Küçük Kemirgenler sistometri ve Kullanımı: Mesane Chemosensation Çalışması

Bu işlemin amacı, kimyasal bileşiklerin mesanenin depolanması ve işeme fonksiyonları üzerindeki etkisini belirlemektir. Bu, önce mesaneye bir kateter yerleştirilerek gerçekleştirilir. Kısa bir iyileşme periyodundan sonra, kateter yoluyla 30 dakika boyunca bir kontrol solüsyonu infüze edilir.

İntravezikal basınç ve işeme hacmi 30 dakika daha kaydedildiğinden, hayvana ilgilenilen bir bileşik verilir. Sonuç olarak, sonuçlar, tahriş edici kimyasalların işeme frekansının analizi yoluyla işeme modelini de gösterebilir. Bu tekniğin, izole edilmiş mesanenin kasılma kaydının kaydedilmesi gibi mevcut yöntemlere göre en büyük avantajı, bu organın işlevinin daha fizyolojik koşullarda incelenebilmesidir.

Örneğin, merkezi sinir sisteminin düzenleyici eylemleri korunur. Bu yöntemin görsel olarak gösterilmesi çok önemlidir, çünkü ameliyat adımlarının öğrenilmesi zordur, çünkü deneyin başarısını sağlamak için gözlemlenmesi gereken bir dizi teknik detay ve manevra vardır. Öncelikle mesaneye implante etmek istediğiniz tüpü hazırlamak için istenilen uzunlukta bir PE 50 tüpü kesin ve ana kateterin üzerine küçük beyaz bir parça 18 gauge kateter yerleştirin.

Ardından, tüpün bir ucunu alevlendirerek sonunda küçük bir manşet oluşturun ve havayı boşaltmak için tuzlu suyla yıkayın. Şimdi 10 ila 12 haftalık bir dişi sıçanda isof flor ile anestezi indükleyin. Anesteziyi indükledikten sonra, flor idame seviyesini ayarlayın.

Hayvanı sırtına yerleştirin ve 10 cc'lik bir şırıngadan yapılmış küçük bir anestezi maskesi yerleştirin. Karnı tıraş ettikten ve dermisi dezenfekte ettikten sonra ameliyata devam edin. Aşağıdaki ameliyat hem sıçanlarda hem de farelerde aynı şekilde gerçekleştirilir.

Mesaneyi açığa çıkarmak için daha düşük bir orta hat laparotomisi yaparak başlayın. Daha sonra ameliyatın en kritik kısmı başlar. Cerrahi mikroskop altında, emilmeyen monofilament altı sıfır sütür kullanarak mesane kubbesine bir çanta ipi sütürü yerleştirin.

Daha sonra, bir iğne kullanarak, çanta ipinin içinde küçük bir sistostomi yapın. Manşetli PE 50 kateteri bu delikten geçirin. PE 10 gibi daha ince kateter tüpleri daha yüksek ve daha değişken bir dirence sahip olabilir, bu nedenle önerilmezler.

Bir cerrah düğümü kullanarak çanta ipini tüpün etrafına sabitleyin. Ardından, kelepçeli uç doğrudan dikişin altına gelene kadar kateteri yavaşça dışarı doğru çekin. 18 gauge kateter parçası, sızıntıyı önlemek için dikişe doğru itilir.

Kateter ve mesane arasında sızıntı olup olmadığını kontrol edin. Nazik bir tuzlu su infüzyonu ile. Sızıntıları ek dikişlerle sıkın.

Şimdi, monofilament dikişler kullanarak karın kaslarını kapatın ve insizyonun üst kısmında kateter için bir geçit bırakın. İçi boş bir metal çubuk kullanarak kateteri interskapular bölgeye tünelleyin, böylece hayvanların tüpü ısırmasını önleyin. Ameliyattan sonra metal çubuk cilt altına, karın ve sırt kaslarının üzerine yerleştirilmelidir.

Çubuğu hayvanın içinden deri altından interskapular bölgeye itin. Karın kaslarını ve cildi emilmeyen monofilament dikişlerle kapatarak ameliyatı tamamlayın. İmplante edilen kateterin geçirgenliğini ve stabilitesini tuzlu su ile yıkayarak kontrol etmek artık çok önemlidir.

İnfüzyon çözeltisi mesaneden çıkmalı, üretrayı ateşlemelidir. Analjezik deri altına verdikten sonra, kateterin dış ucunu plastik bir filmle kapatın ve kateteri farenin alt sırtının derisine sabitleyin. Son olarak, hayvanın 30 dakika iyileşmesine izin verin.

Sitometriye başlamadan önce, aletlerin uygun şekilde kalibre edildiğinden emin olun. Fareyi, dijital bir terazi üzerinde duran yağ içeren bir kabın üzerindeki metabolik bir kafese yerleştirin. Bir sonraki adım, implante edilmiş kateteri bir yem saplaması aracılığıyla üç bir musluğa bağlamaktır.

Musluk, basınç dönüştürücüsüne ve bir infüzyon pompasına bağlanmalıdır. Basınç dönüştürücü, bir amplifikatör aracılığıyla veri toplama sistemine daha fazla bağlanır ve halka açık yazılımı kullanan bir bilgisayar, mesaneye salin damlatmak için infüzyon pompasını başlatarak kontrol ölçümlerine başlar. 30 dakikalık bir süre boyunca, metabolik kafes, farenin işeme hacmini tahmin etmek için kullanılan dijital bir denge üzerinde askıya alınır.

Mesane doldukça ve boşaldıkça intraveziküler basınç kaydedilir. Bir sonraki adımda, ilaçlar 30 dakikalık bir veri toplama işlemi boyunca sistemik veya intravezikal olarak uygulanabilir. Deney tamamlandığında hayvan kurban edilmelidir.

Bir sıçandan alınan tipik bir basınç izi, sıvı infüzyonu sırasında, belirli bir eşiğe ulaşılana kadar mesanede yavaş bir basınç oluşumu olduğunu gösterir. Daha sonra mesane kasılır ve idrar sfinkteri açılır ve damlatılan solüsyonun üretradan geçmesine izin verir. Hal böyle olunca mesane boşaltılır.

Kasılma duracak ve basınç tekrar bazal seviyeye düşecektir. Bir fareden toplanan veriler aynı özelliklerin tümüne sahiptir. Sitometri, hardal yağı veya mo'nun moleküler hedeflerini belirlemek için kullanıldı, MO, idrar kesesi gibi viseral organların deneysel inflamasyon ve hiperaljezi modellerinde uzun süredir kullanılan oldukça reaktif bir bileşiktir.

Beklendiği gibi, 10 milimolar MO'nun intravezikal infüzyonu, vahşi tip farelerde kasılma aralığında güçlü bir azalmaya neden oldu. İlginçtir ki, MO reseptörü T RPA A'nın eksik olduğu fareler, aynı koşullar altında vahşi tiplere benzer bir sonuç verdi. Buna karşılık, MO, bir TRP V bir nakavt faresinde sistemik parametrelerde çok daha zayıf bir değişikliğe neden oldu, vahşi tip fareye göre hem TRPA bir hem de TRP V birinin çift nakavtları M mo dozuna neredeyse yanıt vermedi.

Veriler, TRP V'nin, mo'nun neden olduğu viseral tahrişte önemli bir rol oynayabileceğini düşündürmektedir. MO'nun intravezikal infüzyonu öncesi ve sırasında ortalama anlık işeme frekansı bu verileri destekler. Ortalama frekans, bir salin infüzyonuna göredir.

Bu prosedürü denerken, kateterin mesaneye sıkıca bağlı kalmasını sağlamak önemlidir, böylece infüze edilen solüsyonun karın içine sızması olmaz. Bu videoyu izledikten sonra, mesaneye kateter implantasyonunu ve kontrollü mesane bolluğu altında bir sitometri aşamasında uyanık veya anestezi uygulanmış hayvanların yerleştirilmesini gerektiren intravezikal basıncın nasıl ölçüleceğini iyi anlamalısınız.