विवो इमेजिंग में स्वास्थ्य और बीमारी में जीव विज्ञान के अध्ययन के लिए एक शक्तिशाली उपकरण है। यह प्रोटोकॉल एक मानक दो-फोटॉन माइक्रोस्कोप के साथ माउस रेटिना की ट्रांसप्युपिलरी इमेजिंग का वर्णन करता है। यह रेटिना के कई सेलुलर समूहों को फ्लोरोसेंटली लेबल करने के लिए विवोइमेजिंग विधियों में भी अलग-अलग प्रदर्शित करता है।
रेटिना पर्यावरण से प्रकाश संकेतों को विद्युत संकेतों में बदल देता है जो मस्तिष्क में प्रसारित होते हैं। रेटिना के रोग प्रचलित हैं और दृश्य हानि और अंधापन का कारण बनते हैं। यह समझना कि ऐसी बीमारियां कैसे प्रगति करती हैं, नए उपचार तैयार करने के लिए महत्वपूर्ण है। रोग के पशु मॉडल में विवो माइक्रोस्कोपी न्यूरोडीजेनेरेशन को समझने के लिए एक शक्तिशाली उपकरण है और अल्जाइमर रोग से स्ट्रोक तक की स्थितियों के उपचार की दिशा में महत्वपूर्ण प्रगति हुई है। यह देखते हुए कि रेटिना एकमात्र केंद्रीय तंत्रिका तंत्र संरचना है जो ऑप्टिकल दृष्टिकोण द्वारा स्वाभाविक रूप से सुलभ है, यह स्वाभाविक रूप से विवो इमेजिंग में खुद को उधार देता है। हालांकि, लेंस और कॉर्निया के देशी प्रकाशिकी प्रभावी इमेजिंग पहुंच के लिए कुछ चुनौतियां पेश करते हैं।
यह प्रोटोकॉल सेलुलर रिज़ॉल्यूशन पर माउस रेटिना में सेलुलर समूहों और संरचनाओं के विवो टू-फोटॉन इमेजिंग के लिए तरीकों की रूपरेखा तैयार करता है, जो तीव्र और पुरानी अवधि इमेजिंग प्रयोगों दोनों के लिए लागू होता है। यह एडेनो-संबद्ध वायरस (एएवी) वैक्टर, ट्रांसजेनिक चूहों और अकार्बनिक रंगों सहित लेबलिंग तकनीकों के एक सूट का उपयोग करके रेटिना गैंग्लियन सेल (आरजीसी), एमोक्राइन सेल, माइक्रोग्लियल और संवहनी इमेजिंग के उदाहरण प्रस्तुत करता है। महत्वपूर्ण रूप से, ये तकनीकें रेटिना के सभी सेल प्रकारों तक फैली हुई हैं, और रुचि की अन्य सेलुलर आबादी तक पहुंचने के लिए सुझाए गए तरीकों का वर्णन किया गया है। प्रदर्शन और परिमाणीकरण के लिए मैन्युअल छवि पोस्टप्रोसेसिंग के लिए उदाहरण रणनीतियाँ भी विस्तृत हैं। ये तकनीकें स्वास्थ्य और बीमारी में रेटिना फ़ंक्शन के अध्ययन के लिए सीधे लागू होती हैं।
केंद्रीय तंत्रिका तंत्र के विवो विज़ुअलाइज़ेशन में आम तौर पर खोपड़ी को पतला करने और ग्लास खिड़कियों या ऑप्टिकल रिले लेंस की स्थापना जैसी आक्रामक प्रक्रियाओं की आवश्यकता होती है। रेटिना तंत्रिका तंत्र में एकमात्र संरचना है जिसे आक्रामक तैयारी की आवश्यकता के बिना सीधे देखा जा सकता है क्योंकि यह मूल रूप से पर्यावरण से प्रकाश प्राप्त करता है। रेटिना तक ऑप्टिकल पहुंच की आसानी इसे केंद्रीय तंत्रिका तंत्र का अध्ययन करने के लिए एक आकर्षक मॉडल प्रणाली बनाती है।
चूहों में रेटिना के लाइव फ्लोरोसेंट इमेजिंग का उपयोग ग्लूकोमा 1,2, ऑप्टिकतंत्रिका चोट 1,3,4 और स्ट्रोक5 के मॉडल में आरजीसी मृत्यु को ट्रैक करने के लिए किया गया है, साथ ही अपक्षयी स्थितियों में माइक्रोग्लियल सक्रियण 6,7,8 और वाहिका9 में परिवर्तन। आंतरिक संकेतों का उपयोग फोटोरिसेप्टर10,11,12 और रेटिना वर्णक उपकला कोशिकाओं 13 की कल्पना करनेके लिए भी किया जा सकता है। रेटिना के विवो इमेजिंग में कई दृष्टिकोण या तो विशेष रूप से नेत्र विज्ञान उद्देश्यों के लिए डिज़ाइन किए गए अत्यधिक विशिष्ट उपकरणों का उपयोग करते हैं6 या अत्यधिक संशोधित ऑप्टिकल सिस्टम कॉर्निया और लेंस 8,9,11,12,13,14 के मूल विचलन को ठीक करने के लिए।
वर्तमान प्रोटोकॉल सेलुलर रिज़ॉल्यूशन पर रेटिना में फ्लोरोसेंट सिग्नल के विवो इमेजिंग में एक दृष्टिकोण प्रदर्शित करता है, माउस आंख के पूर्ववर्ती प्रकाशिकी के लिए आंशिक रूप से सही करने की एक बुनियादी विधि का उपयोग करता है। इस रणनीति के लिए मल्टीफोटॉन माइक्रोस्कोप सेटअप के लिए बहुत मामूली अनुकूलन की आवश्यकता होती है जो आमतौर पर मस्तिष्क के विवो इमेजिंग में उपयोग किए जाते हैं। चूंकि यह दृष्टिकोण स्थापित करने के लिए सीधा है, और चूहे थोड़े तनाव में हैं, इसलिए तीव्र और पुरानी अवधि दोनों पर समय-चूक प्रयोग करने के लिए अनुकूल है। इसके अतिरिक्त, आनुवंशिक और कार्बनिक डाई-आधारित प्रक्रियाएं जो आरजीसी, एमोक्रिन कोशिकाओं, माइक्रोग्लिया और वास्कुलचर सहित व्यक्तिगत रेटिना घटकों को लेबल करती हैं, इस इमेजिंग तकनीक के साथ संगत हैं और रेटिना फ़ंक्शन के लिए महत्वपूर्ण सेल प्रकारों और संरचनाओं के विवो अवलोकन में सक्षम हैं। इन उपकरणों को रेटिना के अधिकांश अन्य न्यूरोनल सेल प्रकारों के साथ-साथ ग्लियल और संवहनी घटकों को लेबल करने के लिए अनुकूलित किया जा सकता है।
यहां वर्णित दो-फोटॉन इमेजिंग प्रक्रिया माउस रेटिना के विवो इमेजिंग में अनुदैर्ध्य को सक्षम बनाती है। रेटिना के एक ही क्षेत्र की दोहराने योग्य छवियों को आइसोफ्लुरेन के तहत 6 या अधिक घंटे तक की निरंतर अवधि के लिए प्राप्त किया जा सकता है। माउस को एक ही इमेजिंग क्षेत्र (चित्रा 3) का पता लगाने के लिए सेलुलर और संवहनी स्थलों का उपयोग करके अलग-अलग दिनों में भी चित्रित किया जा सकता है। इस उद्देश्य के लिए कवर ग्लास के साथ संयुक्त एक स्पष्ट जेल विसर्जन का उपयोग पहले प्रक्रियाओं की एक श्रृंखला पर लागू किया गया है, जिसमें सबरेटिनल इंजेक्शन के लिए रेटिना का विज़ुअलाइज़ेशन, लेजर-प्रेरित रेटिना चोट मॉडल और फंडस इमेजिंग 20,21,22 शामिल हैं।
आंख की शारीरिक रचना विवो इमेजिंग में अद्वितीय चुनौतियां प्रस्तुत करती है, क्योंकि माउस कॉर्निया और लेंस की उच्च ऑप्टिकल शक्ति सुधार के बिना पुतली के माध्यम से प्रत्यक्ष इमेजिंग को बाधित करती है। विवो इमेजिंग विधियों में कई अन्य माउस आंख 7,17,18,19 के पूर्ववर्ती प्रकाशिकी के सुधार के लिए एक प्लानो-अवतल संपर्क लेंस के उपयोग पर भरोसा करते हैं। कॉर्निया में केवल ऑप्टिकल सुधार के साथ, माउस लेंस की उच्च ऑप्टिकल शक्ति के परिणामस्वरूप पैरालेक्स की एक अनिवार्य मात्रा होती है, विशेष रूप से परिधीय स्कैन क्षेत्र में संरचनाओं की, जो विभिन्न जेड-प्लेन पर एक्स-वाई आयाम में स्ट्रेचिंग और ट्रांसलेशनल मूवमेंट के रूप में प्रकट होती है। एक्स और वाई आयामों में छवि पैरालेक्स से संबंधित विकृति को कम करने के लिए, यह महत्वपूर्ण है कि माउस आंख इस तरह उन्मुख हो कि इमेजिंग क्षेत्र में रेटिना के लिए स्पर्शरेखा विमान माइक्रोस्कोप प्रकाश पथ के लंबवत हो। यहां वर्णित सेटअप इस संरेखण को प्राप्त करने के लिए आंख के कोण के सटीक हेरफेर के लिए अनुकूल है। एक समायोज्य माउस हेड होल्डर जो दो अक्षों के साथ रोटेशन की अनुमति देता है, आंख के कोण के आसान मैनुअल समायोजन की अनुमति देता है क्योंकि प्रयोगकर्ता पैरालेक्स को कम करने के लिए जेड-आयाम के माध्यम से स्क्रॉल करता है। यह झुकाव रेटिना के अधिक क्षेत्रों की इमेजिंग की अनुमति देने के लिए पुतली के फील्ड स्टॉप प्रभाव को भी दरकिनार करता है। हेड होल्डर का संयम श्वसन के कारण होने वाली गति कलाकृतियों को भी बहुत कम कर देता है।
माउस आंख की स्पष्टता बनाए रखने के लिए देखभाल की जानी चाहिए, क्योंकि निरंतर इमेजिंग के दौरान ओपसिफिकेशन के साथ छवि की गुणवत्ता बिगड़ जाएगी। इमेजिंग के दौरान स्नेहक जेल का लगातार पुन: उपयोग, और प्रत्येक इमेजिंग सत्र के बाद मलहम आवेदन आंख को सूखने और ओपेसिटी विकसित करने से रोकने में मदद करता है। कुछ कॉर्नियल ओपेसिटी 24-48 घंटे के बाद अनायास हल हो जाएंगे। इस प्रोटोकॉल में वर्णित स्पष्ट जेल और कवर ग्लास का उपयोग संपर्क लेंस7 के समान छवि गुणवत्ता और विपथन सुधार प्रदान करता है, जबकि कवर ग्लास को फिर से संरेखित करने की आवश्यकता के बिना आंख के कोण के आसान समायोजन की अनुमति देता है। इसके अतिरिक्त, जेल आंखों को लगातार हाइड्रेशन प्रदान करता है, जिससे कई घंटों तक तीव्र इमेजिंग सत्र करना संभव हो जाता है। अंत में, चूंकि कवर ग्लास कॉर्निया से संपर्क नहीं करता है, इसलिए यह आंखों में न्यूनतम जलन का कारण बनता है जो दोहराए जाने वाले इमेजिंग सत्रों के लिए ऑप्टिकल स्पष्टता को कम कर सकता है।
इस दृष्टिकोण की एक सीमा यह तथ्य है कि ऑप्टिकल विपथन पूरी तरह से ठीक नहीं हैं। जबकि यह भारी पैरलेक्स के कारण अक्षीय संकल्प को गंभीर रूप से कम करता है, सोमा के मात्रात्मक माप एकल-छवि विमानों में प्राप्त किए जा सकते हैं। यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि चूंकि रेटिना न्यूरॉन्स की प्रतिदीप्ति संकेत तीव्रता इस विधि के साथ नमूना संरेखण पर निर्भर है, उत्तेजना और उत्सर्जन अनुपातमेट्रिक आधारित सेंसर विभिन्न इमेजिंग सत्रों में नमूनों की तुलना करने वाले प्रयोगों के लिए अधिक उपयुक्त हैं। सिस्टम स्तर पर ऑप्टिकल विपथन को सही करने के लिए एक दृष्टिकोण अनुकूली प्रकाशिकी है, जो रेटिना 8,9,14,21 में उपकोशिकीय संकल्प की अनुमति देता है। हालांकि, अनुकूली प्रकाशिकी को लागू करने के लिए अत्यधिक विशिष्ट उपकरण और व्यापक विशेषज्ञता की आवश्यकता होती है।
विवो रेटिना इमेजिंग में दो-फोटॉन के लिए वैकल्पिक दृष्टिकोण कॉन्फोकल माइक्रोस्कोपी या नेत्र विज्ञान6 हैं। यहां प्रस्तुत दृष्टिकोण को वाइडफील्ड या कॉन्फोकल माइक्रोस्कोपी के लिए आसानी से ट्रांसलेटेबल होना चाहिए। एकल फोटॉन इमेजिंग शायद अधिक मजबूत है और आंख के कॉर्निया और लेंस के माध्यम से कुशल दो-फोटॉन प्रभाव प्राप्त करने के लिए आवश्यक दो-फोटॉन लेजर की उच्च ऊर्जा के कारण रेटिना को नुकसान पहुंचाने का कम जोखिम पैदा करता है। दो-फोटॉन लेजर क्षति से बचने के लिए, अधिकतम लेजर शक्ति के लिए सीमा को इमेजिंग प्रयोगों के पूरा होने के बाद होलमाउंट रेटिना की जांच करके अनुभवजन्य रूप से निर्धारित किया जाना चाहिए और छवि की गई परतों में सेल प्रकारों के लिए इम्यूनोस्टेनिंग किया जाना चाहिए। यहां प्रस्तुत प्रणाली में, आरजीसी को पैन-आरजीसी मार्कर, आरबीपीएमएस के साथ लेबल किया गया था, और घनत्व 45 मेगावाट इमेजिंग शक्ति तक सामान्य थे, जबकि 55 मेगावाट ने आरजीसी का महत्वपूर्ण नुकसान किया (नहीं दिखाया गया)।
एकल-फोटॉन इमेजिंग का एक दोष यह तथ्य है कि यह दृष्टिकोण दो-फोटॉन इमेजिंग23 की तुलना में रेटिना के मूल दृश्य सर्किट को बहुत भारी उत्तेजित करेगा। रेटिना होलमाउंट या आईकप तैयारी का उपयोग करके पिछले प्रयोगों से पता चला है कि दो-फोटॉन लेजर स्कैनिंग सर्किट सक्रियण को प्राप्त करती है जो काफी हद तक क्षणिकहै। यहां, सीए2 + सेंसर ट्विच 2 बी के साथ आरजीसी गतिविधि की इमेजिंग से पता चलता है कि लेजर स्कैनिंग की शुरुआत सीए2 + ऊंचाई को प्रेरित करती है, जो अधिकांश आरजीसी में 5-20 एस के दौरान बेसलाइन पर वापस आ जाती है (चित्रा 8)। यह देखते हुए कि इस प्रोटोकॉल में लेजर शक्ति विवो रेटिना लाइट रिस्पांस8 में रिपोर्टिंग पिछले प्रयोगों की सीमा में है, वर्तमान में वर्णित विधि रेटिना में सर्किट गतिविधि की रिकॉर्डिंग के लिए उत्तरदायी है। इस तरह के विचार उन प्रयोगों के लिए महत्वपूर्ण हैं जो सर्किट गतिविधि से प्रभावित हो सकते हैं।
यह प्रोटोकॉल दो प्रकार के रेटिना न्यूरॉन्स, आरजीसी और एमोक्राइन कोशिकाओं के विवो इमेजिंग में प्रदर्शित करता है। अन्य प्रमुख सेल प्रकारों के समान लेबलिंग हासिल की जा सकती है, जिसमें क्षैतिज कोशिकाएं (सीएक्स 57-सीआरई25), द्विध्रुवी कोशिकाएं (Chx10-Cre26; mGluR6-GFP27), शंकु फोटोरिसेप्टर (S- या M-opsin-Cre28), रॉड फोटोरिसेप्टर (Nrl-Cre29), मुलर ग्लिया (Foxg1-Cre26), और पेरिसाइट (NG2-DSRed9) शामिल हैं। ट्रांसजेनिक चूहे आरजीसी के असतत उपसमुच्चय को लेबल करने के लिए भी उपलब्ध हैं (उदाहरण के लिए, केसीएनजी 4-सीआरई के लिएआर.जी.जी.सी.30; IPRGCs31 के लिए OPN4-Cre; जे-आरजीसी32 के लिए जैम-बी-सीआरईआर) और एमोक्रिन कोशिकाएं (उदाहरण के लिए, स्टारबर्स्ट एमाक्रिन कोशिकाओं के लिए सीएचएटी-सीआरई26 और विभिन्न एमोक्राइन सेल उपप्रकारों के लिए न्यूरोपैप्टाइड प्रमोटर ड्राइवर 3,34)। ट्रांसजेनिक चूहों के बदले विशिष्ट सेल आबादी को लक्षित करने के लिए वायरल वैक्टर का उपयोग किया जा सकता है। एक सर्वव्यापी सीएजी प्रमोटर तत्व के साथ एएवी 2 के इंट्राविट्रल इंजेक्शन लगभग विशेष रूप से आरजीसी, एमोक्रिन कोशिकाओं और क्षैतिज कोशिकाओंको लेबल करते हैं। संशोधित AAV2.7m8-Y444F कैप्सिड को एक इंजीनियर mGluR6 प्रमोटर निर्माण के साथ जोड़ने से द्विध्रुवी कोशिकाओं35 के व्यापक लेबलिंग की अनुमति मिलती है। एएवी के सबरेटिनल इंजेक्शन से फोटोरिसेप्टर का संवर्धन होता है, जिसमें सीरोटाइप एएवी 2/5 में उच्चतम पारगमन दक्षता36 होती है। एसएचएच 10, एक संशोधित एएवी 6 कैप्सिड प्रोटीन, ग्लियल फाइब्रिलरी अम्लीय प्रोटीन प्रमोटर तत्वों के साथ जोड़ा गया है, जिसे मुलर ग्लिया37 के लिए विशिष्ट प्रदर्शित किया गया है।
पूरी तरह से गैर-इनवेसिव दृष्टिकोण के साथ केंद्रीय तंत्रिका तंत्र में कोशिकाओं का निरीक्षण करने की क्षमता का उपयोग तंत्रिका सर्किट8 के बुनियादी गुणों के साथ-साथ न्यूरोडीजेनेरेशन 3,4,5,6,38 के तंत्र दोनों का अध्ययन करने के लिए किया जा सकता है। कई अंधा रोग रेटिना में सेलुलर आबादी को लक्षित करते हैं, और चूहों में विवो इमेजिंग दृष्टिकोण का उपयोग ऑप्टिक तंत्रिका चोट 1,3,4, मैकुलर अपघटन13, स्ट्रोक5, ग्लूकोमा 2,6 और यूवाइटिस 7 का अध्ययन करने के लिए किया गया है। इसके अलावा, कई केंद्रीय तंत्रिका तंत्र न्यूरोडीजेनेरेटिव स्थितियां रेटिना में प्रकट होती हैं जिनमें अल्जाइमर रोग39, मल्टीपल स्केलेरोसिस40 और पार्किंसंस रोग41 शामिल हैं। इसलिए, रेटिना के विवो इमेजिंग के लिए इस आसानी से सुलभ तकनीक को न्यूरोडीजेनेरेटिव स्थितियों के एक व्यापक सेट का अध्ययन करने के लिए एक उपकरण के रूप में लागू किया जा सकता है।
The authors have nothing to disclose.
इस काम को रिसर्च टू प्रिवेंट ब्लाइंडनेस फाउंडेशन (पीआरडब्ल्यू को कैरियर डेवलपमेंट अवार्ड और सेंट लुइस में वाशिंगटन यूनिवर्सिटी स्कूल ऑफ मेडिसिन में ओप्थाल्मोलॉजी और विजुअल साइंसेज विभाग को एक अप्रतिबंधित अनुदान), नेशनल ग्लूकोमा रिसर्च (ब्राइटफोकस फाउंडेशन का एक कार्यक्रम), और मैकडॉनेल सेंटर फॉर सेलुलर एंड मॉलिक्यूलर न्यूरोबायोलॉजी से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था। जेडडब्ल्यू एक संस्थागत राष्ट्रीय अनुसंधान सेवा पुरस्कार टी 32 ईवाई013360 द्वारा समर्थित है। इस काम को वाशिंगटन यूनिवर्सिटी स्कूल ऑफ मेडिसिन में होप सेंटर वायरल वैक्टर कोर द्वारा भी समर्थित किया गया था।
#1.5 coverslip | ThermoFisher | 152440 | Richard-Allan #1.5 24 mm x 40 mm |
50 mL glass syringe | Hamilton | 80950 | 22G cemented needle |
Adeno-associated virus (AAV2) | Hope Center Viral Core | NA | |
Anesthesia Air Pump | RWD Life Science | R510-30 | |
Atropine | Sigma | A0132 | For pupil dilator solution |
Basic Small Animal Anesthesia Device | RWD Life Science | R500IE | |
Borosilicate glass capillary | Sutter | B150-86-10 | Outside diameter 1.50 mm, inside diameter 0.86 mm, length 10 cm |
CFP/YFP filter cube | Chroma | custom | 480/40, 505 long pass, 535/30 |
ChromoFlex – Two channel PMT detection unit | Scientifica | S-MPLG-1002 | |
Circulating heating pump | Braintree Scientific | tp-700 | Set to 37 °C |
Cling film | VWR | 10713-916 | |
Compact Filter Holder | ThorLabs | DH1 | Holds coverslip over mouse eye |
Cx3cr1-GFP transgenic mice (B6.129P2(Cg)-Cx3cr1tm1Litt/J) | The Jackson Laboratory | 005582 | |
DAQ controller chassis | National Instruments | PXIe-1073 | |
Data acquisition device | National Instruments | BNC-2090A | |
Evans Blue dye | Fisher Scientific | AAA1677409 | |
FPGA module with digitizer | National Instruments | NI-5734 | |
Gas Evacuation Apparatus | RWD Life Science | R546W | |
GenTeal Severe lubricant eye gel | Alcon | (from local pharmacy) | For use during imaging |
GFP/Red filter cube | Chroma | custom | 535/30, 560 long pass, 605/70 |
Heating pad | McKesson Medical and Surgical | 190147 | |
HyperScope Launch Optics for use with Pockels Cell | Scientifica | S-MP-101080 | |
HyperScope Main module | Scientifica | S-MP-100466 | |
HyperScope Scan Path | Scientifica | S-MP-100406 | |
HyperScope X galvo Module | Scientifica | MP-100443 | |
ImageJ Fiji software | Freeware | ||
Isoflurane | Patterson Veterinary | NDC 14043-704-06 | |
Isoflurane gas filter cannister (active scavenging) | RWD Life Science | R510-31 | |
Isoflurane gas filter cannister (passive scavenging) | RWD Life Science | R510-31S | |
ketamine HCl (100 mg/mL) | Vedco | NDC 50989-161-06 | |
M32 to M26 adapter | ThorLabs | M32M26S | |
MaiTai GUI software | Spectra-Physics | NA | |
MATLAB software | MathWorks | NA | R2015b |
meloxicam (5 mg/mL) | Boehringer Ingelheim | NDC 0010-6013-01 | Analgesic |
Micorscope Objective | Edmund Optics | 46-404 | Mitutoyo WE715042319 |
micropipette puller | Sutter | Flaming/Brown Model P-97 | |
Mineral oil | Fisher | BP2629-1 | |
Mini bulldog hemostatic clamp | Fine Science Tools | 18053-28 | |
Miniature EVA Tubing 0.02" ID, 0.06" OD | McMaster Carr | 1883T1 | |
Miniature EVA Tubing 0.05" ID, 0.09" OD | McMaster Carr | 1883T4 | |
Mouse head holder | Narishige | SGM-4 | |
No. 5 Forceps | Fine Science Tools | 11251-10 | |
Optic Posts 1/2" | ThorLabs | TR3-P5 | |
Optical power meter kit | ThorLabs | PM100D | |
pE-300 Ultra LLG Deivery | Scientifica | COO-LED3ULLGs | |
Phenylephrine hydrochloride | Sigma | P6126 | For pupil dilator solution |
Pockels cell | Conoptics | 350-80-02 | |
Pockels cell amplifier | Conoptics | Model 302RM | |
Proparacaine hydrochloride | Sigma | 1571001 | For eye immobilization |
Red & Far Red short pass filter Cube | Chroma | custom | 560 short pass |
Rotating 1/2" post clamp | ThorLabs | SWC | |
ScanImage package | Vidrio Technologies | Freeware | Image acquisition software; Version 5.4.0 (2018); requires MATLAB |
sodium chloride solution, sterile (0.9%) | Fresenius Kabi | NDC 63323-186-01 | |
Stereomicroscope | Leica | S9 E | |
Tabletop centrifuge | Oxford | Benchmate C8 | |
Terramycin oxytetracycline/polymyxin B antibiotic ophthalmic ointment | Zoetisus | NA | For use after intravitreal injection |
ThermoRack cooling system | Solid State Cooling Systems | ThermoRack 401 | Set to 20 °C |
Ultrafast Ti:Sapphire laser | Spectra-Physics | Mai Tai DeepSee | |
Vgat-Cre transgenic mice (Slc32a1tm2(cre)Lowl/J) | The Jackson Laboratory | 016962 | |
VGlut2-Cre transgenic mice (Slc17a6tm2(cre)Lowl/J) | The Jackson Laboratory | 016963 | |
VivoScope for In Vivo Imaging | Scientifica | S-MPVS-1200-00P | |
White petrolatum-mineral oil lubricant eye ointment | Stye | NA | For use after imaging |
xylazine HCl (20 mg/mL) | Akorn | NDC 59399-110-20 |