Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

טיטרציה של נגיפי קורונה האדם שימוש Assay אימונו

doi: 10.3791/751 Published: April 28, 2008

ERRATUM NOTICE

Summary

בסרטון הזה, אנחנו מראים שיטה חלופית לזיהוי titering של וירוסים באמצעות זיהוי אנטיגן האנזימטית טכניקה המכונה assay אימונו. כאן, אנו יראה לכם כיצד לאסוף דגימות ויראליות שלך, להכין את התאים לבדיקה, ולבסוף assay באמצעות אימונו דילולים סדרתי כדי לקבוע את titer ויראלי.

Abstract

חישוב titers ויראלית מדבקת מייצג גישה ניסויית בסיסי וחיוני וירולוגים. מבחני פלאק קלאסית אינו יכול לשמש לאיתור וירוסים שלא לגרום לתופעות cytopathic משמעותי, אשר במקרה של זנים 229E ו OC43 של קורונה האנושי (HCoV). Assay חלופה אימונו עקיף (IPA) מתואר במסמך לאיתור טיטרציה של וירוסים אלה. תאים רגישים הם מחוסן עם דילולים לוגריתמי הסידורי של דגימות צלחת 96-היטב. לאחר צמיחה ויראלי, זיהוי נגיפי ידי IPA התשואות titer וירוס מדבק, כפי שבאה לידי ביטוי "מנה רקמות תרבות זיהומיות" (TCID50). זה מייצג את הדילול של מדגם המכיל וירוסים בו חצי שורה של בארות מעבדה להכיל וירוס שכפול. טכניקה זו שיטה אמינה עבור טיטרציה של HCoV דגימות ביולוגיות (תאים, רקמות או נוזלי).

Protocol

פרוטוקול טקסט מלא לגישה זו ניסיוני זמין הפרוטוקולים שפרינגר .

Erratum

Formal Correction: Erratum: Titration of Human Coronaviruses Using an Immunoperoxidase Assay
Posted by JoVE Editors on 04/01/2012. Citeable Link.

A correction was made to: Titration of Human Coronaviruses Using an Immunoperoxidase Assay. A revised abstract was republished due to a publisher error.

Revised Abstract:

Determination of infectious viral titers is a basic and essential experimental approach for virologists. Classical plaque assays cannot be used for viruses that do not cause significant cytopathic effects, which is the case for prototype strains 229E and OC43 of human coronavirus (HCoV). Therefore, an alternative indirect immunoperoxidase assay (IPA) was developed for the detection and titration of these viruses and is described herein. Susceptible cells are inoculated with serial logarithmic dilutions of virus-containing samples in a 96-well plate format. After viral growth, viral detection by IPA yields the infectious virus titer, expressed as 'Tissue Culture Infectious Dose 50 percent' (TCID50). This represents the dilution of a virus-containing sample at which half of a series of laboratory wells contain infectious replicating virus. This technique provides a reliable method for the titration of HCoV-229E and HCoV-OC43 in biological samples such as cells, tissues and fluids. This article is based on work first reported in Methods in Molecular Biology (2008) volume 454, pages 93-102.

Original Abstract:

Calculation of infectious viral titers represents a basic and essential experimental approach for virologists. Classical plaque assays cannot be used for viruses that do not cause significant cytopathic effects, which is the case for strains 229E and OC43 of human coronavirus (HCoV). An alternative indirect immunoperoxidase assay (IPA) is herein described for the detection and titration of these viruses. Susceptible cells are inoculated with serial logarithmic dilutions of samples in a 96-well plate. After viral growth, viral detection by IPA yields the infectious virus titer, expressed as "Tissue Culture Infectious Dose" (TCID50). This represents the dilution of a virus-containing sample at which half of a series of laboratory wells contain replicating virus. This technique is a reliable method for the titration of HCoV in biological samples (cells, tissues or fluids).

טיטרציה של נגיפי קורונה האדם שימוש Assay אימונו
Play Video
PDF DOI

Cite this Article

Lambert, F., Jacomy, H., Marceau, G., J. Talbot, P. Titration of Human Coronaviruses Using an Immunoperoxidase Assay. J. Vis. Exp. (14), e751, doi:10.3791/751 (2008).More

Lambert, F., Jacomy, H., Marceau, G., J. Talbot, P. Titration of Human Coronaviruses Using an Immunoperoxidase Assay. J. Vis. Exp. (14), e751, doi:10.3791/751 (2008).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter