Name: Bireysel Presinaptik Terminalleri Dopamin Yayın FFNs ile görüntülendi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-08-31T11:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 37 s
Description: Öğrenin, FFN 511 ile fare beyin kesilerinde dopamin salınımını görselleştirmek için çok fotonlu lazer tarama mikroskobu kullanarak presinaptik terminallerdeki nörotransmisyon dinamiklerini nasıl inceleyebilirsiniz.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

D. Şemeş G. Harold &amp; Leila Y. Vakfı ve Columbia Üniversitesi Fen ve Mühendislik Girişimleri Mathers teşekkürler. D. Şemeş ve D. Sulzer Nörobilim Ödülü McKnight Teknolojik Yenilikler McKnight Vakfı teşekkür D. Sulzer NIDA, NIMH ve Picower ve Parkinson Hastalığı Vakıflar teşekkürler. H. Zhang sayesinde NARSAD. RH Edwards, Michael J. Fox Vakfı, Ulusal Parkinson Vakfı, NIDA ve NIMH teşekkürler. 6-OHDA enjeksiyonları ve tavsiyeleri, yararlı tartışma, görüntüleme analiz programlama için Merek Siu Mark Sonders ve Jan Schmoranzer Robert Burke TIRF mikroskopi kurulum, teknik destek için teşekkür ederiz.

Bu yöntem bildirilen araştırma <a href="http://www.sciencemag.org/cgi/content/full/324/5933/1441">Gubernator ve ark, Bilim 324 (5933). 1441-1444 (2009)</a> . 1. Akut striatal dilim hazırlanması <ol><li> Akut striatal dilim hazırlamadan önce, bir oksijen yapay beyin omurilik sıvısı (ASCF) ve önce beyin çıkarımı için en az 15 dakika boyunca buz ile soğuk olmalıdır. ACSF buz tutun ve diseksiyon sırasında oksijenli. ACSF (mM): NaCl 125, 2.5 KCl, NaHCO 3 26, CaCl 2 2.4 MgSO4 1.3, KH 2 PO 4 0.3, glukoz 10, Hepes 5; pH 7,3-7,4 290-295 mOsm. </li><li> Anestezi olmadan erkek fare başını kesmek. </li><li> Fare tüm beyin ayıklayın ve Krazy ® Yapıştırıcı kullanarak vibratome yerleştirilen vibratome tepsi üzerine monte. Beyin çıkarma ve montajı, 2 dakika içinde yapılmalıdır. Bu süre zarfında, ACSF buz tutmak ve doku sağlıklı tutmak için oksijenli emin olun. </li><li> Bregma 1,54 arasında 0,62 1 250μm kalınlığında koronal striatal beyin dilimleri kesin. Üç bütün dilimleri daha sonra bir iğne ile 6 yarım dilimler halinde kesilmiş olabilir elde edilecektir. </li><li> Prob yüklemeden önce en az 1 saat oda sıcaklığında oksijenli ACSF beyin dilimleri inkübe edin. Dilimler iyi FFN511 yükleme ekranı ve 4 saat sonra görüntüleme dilim hazırlanması için aktif kalır. </li></ol> 2. FFN511 Yükleniyor <ol><li> FFN511 yükleme solüsyonu (içinde 10μM FFN511 ACSF) hazırlayın; ACSF içinde ADVASEP-7 100μM hazırlamak. Tüm çözümler taze olarak hazırlanır ve en az 15 dakikalık dilimler halinde yüklemeden önce oksijenli olmalıdır. </li><li> Bireysel dilim FFN511 yükleme çözümü ile oda sıcaklığında 30 dakika inkübe edin. </li><li> Sonra oksijenli 100μM ADVASEP-7 ACSF yüklenen dilim az 30 dakika oda sıcaklığında 2 kuluçka ekstraselüler dokuya bağlı boya çıkarın. Dilimler görüntüleme için hazırız. </li></ol> 3. Görüntüleme FFN511 beyin dilimleri Dilimleri görüntüleme FFN511 multiphoton lazer tarama mikroskobu kullanılarak yapılır. Biz Prairie Ultima multiphoton lazer tarama mikroskop kullanılarak (Biz daha önce bir Zeiss LSM 510 NLO multiphoton lazer tarama mikroskobu kullanılarak ve Zeiss mikroskop ile bazı sonuçlar elde edilmiştir). <ol><li> Kayıt odasında FFN511 yüklü dilim (RC-27L, Warner) yerleştirin ve bir akış hızı dakikada 1-2 ml az oksijenli ACSF superfuse. Sonra deney sırasında hareketini en aza indirmek için, dilimin üstüne naylon dizeleri ile platin arp yerleştirin. Hareketi daha da en aza indirmek için, dilim odasında en az 10 dakika önce görüntüleme stabilize olması için izin verir. </li><li> Görselleştirin ve 10x suya daldırma hedefi altında parlak bir alan lüminesans dorsal striatum bulmak. </li><li> Yeri ve konumu bu bölgede bipolar bükülmüş tungsten elektrot stimülasyon deneyi gerçekleştirmek durumunda. Iki uyarıcı bipolar elektrot uçları arasındaki 300 mikron ideal görüntüleme alanının içinde yer almaktadır. Görme alanının merkezinde bu bölgeye yerleştirin. </li><li> Resim FFN511 bir 63x (0.9 NA) su altında kalacak ultraviyole amacı altında striatal terminalleri etiketli. FFN511 Spektral Fizik ve striatal terminalleri optimal floresan Mai Tai lazer 760 nm dalga boyunda bir bant geçiren filtre (480-520 nm) ile görülür heyecanlı. Görüntüler, 12-bit formatında 512 x 512 piksel çözünürlük faiz 75 x 75 mikron bölgeleri ile yakalanır. Uyarılmış destaining deneyler için, z-düzleminde 1 mikron ayrılmış z-eksen kayması, 5-7 görüntüleri z serisi, telafi etmek için her dönem için elde edilir. </li></ol> 4. FFN511 Destaining FFN511 etiket KCl (70 mM KCl) yüksek konsantrasyon (+) amfetamin sülfat (AMPH, 20 mcM), ya da elektrik stimülasyonu ya destained olabilir. Yüksek potasyum ACSF çözüm beyin dilim uygulanır KCl destaining deney, 2 dakika içinde FFN511 etiket destains. Tutanak xyz-t görüntüleri zaman içinde destaining FFN511 izlemek için. Aşağıdaki elektrik stimülasyonu-bağımlı dopamin terminali destaining açıklar: <ol><li> Zamanla FFN511 destaining izlemek için, xyz-t görüntüleri kaydedildi. Dilim (z-ekseninde az 4 mm) en az hareket sağlamak için ve hiçbir z yığının lazer, kontrol zaman serisi görüntüleri photobleaching stimülasyon öncesinde en az 5 dakika süreyle alınmalıdır. Aksi takdirde, lazer gücü ayarlayın. </li><li> 1 frekansları, 4 ya da 20 Hz uyarılmaya başlanması ise bu kontrol görüntülerinin ardından, xyz-t görüntüleme devam etmektedir. 1, 4 veya 20 Hz (300 μs x 1 mA) Uyaranlar bipolar elektrotlar kullanarak Master-8 darbe jeneratörü (Ampi, Kudüs, İsrail) tarafından tetiklenen bir Iso-Flex uyaran izolatör yerel striatum uygulanır. En aza indirmek içinserbest sitelerin depolarizasyon varyasyonu, siklik voltametri tarafından belirlenen maksimal stimülasyon yoğunluğu% 150 uygulama stimülasyon protokolü kullanılır. </li><li> Görüntü analiz için uygun yazılımı kullanın. Bizim laboratuvarda, biz IDL Görüntü J (Wayne Rosband, Ulusal Sağlık Enstitüleri, Rockville, MD) ve özel yazılmış yazılımlar (Araştırma Sistemleri, Boulder, CO) Süresi3 puncta floresan ve değişiklikleri ölçmek için kullanın. </li></ol> Represenative Sonuçlar Şekil 1 striatal dilim içine FFN511 yükleme işlemi tamamlandıktan gösterir. 10x ve 60x objektif kullanarak Temsilcisi görüntüleri Şekil 1&#39;de gösterilmiştir. Dopamin terminalleri seçici etiketleme 20 mcM amfetamin destained olabilir. Yüksek KCl FFN511 etiketleme destaining Şekil 2 göstermektedir. Şekil yerel elektrik stimülasyonu ile etiketleme FFN511 destaining 3 gösterir. <img src="/files/ftp_upload/1562/1562fig1.jpg" alt="Şekil 1" /> Şekil 1 canlı kortikal-striatal akut dilim FFN511 etiketler dopamin terminalleri (A) akut kortikal-striatal canlı dilim FFN511 Etiketleme:. Striatum bol etiketleme (STR), korteks seyreldiğinde etiketleme (CTX) ve herhangi bir etiket korpus kallozum (CC). Ölçek çubuğu: 100 mm (B) Destaining amfetamin tarafından striatum FFN511 Sol paneller: amfetamin önce sağ panelleri: 20 mcM amfetamin 20 dakika sonra. Ölçek çubuğu: 10 mm. <img src="/files/ftp_upload/1562/1562fig2.jpg" alt="Şekil 2" /> Şekil 2 yüksek KCl FFN511 etiketleme Destaining. FFN511 etiketleme ACSF 2 dk 70 mM KCl uygulama içinde destained. Ölçek çubuğu: 10μm. <img src="/files/ftp_upload/1562/1562fig3.jpg" alt="Şekil 3" /> Şekil 3 striatumda FFN511 etiketleme Frekans bağımlı destaining (A) 4 Hz Yerel uyarılması terminallerinden destaining sonuçlandı. Uyarım t = 0 &#39;da başladı. Ölçek çubuğu: 5 mikron (B) 4 Hz az FFN511 Destaining Ca 2 + ve frekans bağımlı. Kontroller hiçbir stimülasyonu (3 dilim 153 puncta) aldı. Kadmiyum klorür (200 mcM) ile Destaining unstimulated denetimleri (5 dilim 475 puncta) aynıydı. Olarak hesaplanan değerler her bir uyarımı frekans için destaining eğrileri tek bir üstel bozulma fonksiyonu ve yarılanma ömrü (t 1 / 2) uygun τ x 0.693 (1 Hz: 9 dilimleri, 4 Hz 765 puncta: 7 dilim 410 puncta 20 Hz: 6 dilim) 416 puncta. Striatal beyin dilim hazırlık ekzositoz sırasında FFN511 destaining 2-foton mikroskopi video mikrografı bakın.

<ol><li>Franklin, K. B. J., Paxinos, G. The mouse brain in stereotaxi coordinators. , Academic Press. San Diego. (1997).</li>
<li>Kay, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+synaptic+activity+in+intact+brain+and+slices+with+FM1-43+in+C.+elegans%2C+lamprey%2C+and+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Imaging synaptic activity in intact brain and slices with FM1-43 in C. elegans, lamprey, and rat.</a> Neuron. 24, 8098-8117 (1999).</li>
<li>Bamford, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterosynaptic+dopamine+neurotransmission+selects+sets+of+corticostriatal+terminals%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Heterosynaptic dopamine neurotransmission selects sets of corticostriatal terminals.</a> Neuron. 42, 653-653 (2004).</li>
</ol>

Yazarların beyan edecek herhangi bir çıkar çatışması yoktur.

Bu video, floresan dopamin analogları kullanarak optik nörotransmisyon görselleştirmek için bir yöntem ortaya koymaktadır. FFN511 FFNs ilk nesil biz geliştirdik. Bilim gösterildiği gibi sinaptik veziküller içine sitoplazma monoamin nörotransmitterler taşır ve özellikle korteks, striatum ve varsayılan katekolamin ve / veya serotonin terminal dopamin terminalleri etiketler nöronal veziküler monoamin taşıyıcı (VMAT2) (hedefleyerek tasarlanmış olmasına rağmen FFN511 nispeten hidrofobik olduğundan kağıt), uygun bir yükleme süresi özgüllük için kritik öneme sahiptir. Biz 40 dakika daha uzun kuluçka striatal dilimleri geniş nonspesifik boyanma neden olacaktır bulundu. Özgüllüğü ve sade bir dille, fonksiyonel sinaptik veziküller içinde FFN serbest bırakılması neden KCl yüksek bir konsantrasyon ile destaining tespit edilebilir. Az 15 dakika süreyle FFN511 dilim Pozlama terminallerde boya yetersiz yükleme nedeniyle zayıf floresan sinyal neden olur. Bu protokol, ekstrasellüler doku bağlı boya kaldırmak için 100μM ADVASEP-7. Bu adım gerekli değildir, ancak belirtilmezse, ACSF içinde arınma süresi uzamış olması gerekir. Özetle, seçtiğiniz hazırlanmasına bağlı olarak, en iyi etiketleme belirlemek için konsantrasyon ve yükleme süresini değiştirmek için ihtiyacınız olacak.

<table><tbody><tr><td>FFN511 (8-(2-Amino-ethyl)-2,3,5,6-tetrahydro-1H,4H-11-oxa-3a-aza-benzo[de]anthracen-10-one)</td><td>Columbia University - Dalibor Sames Lab</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ADVASEP-7 </td><td>CyDex</td><td>AR-OA7-005</td><td></td></tr><tr><td>RC-27L Kayıt odası</td><td>Warner Instruments</td><td>64-0375</td><td></td></tr><tr><td>PELCO PrepEze 6-Kuyucuklu Tutucu</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>36157-1</td><td>Kesit inkübasyonu için</td></tr><tr><td>Master-8 puls stimülatörü ve Iso- Flex stimulus izolatörü</td><td>AMPI</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

bireysel presinaptik terminalleri dopamin yayın ffns ile görüntülendi

Dopamine Release at Individual Presynaptic Terminals Visualized with FFNs

Sinir sistemi nöronlar arasındaki sinaptik vezikül füzyon sırasında nörotransmiter bülteni ile sinyalleri iletir. Nörotransmitter alımı ve doğrudan bireysel presinaptik terminallerden serbest gözlemlemek için, floresan yanlış nörotransmitterlerin sinaptik vezikül monoamin taşıyıcı yüzeylerde olarak tasarlanmıştır. Striatum görüntü dopamin serbest bırakmak için bu problar kullanarak, sinaptik plastisite ile ilgili çeşitli gözlemler yapmıştır. Biz uyaran ortalama serbest nörotransmitter sinaptik veziküllerin kesir uyaran frekansı bağımlı olduğu bulundu. Bu deneysel koşullar altında kinetik farklı bir &quot;rezerv&quot; sinaptik vezikül nüfus gözlenmemiştir. Presinaptik terminallerin bir frekans bağımlı heterojenite presinaptik seçim frekans bağımlı kodlama için bir mekanizma gösteren, D2 dopamin reseptörlerine parçası bağımlı ortaya çıktı. Hui Zhang ve Niko G. Gubernator bu iş için eşit olarak katkıda bulundu.

Yeni bir floresan dopamin analogları kullanarak optik nörotransmisyon ölçmek anlamına gelir.

Bireysel Presinaptik Terminalleri Dopamin Yayın FFNs ile görüntülendi

Sinir sistemi, sinaptik vezikül füzyonu sırasında nörotransmitter salınımı aracılığıyla nöronlar arasında sinyal iletimi gerçekleştirir. Nörotransmitter alımını ve ... gözlemlemek için

Floresan yalancı nörotransmitter. FFN 511, beyin kesitlerine uygulandığında sinaptik fiziksel monoamin taşıyıcısı için bir substrat görevi görebilen floresan monoamindir. FN 511, monoamin taşıyıcısı aracılığıyla dopaminerjik sinaptik veziküller tarafından alınır ve S stratumundaki gibi monoaminerik nöronların presinaptik terminallerinden gerçekleşen transmitter salınımını doğrudan görselleştirmek için kullanılabilir. Terminallerden gerçekleşen transmitter salınımı, kesitte noktasal floresan sinyallerindeki azalma olarak görülür.Bu videoda, FFN 511 ile boyanmış ve çok fotonlu lazer mikroskobu kullanılarak görüntülenmiş, 250 µm kalınlığında koronal sal dilimleri hazırlanmaktadır. iCal salınımının frekansa bağlı heterojenliğini ortaya çıkaran detaylandırma deneyleri gösterilmektedir. Merhaba, ben Columbia Üniversitesi Nöroloji Bölümü'ndeki David s Lab'dan HU.Merhaba, ben de Soldier Lab'den Minerva. Bugün size, beyin kesitlerindeki dopamin terminallerinin floresan yalancı nörotransmitterler ile işaretlenmesi prosedürünü göstereceğiz. Laboratuvarımızda dopamin salınımını incelemek için bu prosedürü kullanıyoruz.Hadi başlayalım. Akut sal dilimleri hazırlamadan önce, yapay beyin omurilik sıvısı (A CSF) oksijenlendirilmeli ve beyin çıkarılmadan önce en az 15 dakika boyunca buzla soğutulmalıdır; A CSF'nin buz gibi soğuk ve oksijenle zenginleştirilmiş olduğundan emin olun. Diseksiyon sırasında, farenin tüm beynini çıkarın ve hızlı yapıştırıcı kullanarak vibram tepsisine sabitleyip vibram üzerine yerleştirin. Beynin çıkarılması ve sabitlenmesi işlemi iki dakika içinde tamamlanmalıdır.Tepsiyi, +1,54 ile +0,623 arasında 250 µm kalınlığında kesilmiş koronal düzlemdeki veya beyin dilimlerindeki soğutulmuş oksijenli A CSF ile doldurun. İğne ile altı yarım dilime ayrılabilen üç tam dilim elde edilecektir. Beyin dilimleri inkübe edilirken, bunları oda sıcaklığında oksijenli A CSF içinde en az bir saat bekletin.Oksijenlendirilmiş A CSF içerisinde, 10 millimolar FFN 511 stok çözeltisini A CSF'ye ekleyerek 10 micromolar FFN 511 yükleme çözeltisini hazırlayın. Ardından, A CSF içerisinde yüz micromolar A-D-V-A-S-E-P seven çözeltisini hazırlayın; her iki çözeltiyi de dilimlere ayrı ayrı yüklemeden önce en az 15 dakika boyunca oksijenlendirin. Her bir beyin dilimini, oda sıcaklığında 30 dakika boyunca FFN 511 yükleme çözeltisi ile inkübe edin.Ardından, yüklü kesiti oda sıcaklığında 30 dakika boyunca oksijenlendirilmiş 100 µM advers, seven A CSF içinde inkübe ederek hücre dışı dokuya bağlı di'yi uzaklaştırın; kesitler artık görüntülemeye hazırdır. FFN 511 boyaması, kesitlerde bir prairie Ultima Çok Fotonlu lazer tarama mikroskobu kullanılarak görüntülenecektir. FFN 511 yüklü kesiti kayıt odasına yerleştirin ve dakikada 1-2 mL akış hızıyla oksijenlendirilmiş A CSF ile süperfüze edin. Ardından, hareketi minimize etmek için kesitin üzerine naylon telli bir platin harp yerleştirin.Hareketi daha da en aza indirmek için, görüntüleme öncesinde kesitlerin oda içerisinde en az 10 dakika boyunca stabilize olmasını sağlayın. 10 x su daldırma objektifi altında parlak alan lüminesansı ile dorsal stri AUM'u görselleştirin ve konumlandırın; stimülasyon deneyi gerçekleştirmek için bipolar bükümlü tungsten elektrotları bu bölgeye yerleştirin. Boştaki görüntüleme alanı 300 mikrometre içerisinde yer almaktadır.Uyarıcı bipolar elektrodun iki ucu arasına, FFN 511 ile işaretlenmiş Sal terminallerinin bulunduğu bölgeyi, 63 x su daldırmalı ultraviyole objektif altındaki görsel alan görüntüsünün merkezine yerleştirin. FFN 511, Spectral Physics marka mi tai lazer ile 760 nanometrede uyarılır. SAL terminallerinin optimal floresansı bir bant geçiren filtre aracılığıyla görülür; görüntüleri 12 bit formatında, 512 by 512 piksel çözünürlükte ve 75 by 75 mikrometre ilgi alanları ile yakalayın. FFN 511 ile işaretlenmiş Sal dopamin terminallerini içeren örnek bir görüntü burada gösterilmiştir.FFN 511 etiketi, potasyum klorür amfetamin sülfatın yüksek konsantrasyonları ile veya potasyum klorür etiket giderme deneyinde elektriksel stimülasyon ile giderilebilir; beyin kesitine yüksek potasyumlu A CSF çözeltisi uygulandığında, FFN 511 etiketi dört dakika içinde giderilir. Elektriksel stimülasyonla FFN 511 boyamasında, zaman içindeki FFN 511 etiket gidermesini izlemek için XYZT görüntüleri kaydedin. Kesitin minimum düzeyde hareket ettiğinden ve kontrol görüntülerinin elde edilmesini takiben lazer tarafından fotobleyking oluşmadığından emin olmak için stimülasyondan önce Zack'in en az beş dakika boyunca kontrol zaman serisi görüntüsünü alın.Bipolar elektrotlar kullanılarak, bir master eight pulse jeneratörü tarafından tetiklenen bir isof lex stimulus izolatörü aracılığıyla striatuma yerel olarak 1, 4 veya 20 hertz frekanslarında stimülasyon uygulanırken XYZT görüntülemeye devam edin. Bu video, bir sal beyin kesitinde ekzositoz sırasında FFN 511'in yayılımını göstermektedir. Hazırlık aşamasında, FFN 511'in SAL'a yüklemesi tamamlandığında; striatumda yoğun etiketleme, kortekste seyrek etiketleme ve korpus kallozumda ise hiç etiketleme görülmediği gözlemlenir.Dopamin terminallerinin seçici etiketlenmesi, potasyum klorür öncesindeki ve 70 millimolar potasyum klorür uygulamasından iki dakika sonrasındaki bu temsili görüntülerde gösterildiği gibi, yüksek potasyum klorür ile ortadan kaldırılabilir. FFN 511 etiketlemesinin CSF kaybı amfetamin ile de gerçekleştirilebilir. Bu görüntü ise amfetamin öncesindeki striatumdaki FFN 511 etiketlemesini göstermektedir.Bu görüntü striatumun 20 µM amphetamine ile detaining işleminden 20 dakika sonrasını gösterirken, lokal elektriksel stimülasyon ile FFN 511 etiketlemesinin detaining işlemi bu görüntülerde örneklendirilmiştir; bu görüntüler stimülasyon öncesindeki ve 4 Hz stimülasyon başlangıcından 217 saniye ve 514 saniye sonrasındaki striatumdaki FFN 511 etiketlemesini göstermektedir. Normalize edilmiş floresan yoğunluğunun zamana göre değişimini gösteren bu grafik, FFN 511 detaining işleminin kalsiyum ve frekans bağımlı olduğunu göstermektedir; içi boş üçgenlerle temsil edilen kontroller hiç stimülasyon almamıştır. İçi boş dairelerle temsil edilen kadmiyum klorür ile detaining işlemi, stimüle edilmemiş kontrollerle aynıydı.Renkli dairelerle temsil edilen her stimülasyon frekansı için sönümleme eğrileri, tek bir eksponansiyel bozunma fonksiyonu ile fitlenmiş ve yarı ömür değerleri tau'nun 0.693'e bölünmesiyle hesaplanmıştır. Size, akut dilimdeki dopamin terminallerine floresan kuvvet nörotransmitteri FFN five 11'in nasıl yükleneceğini, bunun yüksek potasyum ile nasıl serbest bırakılacağını ve stimülasyonun nasıl uyandırılacağını göstermiş olduk. Bu, nörotransmitter salınımını tekil sinaptik terminaller düzeyinde optik olarak incelemek için geliştirilen ilk yöntemdir.Bu prosedürü uygularken, kesitlerin oldukça sağlıklı tutulmasının önemli olduğunu hatırlamak gerekir; ayrıca yükleme süresi, arka plan ağartma ve hareket artefaktları konusunda dikkatli olunmalıdır; kesitler, hazırlıktan sonra dört saate kadar iyi FFN beş 11 yüklemesi ve görüntülemesi sergiler. İşte bu kadar. İzlediğiniz için teşekkürler ve deneylerinizde başarılar dileriz.

dopamine-release-at-individual-presynaptic-terminals-visualized-with

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu rapor gösteriyor bağlı presinaptik BOUTONS istinat bireysel canlı nöronların mekanik izolasyon için kullanılan bir tekniktir. Vibrodissociated nöronlar, hızlı üretim, mükemmel farmakolojik kontrolü ve komşu hücrelerden etkisi olmadan gelişmiş uzay-klemp avantajlara sahip. Bu yöntem, sinaptik elemanları ve yama klemp kayıt görüntüleme için kullanılabilir.

Kemirgen Beyin Dilimleri Nöronlar Vibrodissociation Sinaptik İletim ve Görüntü Presinaptik Terminalleri Eğitim

Merkezi sinir terminallerine ikmal ve belirli sinaptik vezikül (SV) havuzları seferberlik ölçmek için canlı bir floresan görüntüleme tekniği açıklanmıştır. SV geri dönüşüm iki tur bir iç kontrol sağlayan aynı sinir uçlarında izlenir.

FM Boyalar Kültür Serebellar Granül Nöronlar Synaptic veziküllü Havuzu Yenileme Kantitatif Analiz

Striatal beyin dilimleri elektriksel olarak uyarılmış presinaptik dopamin dinamiklerini ölçmek için hızlı tarama döngüsel voltametri kullanma.

Hızlı tarama Cyclic Voltametri striatal Beyin Slices presinaptik dopamin Dinamiği

Dilimi floresan yanlış nörotransmiterler veya FFN'ler içeren aCSF'de inkübe edin.

Floresan Yanlış Nörotransmiterler Kullanarak Nörotransmisyonun Görselleştirilmesi

Bu video, bir potansiyostat ve ventral tegmental alandaki dopaminerjik aktiviteyi modüle etmek için ilaçların infüzyonu kullanılarak çekirdek akumbenlerinde dopamin salınımını ölçmek için anestezi uygulanmış bir sıçanda elektrotların ve kanüllerin implantasyonunu göstermektedir.

VTA Dopaminerjik Nöron Reseptör Manipülasyonu ile Bir Sıçan Modelinde Dopamin Salınımının İzlenmesi

Fonksiyonel sinir terminallerinin sinaptik vezikül görüntü geri dönüşüm için stiril FM boyaların kullanımını tarif eder. Bu protokol, sadece uyarılmış için değil, aynı zamanda doğal ve minyatür sinaptik faaliyetleri uygulanabilir. Protokol etkili değerlendirilebilir sinaptik olayların çeşitli genişletir.

Uyarılmış, Spontan ve Minyatür Synaptic Faaliyetleri Sırasında FM boyalar kullanarak sinaptik vezikül Geri Dönüşüm Sınavı

Dört boyutlu (4D) görüntüleme omurgalı sinir terminalleri canlı endozomlar iki tip arasındaki davranış ve etkileşimleri incelemek için kullanılmaktadır. Bu küçük yapıların hareketi gibi endozom füzyon ve ekzositoz gibi olayların onay izin, üç boyutlu olarak karakterize edilir.

Dört boyutlu Floresans Görüntüleme ile Sinir Terminalleri Yaşayan endozom Dinamiği Görselleştirme

Sinaptik vezikül (SV) Bisiklete binme nöronal sinapslarda, hücreler arası iletişim çekirdek mekanizması vardır. FM boya alımı ve yayın kantitatif SV endo - ve ekzositozu raporlaması birincil yoludur. Burada, biz FM1-43 Drosophila nöromüsküler kavşak (NMJ) modeli sinaps Bisiklet sürmeyi tüm uyarım yöntemleri karşılaştırın.

FM sinaps Bisiklete binme boya: yüksek potasyum depolarizasyon, elektrik ve Channelrhodopsin stimülasyon karşılaştırma

Bu protokolün amacı, ventral tegmental alan reseptörlerini, alt bölüm dopamin salınımı için katkılarını incelemek için doğrudan manipüle etmektir.

Phasic Dopamin'in Ventral Tegmental Alan Reseptör Reseptör Reseptör Düzenlemesini Değerlendirmek için Hızlı Taramalı Döngüsel Voltammetri (CIS-FSCV) ile Kombine infüzyon ve stimülasyon

Zebra balığı larva nöromüsküler kavşağı, sinaptik fizyolojiyi incelemek için çekici bir modeldir. Elektrofizyoloji ve optik görüntüleme dahil olmak üzere birçok deneysel tekniğe uygundur. Burada, dik bir epifloresan mikroskobu altında pHluorin bazlı bir prob kullanarak sinaptik iletimi görüntülemek için bir protokol açıklıyoruz.

Diseke Larva Zebra Balığının Nöromüsküler Kavşağında Sinaptik Vezikül Geri Dönüşümünün Canlı Görüntülenmesi

Öğrenin, FFN 511 ile fare beyin kesilerinde dopamin salınımını görselleştirmek için çok fotonlu lazer tarama mikroskobu kullanarak presinaptik terminallerdeki nörotransmisyon dinamiklerini nasıl inceleyebilirsiniz.

Bireysel Presinaptik Terminalleri Dopamin Yayın FFNs ile görüntülendi

Daha fazla video keşfet