Glioblastoma, hızlı büyüme ve çevresindeki beyin dokusuna infiltrasyon ile karakterize edilen oldukça agresif bir beyin tümörüdür.

Konfokal mikroskopi nasıl çalışır?

Konfokal mikroskopi, floresan etiketli numuneleri aydınlatmak için lazer ışığı kullanır ve çeşitli derinliklerde görüntüler yakalayarak 3D temsiller oluşturur.

Floresan proteinlerin kullanımının önemi nedir?

Floresan proteinler, hücresel süreçlerin veya belirli hücrelerin gerçek zamanlı görselleştirilmesini sağlar ve hücre davranışı üzerindeki dinamik çalışmaları kolaylaştırır.

Hücre göçünü izlemek neden önemlidir?

Hücre göçünü izlemek, tümör ilerlemesini anlamak ve kanser için etkili tedavilerin geliştirilmesi için kritik öneme sahiptir.

Z-stack görüntüleri nedir?

Z-stack görüntüleri, numune içinde farklı derinliklerde alınan bir dizi görüntüdür ve yapının 3D görünümünü oluşturmak için birleştirilebilir.

Hücre kültüründe sıcaklık kontrolü ne rol oynar?

Görüntüleme deneyleri sırasında hücre hayatta kalması ve işlevselliği için sıcaklık kontrolünün korunması esastır.

Glioblastoma Dokusunda Tümör Hücresi Migrasyonunun Hızlandırılmış Taramalı Konfokal Mikroskopi Kullanılarak Görüntülenmesi

JoVE Encyclopedia of Experiments

Neuroscience

0 views • 2:07 min • June 17th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Cerrahi olarak eksize edilmiş bir tümörden elde edilen bir glioblastoma doku dilimi ile başlayın.

Hücre sağkalımını desteklemek için doku dilimini bir kültür ortamında tutun.

Dilim içindeki tümör hücreleri, hücre göçü sırasında tümör hücrelerinin görselleştirilmesini kolaylaştıran yeşil bir floresan proteini veya GFP'yi eksprese eder.

Doku dilimlerini içeren kültür plakasını konfokal mikroskop tablasına yerleştirin.

Ortamın sıcaklığını korumak için bir sahne üstü inkübatör yerleştirin.

Bir objektif seçin ve dilim kültürlerini mikroskop altında görselleştirin.

Mikroskoplar, hücrelerdeki floresan proteinleri uyarmak için lazer ışığı kullanır.

Şimdi, çeşitli derinliklerde görüntüler yakalamak için örneği katman katman tarayın.

Hücrelerin ayrıntılı bir 3B temsilini oluşturmak için görüntüleri yığınlayın.

Ardından, hücre hareketini ve yönünü izlemek için düzenli aralıklarla Z-yığını görüntüleri yakalayın ve zaman içinde tümör hücresi göçünün incelenmesini sağlayın.

Çanağı, konfokal bir mikroskobun 37 derece,% 5 CO₂ sızdırmaz mikroskop kademeli üst inkübatörüne yerleştirin. Hücre göçünün üç boyutlu, zamana bağlı görüntülerini yakalamak için tek veya çoklu fotonlu görüntüleme ile birlikte uzun bir çalışma mesafesi, 10x hava hedefi kullanın. Dilim kenarı ile dokunun merkezi arasında yeterli yoğunlukta floresan etiketli tümör hücresi bulunan uygun bir alanı bularak dilimi mikroskopla görselleştirin. Ardından, görüntüleme yazılımının çok boyutlu analiz modunda, z yığınının merkezini, görüntülenecek tüm konumlar görünür bir floresan hücresel sinyal içerecek şekilde ayarlayın. Ve her z-stack alımı için yeterli bir zaman ayarlayın.