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Biology

Interview: le VIH-1 Excision ADN proviral utilisant une recombinase Evolved

doi: 10.3791/793 Published: June 16, 2008

Summary

Courant VIH-1 stratégies agir pour supprimer le cycle de vie du virus mais ne éradiquer efficacement l'infection. Ici, nous démontrons que l'ingénierie peut ADN recombinase efficacement accise intégré le VIH-1 proviral dans le génome des cellules infectées.

Abstract

VIH-1 s'intègre dans le chromosome hôte des cellules infectées et persiste comme un provirus flanqué de longues répétitions terminales. Stratégies de traitement actuelles ciblent principalement les enzymes ou le virus de fusion cellulaire, supprimant le cycle de vie viral sans éradiquer l'infection. Depuis le provirus intégré n'est pas ciblée par ces approches, de nouvelles souches résistantes de VIH-1 peuvent émerger. Ici, nous déclarons que la recombinase Tre conçu (voir l'évolution moléculaire de la recombinase Tre, Buchholz, F., Institut Max Planck pour la biologie cellulaire et génétique, Dresde) excise efficacement l'ADN intégré le VIH-1 proviral dans le génome des cellules infectées. Nous avons produit contenant loxLTR pseudotypes viraux et des cellules HeLa infectées d'examiner si Tre recombinase peut accise du provirus dans le génome du VIH-1 cellules humaines infectées. Une lignée cellulaire du virus de particules de libération a été cloné et transfectées avec un plasmide exprimant Tre ou avec un vecteur de contrôle parental. L'activité recombinase et la production de virus ont été surveillés. Tous les tests ont démontré la suppression efficace des provirus partir de cellules infectées, sans effets cytotoxiques visibles. Ces résultats servent de preuve de principe qu'il est possible de faire évoluer une recombinase de cibler spécifiquement une LTR du VIH-1 et que cette recombinase est capable d'exciser les provirus VIH-1 à partir du génome du VIH-1-cellules humaines infectées.

Avant une recombinase modifiés pourraient entrer dans le domaine thérapeutique, cependant, d'importants obstacles doivent être surmontés. Parmi les problèmes les plus critiques, que nous devons faire face, sont une prestation efficace et sûr pour les cellules ciblées et l'absence d'effets secondaires.

Protocol

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S'il vous plaît voir les vidéos liées intitulé Principes de la recombinase site-spécifique (SSR) Technologie et Evolution Moléculaire de la recombinase Tre pour plus d'informations sur recombinaison spécifique de site et de l'ingénierie de la spécificité du site d'enzymes recombinase.

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Hauber, J. Interview: HIV-1 Proviral DNA Excision Using an Evolved Recombinase. J. Vis. Exp. (16), e793, doi:10.3791/793 (2008).More

Hauber, J. Interview: HIV-1 Proviral DNA Excision Using an Evolved Recombinase. J. Vis. Exp. (16), e793, doi:10.3791/793 (2008).

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