Le titrage de coronavirus humains en utilisant un dosage immunoperoxydase

Summary

Dans cette vidéo, nous démontrons une méthode alternative de détection et de titrage de virus en utilisant une technique de détection d'antigènes enzymatique connu sous le nom d'un dosage immuno. Ici, nous allons vous montrer comment collecter vos échantillons viraux, préparer les cellules pour les tests, et enfin le dosage immuno utilisant des dilutions en série pour déterminer le titre viral.

Abstract

Calcul des titres viraux infectieux représente une approche fondamentale et essentielle expérimental pour virologues. Dosages de plaque classique ne peut pas être utilisé pour des virus qui ne provoquent pas des effets cytopathiques, qui est le cas pour les souches 229E et OC43 de coronavirus humains (HCoV). Un test immuno alternative indirecte (IPA) est décrite ici pour la détection et le titrage de ces virus. Cellules sensibles sont inoculés avec des dilutions de série logarithmique des échantillons dans une plaque de 96 puits. Après une croissance virale, la détection virale par l'IPA obtient le titre de virus infectieux, exprimé par la «dose infectieuse de culture tissulaire» (DICT50). Cela représente la dilution d'un échantillon contenant le virus au cours de laquelle la moitié d'une série de puits de laboratoire contiennent réplication virale. Cette technique est une méthode fiable pour le titrage du HCoV dans des échantillons biologiques (cellules, tissus ou les liquides).

Protocol

Le protocole texte complet de cette approche expérimentale est disponible en protocoles Springer .