각도는 108.77(10)°와 114.03(10)°이며, 5복합에서는 112.58(5)°와 114.15(5)°입니다. N-Co-S 결합 각도는 서로 가깝고, 어떤 차이는 두 단지의 다양한 전자 장치 때문일 수 있습니다. 4와 5의 N-Co-Cl 본드 각도는 각각 107.91(10)°와 107.59(5)°입니다. S-Co-S 각도는 4에 대해 99.79(5)°, 5에서는102.78(3)°로 측정되었습니다. 마지막으로, 4의 S-Co-Cl 본드 각도는 117.98(5)°와 108.43(5)°이고 5의 경우 111.76(3)°와 107.93(3)°입니다.

타우-4 파라미터는 단지 45에대해서도 결정되었다. 복합 4의 타우-4 매개변수는 0.907이고, 복합 5의 타우-4 매개변수는 0.94522입니다. 두 타우-4 매개변수는 사각 평면 형상보다 코발트 중심에 대한 사위대하 형상과 더 일치합니다. 사중면 복합체의 타우-4 매개변수는 1과 같고 사각형 평면 복합체의 tau-4 매개변수는 0과 같습니다.

원소 분석
45의벌크 순도를 연구하기 위해, 재결정 된 복합체는 원소 분석을 받았다. 결과는 표 2에요약되어 있습니다. 여기에 있는 데이터는 탄소, 수소 및 질소의 계산된 백분율이 탄소, 수소 및 질소의 발견된 백분율과 우수한 일치하기 때문에 복합체 4와 5가 순수하다는 것을 시사합니다.

전기 분무 질량 분광법
단지 45의 제조는 또한 전기 분무 질량 분광법을 사용하여 확인되었다. 상기 전기분무 질량 스펙트럼은 직접 유동 주입을 사용하여 수집되었다. 사출 부피는 5 μL이었다. 데이터는 양수 및 음수 이온 모드에서 애질런트 QTOF 계측기에서 수집되었습니다. 최적화된 조건은 다음과 같습니다: 모세관 = 3000 kV, 콘 = 10V, 소스 온도 = 120°C. 복합 4의경우, 양이온 모드에서, 분자 이온은 m/z = 481.0631에서 관찰되었다. 음이온 모드에서, [CoCl3]-이온은 m/z 163.8433에서 관찰되었다. 복합 5의경우, 양이온 모드에서, 분자 이온은 m/z 483.0503에서 관찰되었다. 음이온 모드에서, [CoCl3]-이온은 m/z 163.8413에서 관찰되었다.

자외선 이시광선 분광법
복합체 45는 자외선 가시 분광법을 사용하여 분석하여 복합체의 전자 환경에 대한 추가 통찰력을 얻었습니다. 복합체 45는 아세토니트릴에 용해되어 별도의 용액을 형성했다. 복합체 4는 1.0 x10-4M 농도였고, 복합5는 농도가 9.2 x10-4M이었다. 컴플렉스 4는 680 nm(θ = 1300 M-1cm-1),632 nm(θ = 1100M-1cm-1)및 589 nm(θ = 1200M-1cm-1)에서가시 영역에서 3개의 피크를 나타내었다. 컴플렉스 5는 682 nm(θ = 1300 M-1cm-1),613 nm(θ = 850M-1cm-1),588 nm(θ = 790M-1cm-1)및 573 nm(θ = 820M-1cm-1)에서가시 영역에서 4개의 피크를 나타냈다.

Figure 1
도 1: 이전에 활용된 SNS 핀서 리간드 전구체. 비스-이미다졸과 비스 트리아졸 모이티를 기반으로 한 리간드 전구체. (A)R = iPr,(B)R = 네오펜틸,(C)R = N-부틸. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

Figure 2
그림 2: 복합체 의 합성 4 및 5. 합성 방식은 단지 4 및 5를 준비합니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

Figure 3
그림 3: 복잡한 4의 솔리드 스테이트 구조. 복잡한 4의 고체 단결정 구조. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

Figure 4
그림 4: 복잡한 5의 솔리드 스테이트 구조. 복잡한 5의 고체 단결정 구조. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

Figure 5
그림 5: 복잡한 울트라 바이올렛 가시 스펙트럼 4. 아세토니트릴의 복잡한 4 (1.0 x 10-4 M)의 자외선 가시 스펙트럼. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

Figure 6
그림 6: 복잡한 5의 울트라 바이올렛 가시 스펙트럼. 아세토니트릴의 복합5(9.15 x10-4M)의 자외선 가시 스펙트럼. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

4 5
α/° 90 90
β/° 97.2252(19) 90.770(2)
γ/° 90 90
볼륨/Å3 5462.6(2) 4852.0(2)
Z 4 4
θcalcg/cm3 1.516 1.6
μ/mm 1 11.526 1.56
F (000) 2556 2380
크리스탈 크기/mm3 0.24 × 0.22 × 0.06 0.28 × 0.08 × 0.06
방사선 CuKα(λ = 1.54184) MoKα(λ = 0.71073)
2데이터 수집을 위한 Θ 범위/° 7.39 ~ 142.76 6.596 ~ 65.254
인덱스 범위 -26 ≤ h ≤ 29, -8 ≤ k ≤ 8, -39 ≤ l ≤ 31 -27 ≤ h ≤ 28, -17 ≤ k ≤ 13, -33 ≤ l ≤ 32
수집된 반사 10233 21514
독립적인 반사 5235 [린트 = 0.0565, Rsigma = 0.0739] 8079 [린트 = 0.0262, Rsigma = 0.0315]
데이터/구속조건/매개변수 5235/0/312 8079/0/289
F2에 적합함 0.978 1.035
최종 R 인덱스 [I>=2σ (I)] R1 = 0.0529, wR2 = 0.1246 R1 = 0.0398, wR2 = 0.0845
최종 R 인덱스 [모든 데이터] R1 = 0.0758, wR2 = 0.1361 R1 = 0.0610, wR2 = 0.0964
가장 큰 diff. 피크 / 구멍 / e Å-3 0.99/-0.55 0.59/-0.46

표 1: 단지 4 및 5에 대한 세분화 데이터를 표로 정리합니다. 복합체 4 및 5에 대한 X 선 미세 조정 및 수집 데이터.

복잡 석회석 % C 발견 된 % C 석회석 % H 발견 된 % H 석회석 % N 찾은 % N
4, [C38H50Cl2Co2N10S 4][CoCl44]•2[CH3CN]4 40.46 40.26 4.53 4.39 13.48 13.17
5, [C34H46Cl2Co2N14S 4][CoCl44]•[CH3CN]4 35.75 36.20 4.08 4.20 17.37 17.40

표 2: 복합체 4 및 5에 대한 원소 분석 결과. 원소 분석은 복합체 4 및 5에 대한 탄소, 수소 및 질소 백분율에 대한 결과를 나타냅니다.

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Discussion

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단지 4와 5의 준비는 허구입니다. 핵심 단계는 각각의 리간드 전구체를 포함하는 아세토니트릴 용액에 고체 CoCl2·6H2O를 추가하는 것이다. 이 용액은 CoCl2·6H2O를 첨가한 후 몇 초 만에 진한 녹색으로 변하여 복잡한 4를형성한다. 이 용액은 CoCl2·6H2O를첨가한 후 밝은 파란색으로 변하여 복잡한 5를형성한다. 완전한 반응을 보장하기 위해 용액은 하룻밤 동안 역류에 놓입니다.

복합체 45의단결정 성장하려면 복합체 4 또는 5를 포함하는 아세토니트릴 용액을 농축해야합니다. 복합체는 가능한 한 농축된 복합체를 포함하는 용액을 생성하기 위해 최소한의 아세토니트릴로 용해되어야 한다. 45의 단결정은 복잡한 4 또는 5 ~ 1 드램 바이알을 포함하는 아세토니트릴 용액을 첨가하여 재배됩니다. 복잡한 4 또는 5의 용액을 포함하는 이 1개의 드램 바이알은 디에틸 에테르가 포함된 폐쇄된 항아리에 놓입니다. 디에틸 에테르가 아세토니트릴 용액으로 확산되는 속도를 늦추기 위해 각 1개의 드람 바이알에 면봉을 첨가합니다. 면봉은 확산 속도를 늦추기 위해 매우 꼭 세워져야 합니다. 디에틸 에테르의 확산을 늦추기 위해 면을 사용하면 다른 사람들이 거친 시료를 위한 단결정을 재배할 수 있습니다.

재결정화를 위한 아세토니트릴의 금속 복합체의 농도가 충분히 강하지 않으면 단결정이 형성되지 않을 것이다. 재결정 시도 후 생성물은 유성 잔류물일 수 있다. 연구원은 금속 복합체가 형성하기 위하여 단결정이 충분히 높은 농도가 있는지 확인해야 합니다.

우리의 지식의 베스트에, 다른 코발트 (II) 간 알코올 탈수소 효소의 대체 모델 복합체는 문헌에 게시 되었습니다. 향후 작업은 실험적으로 얻은 UV 가시 스펙트럼을 가우시안 계산에 의해 예측된 스펙트럼과 비교하여 핀서 리간드의 리간드 전계 강도를 결정하는 데 초점을 맞출 것입니다. Miecznikowski 실험실에서 현재 작업은 카운터 음이온으로 [CoCl4]2-를 포함하지 않는 간 알코올 탈수소 효소의 코발트 대체 모델 복합체를 준비하는 데 초점을 맞추고 있습니다. 이 단지는 현재 전자 가난한 알데히드와 케톤의 감소를 위해 검열되고 있습니다.

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Disclosures

저자는 공개 할 것이 없다.

Acknowledgments

존 Miecznikowski는이 프로젝트에 대한 다음과 같은 재정 지원을 받았다: 코네티컷 NASA 우주 보조금 얼라이언스 (수상 번호 P-1168), 페어 필드 대학 과학 연구소, 예술과 과학 출판 기금, 페어 필드 대학 학부 여름 연구 수급, 그리고 국립 과학 재단 - 주요 연구 계측 프로그램 (그랜트 번호 CHE-1827854) 자금을 획득하는 자금 400 MHz의 NMR 분광계. 그는 또한 테렌스 우 (예일 대학) 전기 스프레이 질량 스펙트럼을 획득하는 데 도움을 주셔서 감사합니다. Jerry Jasinski는 X 선 회절계를 구입하는 기금에 대한 국립 과학 재단 - 주요 연구 계측 프로그램 (그랜트 번호 CHE-1039027)을 인정합니다. 쉴라 보니타티부스, 에밀세 알만자, 라미 하르부흐, 사만다 지그몬트는 여름 연구 비를 제공하는 하디만 학자 프로그램을 인정한다.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
100 mL Round Bottomed Flask Chem Glass CG150691 100mL Single Neck Round Bottomed Flask, 19/22 Outer Joint
Acetonitrile Fisher HB9823-4 HPLC Grade
Chiller for roto-vap Lauda L000638 Alpha RA 8
Cobalt Chloride hexahydrate Acros Organics AC423571000 Acros Organics
Diethyl Ether Fisher E-138-1 Diethyl Ether Anhydorus
graduated cylinder Fisher S63456 25 mL graduated cylinder
hotplate Fisher 11-100-49SH Isotemp Basic Stirring Hotplate
jars Fisher 05-719-481 250 mL jars
Ligand ----- ----- Synthezied previously by Professor Miecznikowski
medium cotton balls Fisher 22-456-80 medium cotton balls
one dram vials Fisher 03-339 one dram vials with TFE Lined Cap
pipet Fisher 13-678-20B 5.75 inch pipets
pipet bulbs Fisher 03-448-21 Fisher Brand Latex Bulb for pipet
recrystallizing dish for sand bath Fisher 08-741 D 325 mL recrystallizing dish for sand bath
reflux condensor Chem Glass CG-1218-A-22 Condenser with 19/22 inner joint
Rotovap Heidolph Collegiate 36000090 Brinkmann; Heidolph Collegiate Rotary Evaporator with Heidolph WB eco bath Heidolph Rotary Evaporator
sea sand for sandbath Acros Organics 612355000 washed sea sand for sand bath
Stir bar Fisher 07-910-23 Egg-Shaped Magnetic Stir Bar
Vacum grease Fisher 14-635-5D Dow Corning High Vacuum Grease
vacuum pump for rotovap Heidolph Collegiate 36302830 Heidolph Rotovac Valve Control

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References

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SNS 코발트(II) 간알코올탈수소효소의 집게 모델 복합체 의 제조
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Miecznikowski, J. R., Jasinski, J. P., Kaur, M., Bonitatibus, S. C., Almanza, E. M., Kharbouch, R. M., Zygmont, S. E., Landy, K. R. Preparation of SNS Cobalt(II) Pincer Model Complexes of Liver Alcohol Dehydrogenase. J. Vis. Exp. (157), e60668, doi:10.3791/60668 (2020).More

Miecznikowski, J. R., Jasinski, J. P., Kaur, M., Bonitatibus, S. C., Almanza, E. M., Kharbouch, R. M., Zygmont, S. E., Landy, K. R. Preparation of SNS Cobalt(II) Pincer Model Complexes of Liver Alcohol Dehydrogenase. J. Vis. Exp. (157), e60668, doi:10.3791/60668 (2020).

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