Gömülü hücreler ve yüzey içeren modüller olarak adlandırılan silindirik kollajen jeller, mikro-dokuların oluşturulması endotel hücreleri ile kaplanmıştır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Kollajen, Modüller kullanarak Micro-dokuların Fabrikasyon İçeren Hücreleri Jel
Bu makalede
Özet
Özet
Bu protokol, modüller olarak adlandırılan mikro-dokuların bir tür fabrikasyon açıklamaktadır. Modülü yaklaşım, üniforma, ölçeklenebilir ve vaskülarize doku üretir. Modülleri kollajen yanı sıra diğer gelable veya çapraz bağlanabilir malzemeler yapılabilir. Onlar imalat üzerine çapı yaklaşık 2 mm uzunluğunda ve 0.7 mm ama gömülü hücreleri veya modülleri endotel hücreleri ile kaplıdır boyutu küçültmek. Modüllerin ayrı ayrı gömülü hücreler oksijen ve diğer besinleri difüzyon sınırı içinde ama modülleri perfusable olan büyük dokular oluşturmak için birlikte paketlenmiş olabilir bu kadar küçük. Bu dokular, farklı hücre türleri, karmaşık dokuları oluşturmak için birlikte paketlenmiştir önce gömülü veya modülleri kaplı olabilir çünkü inşaat modüler. Modülleri yapmak için üç temel adım vardır: (1) kollajen nötralize ve bu hücreleri gömerek, tüp içinde (2) jelleşme kolajen ve endotel hücreleri ile modülleri ve (3) kaplama modülleri kesme.
Protokol
1) Boru hazırlanması
- Polietilen borular 2 ila 3 m uzunluğunda (0,76 mm ID x 1.22 mm OD) kesin.
- Hortumun bir ucunu 20 G1 İğneyi.
- Dönüştürücüler kendini kapatmalı (7 1 / 2 "x 13") Bobin boru ve yer. Hortumun iki ucu çanta kaplanmadan sonunda yerleştirilir ve yerde gaz sterilizasyon bandı ile bantlanmış olmalıdır.
- Mühür çanta ve gaz sterilize edin.
2) Nötralizasyon Kollajen
Not: 1 ml kollajen, yaklaşık 2 metre polietilen boru doldurur.
- 15 ml konik bir tüp içine boru istenilen uzunlukta için gerekli kollajen gerekli miktarda koyun ve buz üzerinde tutmak.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Biz farklı hücre tipleri 1-11 gömülü modüllerini kullanarak birçok farklı mikro-dokulara fabrikasyon var. Biz başarıyla birincil kardiyomiyositlerde, adacıklar, yağ kök hücreler ve mezenkimal stromal hücrelerinin yanı sıra HepG2, NIH 3T3 ve klon 9 karaciğer hücreleri de dahil olmak üzere çok sayıda hücre hatları gömülü. Biz, sıçan aort endotel hücreleri, insan umbilikal ven endotel hücreleri ve insan mikrovasküler endotel hücreleri de dahil olmak üzere endotel hücreleri çeşitli modülleri kaplı. Modüller aynı .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Çıkar çatışması ilan etti.
Teşekkürler
Finansman Ulusal Sağlık Enstitüsü (EB 001.013), Fen Bilimleri ve Kanada'nın Mühendislik Araştırma Konseyi ve Kanada Sağlık Araştırma Enstitüleri tarafından sağlanmıştır. Biz onun uzmanlık için Dr. AP McGuigan'ın teşekkür ve modüllerin geliştirilmesi yardımcı.....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Intramedic PE60 hortum | BD Biosciences | 427416 | Modüllerin çapını değiştirmek için farklı hortum çapları kullanılabilir |
| Fosfat tamponlu salin (PBS) | GIBCO, by Life Technologies | 20012-027 | |
| Trypsin-EDTA | GIBCO, by Life Technologies | 25200-072 | |
| Purcol asitlendirilmiş kolajen, 3 mg/mL | Cedarlane Labs | 5005-B | |
| Sodyum bikarbonat | Sigma-Aldrich | S5761 | |
| 20G iğne | BD Biosciences | 305175 | İğne çapının hortum çapına benzer olması gerekir |
| 3 mL şırınga | BD Biosciences | 309585 | |
| 15 mL tüp | BD Biosciences | 352096 | |
| 50 mL tüp | BD Biosciences | 352070 | |
| Convertors Kendi Kendine Kapanan Poşet 7 1/2” x 13” | Cardinal Health | 92713 | |
| 10 ml Geniş Uçlu serolojik pipet | BD Biosciences | 357504 | |
| 10 ml serolojik pipet | BD Biosciences | 357551 | |
| 5 ml serolojik pipet | BD Biosciences | 357543 |
Kaynaklar
- Chamberlain, M. D., Gupta, R., Sefton, M. V. Chimeric vessel tissue engineering driven by endothelialized modules. , (2010).
- Corstorphine, L. E., Sefton, M. V. Effectiveness factor and diffusion limitations in collagen gel modules containing HepG2 cells. J Tissue Eng Regen Me....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
