Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

Interview: HIV-1 proviraal DNA Excisie Met behulp van een Evolved recombinase

doi: 10.3791/793 Published: June 16, 2008

Summary

De huidige HIV-1-strategieën handelen om de virale levenscyclus te onderdrukken, maar niet werkelijk uit te roeien infectie. Hier tonen we aan dat een aangelegde recombinase efficiënt kunnen accijnzen geïntegreerd HIV-1 proviraal DNA van het genoom van de geïnfecteerde cellen.

Abstract

HIV-1 integreert in het gastheer-chromosoom van geïnfecteerde cellen en blijft als een provirus geflankeerd door lange terminal repeats. De huidige behandeling van strategieën in de eerste plaats richten virus enzymen of virus-cel fusie, het onderdrukken van de virale levenscyclus zonder uitroeien van de infectie. Omdat de geïntegreerde provirus is niet het doelwit van deze benaderingen, nieuwe resistente stammen van HIV-1 kunnen voordoen. Hier melden wij dat de gemanipuleerde recombinase Tre (zie Moleculaire evolutie van de Tre recombinase, Buchholz, F., Max Planck Instituut voor Celbiologie en Genetica, Dresden) efficiënt geïntegreerd HIV-1 proviraal DNA accijnzen uit het genoom van de geïnfecteerde cellen. Produceerden we loxLTR die virale pseudotypes en geïnfecteerde cellen HeLa om te onderzoeken of Tre recombinase kan accijnzen de provirus van het genoom van HIV-1 geïnfecteerde menselijke cellen. Een virusdeeltje-releasing cellijn werd gekloond en getransfecteerd met een plasmide dat Tre of met een ouderlijk toezicht vector. Recombinase activiteit en virus productie werden gevolgd. Alle testen aangetoond dat de efficiënte verwijdering van de provirus uit de geïnfecteerde cellen zonder zichtbare cytotoxische effecten. Deze resultaten dienen als bewijs van het principe dat het mogelijk is om een ​​recombinase evolueren naar specifiek zijn gericht op een HIV-1-LTR en dat dit recombinase in staat is om weg te snijden van de HIV-1 provirus van het genoom van HIV-1-geïnfecteerde menselijke cellen.

Voordat een aangelegde recombinase kan de therapeutische arena betreden, maar belangrijke obstakels moeten worden overwonnen. Een van de meest kritieke problemen, waarvoor we staan, zijn een efficiënte en veilige levering gerichte cellen en de afwezigheid van bijwerkingen.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Kijk dan op gerelateerde video's recht Principes van site-specifieke recombinase (SSR) Technologie en Molecular Evolution van de Tre recombinase voor meer informatie over locatie-specifieke recombinatie en engineering van de site-specificiteit van recombinase enzymen.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Interview: HIV-1 proviraal DNA Excisie Met behulp van een Evolved recombinase
Play Video
PDF DOI

Cite this Article

Hauber, J. Interview: HIV-1 Proviral DNA Excision Using an Evolved Recombinase. J. Vis. Exp. (16), e793, doi:10.3791/793 (2008).More

Hauber, J. Interview: HIV-1 Proviral DNA Excision Using an Evolved Recombinase. J. Vis. Exp. (16), e793, doi:10.3791/793 (2008).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter