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Biology

Intervista: HIV-1 DNA provirale escissione Utilizzando un ricombinasi Evolved

doi: 10.3791/793 Published: June 16, 2008

Summary

Corrente di HIV-1 strategie agire per sopprimere il ciclo di vita virale, ma non in modo efficace sradicare l'infezione. In questo studio dimostriamo che una ricombinasi progettato può DNA in modo efficiente accise integrati di HIV-1 provirale dal genoma delle cellule infette.

Abstract

HIV-1 integra nel cromosoma ospite delle cellule infettate e persiste come un provirus fiancheggiata da ripetizioni terminali lunghi. Strategie di trattamento corrente principalmente bersaglio enzimi virus o fusione cellulare, sopprimendo il ciclo di vita virale senza sradicare l'infezione. Poiché il provirus integrato non viene bersagliata da questi approcci, nuovi ceppi resistenti di HIV-1 possono emergere. Qui, si segnala che il progettato ricombinasi Tre (vedi evoluzione molecolare della ricombinasi Tre, Buchholz, F., Max Planck per la Biologia Cellulare e Genetica, Dresda) accise in modo efficiente DNA integrato da HIV-1 provirale dal genoma delle cellule infette. Abbiamo prodotto loxLTR contenente pseudotypes virale e le cellule HeLa infettate esaminare se può ricombinasi Tre soggetti ad accisa il provirus dal genoma del virus HIV-1 le cellule umane infettate. Una particella di rilascio della linea cellulare virus è stato clonato e transfettate con un plasmide che esprime Tre o con un vettore di controllo parentale. Ricombinasi attività e la produzione del virus sono stati monitorati. Tutti i test hanno dimostrato la cancellazione efficiente del provirus dalle cellule infette senza visibili effetti citotossici. Questi risultati servono come prova di principio che si può evolvere una ricombinasi per indirizzare specificamente un HIV-1 LTR e che questo ricombinasi è in grado di estirpare il virus HIV-1 provirus dal genoma delle cellule umane da HIV-1-infetti.

Prima di una ricombinasi progettato poteva entrare nel campo terapeutico, tuttavia, significativi ostacoli devono essere superati. Tra le questioni più critiche, che abbiamo di fronte, sono una consegna efficiente e sicuro per le cellule bersaglio e l'assenza di effetti collaterali.

Protocol

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Si prega di vedere i video correlati intitolato Principi di Site-Specific ricombinasi (SSR) Tecnologia ed evoluzione molecolare della ricombinasi Tre per ulteriori informazioni sul sito-specifica ricombinazione e di ingegneria il sito-specificità di enzimi ricombinasi.

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Intervista: HIV-1 DNA provirale escissione Utilizzando un ricombinasi Evolved
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Hauber, J. Interview: HIV-1 Proviral DNA Excision Using an Evolved Recombinase. J. Vis. Exp. (16), e793, doi:10.3791/793 (2008).More

Hauber, J. Interview: HIV-1 Proviral DNA Excision Using an Evolved Recombinase. J. Vis. Exp. (16), e793, doi:10.3791/793 (2008).

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