Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

साक्षात्कार: एचआईवी-1 Proviral डीएनए एक विकसित Recombinase का उपयोग छांटना

doi: 10.3791/793 Published: June 16, 2008

Summary

वर्तमान एचआईवी 1-रणनीतियों वायरल जीवन चक्र को दबाने लेकिन संक्रमण प्रभावी ढंग से नहीं उन्मूलन के लिए काम करते हैं. यहाँ, हम दिखाना है कि एक इंजीनियर recombinase कुशलतापूर्वक उत्पाद एकीकृत कर सकते हैं संक्रमित कोशिकाओं के जीनोम से एचआईवी -1 proviral डीएनए.

Abstract

एचआईवी -1 संक्रमित कोशिकाओं के गुणसूत्र मेजबान में एकीकृत है और एक लंबे टर्मिनल को दोहराता द्वारा flanked provirus के रूप में बनी रहती है. वर्तमान उपचार रणनीति मुख्य रूप से संक्रमण के उन्मूलन के बिना वायरस एंजाइमों या वायरस सेल संलयन, दबा वायरल जीवन चक्र का लक्ष्य. चूंकि एकीकृत provirus इन दृष्टिकोण, एचआईवी -1 के नए प्रतिरोधी उपभेदों द्वारा लक्षित नहीं है उभर सकता है. यहाँ, हम रिपोर्ट है कि इंजीनियर recombinase Tre (Tre recombinase, Buchholz, एफ, मैक्स प्लैंक इंस्टीट्यूट सेल बायोलॉजी और आनुवंशिकी के लिए, ड्रेस्डन के आण्विक विकास देखें) कुशलता से संक्रमित कोशिकाओं के जीनोम से एकीकृत एचआईवी -1 proviral डीएनए excises. हम वायरल pseudotypes और संक्रमित HELA कोशिकाओं से युक्त करने के लिए जांच loxLTR उत्पादन Tre recombinase एचआईवी -1 संक्रमित मानव कोशिकाओं के जीनोम से provirus आबकारी कर सकते हैं कि क्या. एक वायरस सेल कण रिहा लाइन क्लोन किया गया था और एक प्लाज्मिड व्यक्त Tre के साथ या एक माता पिता का नियंत्रण सदिश के साथ ट्रांसफ़ेक्ट. Recombinase गतिविधि और वायरस उत्पादन की निगरानी की गई. सभी assays दिखाई साइटोटोक्सिक प्रभाव के बिना संक्रमित कोशिकाओं से provirus के कुशल विलोपन प्रदर्शन किया. इन परिणामों के सिद्धांत का सबूत के रूप में सेवा है कि यह संभव है के लिए एक recombinase विकसित करने के लिए विशेष रूप से एक एचआईवी 1 लीटर के लक्ष्य और इस recombinase एचआईवी -1 संक्रमित मानव कोशिकाओं के जीनोम से एचआईवी -1 provirus excising के लिए सक्षम है कि.

इससे पहले एक इंजीनियर recombinase चिकित्सकीय क्षेत्र में प्रवेश कर सकता है, तथापि, महत्वपूर्ण बाधाओं को दूर करने की आवश्यकता है. सबसे महत्वपूर्ण मुद्दों के अलावा, कि हम चेहरा, लक्षित कोशिकाओं को एक कुशल और सुरक्षित प्रसव और दुष्प्रभावों के अभाव हैं.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

कृपया देखने के संबंधित वीडियो हकदार साइट विशिष्ट पुनर्संयोजन और इंजीनियरिंग recombinase एंजाइमों की साइट विशिष्टता के बारे में अधिक जानकारी के लिए साइट - विशिष्ट Recombinase प्रौद्योगिकी (SSR ) और Tre Recombinase के आण्विक विकास के सिद्धांतों .

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

साक्षात्कार: एचआईवी-1 Proviral डीएनए एक विकसित Recombinase का उपयोग छांटना
Play Video
PDF DOI

Cite this Article

Hauber, J. Interview: HIV-1 Proviral DNA Excision Using an Evolved Recombinase. J. Vis. Exp. (16), e793, doi:10.3791/793 (2008).More

Hauber, J. Interview: HIV-1 Proviral DNA Excision Using an Evolved Recombinase. J. Vis. Exp. (16), e793, doi:10.3791/793 (2008).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter