Method Article

Kollajen, Modüller kullanarak Micro-dokuların Fabrikasyon İçeren Hücreleri Jel

DOI:

10.3791/2177

⸱

December 13th, 2010

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Institute of Biomaterials and Biomedical Engineering / Department of Chemical Engineering and Applied Chemistry, University of Toronto, 2Institute of Biomaterials and Biomedical Engineering, University of Toronto

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Gömülü hücreler ve yüzey içeren modüller olarak adlandırılan silindirik kollajen jeller, mikro-dokuların oluşturulması endotel hücreleri ile kaplanmıştır.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokol, modüller olarak adlandırılan mikro-dokuların bir tür fabrikasyon açıklamaktadır. Modülü yaklaşım, üniforma, ölçeklenebilir ve vaskülarize doku üretir. Modülleri kollajen yanı sıra diğer gelable veya çapraz bağlanabilir malzemeler yapılabilir. Onlar imalat üzerine çapı yaklaşık 2 mm uzunluğunda ve 0.7 mm ama gömülü hücreleri veya modülleri endotel hücreleri ile kaplıdır boyutu küçültmek. Modüllerin ayrı ayrı gömülü hücreler oksijen ve diğer besinleri difüzyon sınırı içinde ama modülleri perfusable olan büyük dokular oluşturmak için birlikte paketlenmiş olabilir bu kadar küçük. Bu dokular, farklı hücre türleri, karmaşık dokuları oluşturmak için birlikte paketlenmiştir önce gömülü veya modülleri kaplı olabilir çünkü inşaat modüler. Modülleri yapmak için üç temel adım vardır: (1) kollajen nötralize ve bu hücreleri gömerek, tüp içinde (2) jelleşme kolajen ve endotel hücreleri ile modülleri ve (3) kaplama modülleri kesme.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1) Boru hazırlanması

  1. Polietilen borular 2 ila 3 m uzunluğunda (0,76 mm ID x 1.22 mm OD) kesin.
  2. Hortumun bir ucunu 20 G1 İğneyi.
  3. Dönüştürücüler kendini kapatmalı (7 1 / 2 "x 13") Bobin boru ve yer. Hortumun iki ucu çanta kaplanmadan sonunda yerleştirilir ve yerde gaz sterilizasyon bandı ile bantlanmış olmalıdır.
  4. Mühür çanta ve gaz sterilize edin.

2) Nötralizasyon Kollajen

Not: 1 ml kollajen, yaklaşık 2 metre polietilen boru doldurur.

  1. 15 ml konik bir tüp içine boru istenilen uzunlukta için gerekli kollajen gerekli miktarda koyun ve buz üzerinde tutmak.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Biz farklı hücre tipleri 1-11 gömülü modüllerini kullanarak birçok farklı mikro-dokulara fabrikasyon var. Biz başarıyla birincil kardiyomiyositlerde, adacıklar, yağ kök hücreler ve mezenkimal stromal hücrelerinin yanı sıra HepG2, NIH 3T3 ve klon 9 karaciğer hücreleri de dahil olmak üzere çok sayıda hücre hatları gömülü. Biz, sıçan aort endotel hücreleri, insan umbilikal ven endotel hücreleri ve insan mikrovasküler endotel hücreleri de dahil olmak üzere endotel hücreleri çeşitli modülleri kaplı. Modüller aynı .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Çıkar çatışması ilan etti.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Finansman Ulusal Sağlık Enstitüsü (EB 001.013), Fen Bilimleri ve Kanada'nın Mühendislik Araştırma Konseyi ve Kanada Sağlık Araştırma Enstitüleri tarafından sağlanmıştır. Biz onun uzmanlık için Dr. AP McGuigan'ın teşekkür ve modüllerin geliştirilmesi yardımcı.....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
İntramedik boru PE60BD Biosciences427416Modüllerin çapını değiştirmek için farklı çaplarda boru
Fosfat tamponlu salin (PBS)GIBCO, Life Technologiestarafından 20012-027
Tripsin-EDTAGIBCO, Life Technologiestarafından 25200-072
Purcol asitlendirilmiş kollajen, 3 mg / mLCedarlane Labs5005-B
Sodyum bikarbonatSigma-AldrichS5761
20G iğneBD Biosciences305175İğnenin çapının borunun çapına benzer olması gerekir
3 mL şırıngaBD Biosciences309585
15 mL tüpBD Biosciences352096
50 mL tüpBD Biosciences352070
Dönüştürücüler Kendinden Mühürlü Kılıf 7 1/2” x 13”Cardinal Health92713
10 ml Geniş Uçlu serolojik pipetBD Biosciences357504
10 ml serolojik pipetBD Biosciences357551
5 ml serolojik pipetBD Biosciences357543
kullanılabilir

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Chamberlain, M. D., Gupta, R., Sefton, M. V. Chimeric vessel tissue engineering driven by endothelialized modules. , (2010).
  2. Corstorphine, L. E., Sefton, M. V. Effectiveness factor and diffusion limitations in collagen gel modules containing HepG2 cells. J Tissue Eng Regen Me....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Collagen Gel ModulesMicro tissue FabricationEndothelial Cell CoatingPolyethylene Tubing CuttingCollagen NeutralizationTissue Engineering ModulesVascularized MicrotissuesModular Tissue ConstructionCell Embedding ProtocolMicrofluidic Chamber Assays

Related Articles