Küçük Kemirgenler sistometri ve Kullanımı: Mesane Chemosensation Çalışması

Bu prosedürün amacı, kimyasal bileşiklerin mesanenin depolama ve boşaltma fonksiyonları üzerindeki etkisini belirlemektir. Bu işlem, öncelikle mesaneye bir kateter implante edilerek gerçekleştirilir. Kısa bir iyileşme döneminin ardından, kateter aracılığıyla 30 dakika boyunca bir kontrol çözeltisi infüze edilir.

İntravezik basınç ve boşaltılan hacim başka bir 30 dakika boyunca kaydedilirken, hayvana ilgili bileşik infüze edilir. Sonuçlar, boşaltım sıklığı analizi yoluyla tahriş edici kimyasalların boşaltım modelini nasıl etkilediğini gösterebilir. Bu tekniğin, izole mesane kontraktilitesinin kaydedilmesi gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, bu organın fonksiyonunun daha fizyolojik koşullar altında incelenebilmesidir.

Örneğin, merkezi sinir sisteminin düzenleyici etkileri korunur. Cerrahi basamakların öğrenilmesi, deneyin başarısını sağlamak için gözlemlenmesi gereken çok sayıda teknik detay ve manevra içerdiğinden zor olduğundan, bu yöntemin görsel olarak gösterilmesi kritik önem taşımaktadır. Mesaneye implant etmek istediğiniz tüpü hazırlamak için öncelikle, bir PE 50 tüpünü istenen uzunlukta kesin ve ana kateterin üzerine 18 gauge kateterden küçük beyaz bir parça yerleştirin.

Ardından, tüpün bir ucunu yakarak sonunda küçük bir manşon oluşturun ve içerideki havayı boşaltmak için salin ile yıkayın. Şimdi, 10 ila 12 haftalık dişi bir sıçana izofloran ile anestezi uygulayın. Anesteziyi başlattıktan sonra, izofloran idame seviyesini ayarlayın.

Hayvanı sırtüstü pozisyona getirin ve 10 cc'lik bir şırıngadan yapılmış küçük bir anestezi maskesi yerleştirin. Karın bölgesini tıraş edip dermisi dezenfekte ettikten sonra cerrahi işleme geçin. Aşağıdaki cerrahi işlem hem sıçanlarda hem de farelerde aynı şekilde uygulanır.

Mesaneyi açığa çıkarmak için alt orta hat laparotomisi yaparak başlayın. Ardından cerrahinin en kritik aşamasına geçilir. Cerrahi mikroskop altında, emilmeyen monofilaman altı sıfır sütür kullanarak mesane kubbesine bir torba ağzı dikişi (purse string suture) atın.

Ardından, bir iğne kullanarak purse string dikişinin içinde küçük bir sistostomi gerçekleştirin. Manşetli PE 50 kateteri bu delikten içeri yerleştirin. PE 10 gibi daha ince kateter tüpleri daha yüksek ve değişken bir dirence sahip olabildiğinden önerilmezler.

Bir cerrah düğümü kullanarak torba ağzı dikişini tüp çevresinde sabitleyin. Ardından, manşetli uç doğrudan dikişin altına gelene kadar kateteri nazikçe dışarı doğru çekin. Sızıntıyı önlemek için 18 gauge kateter parçası dikişe doğru itilir.

Kateter ile mesane arasında sızıntı olup olmadığını kontrol edin. Bunun için nazikçe serum fizyolojik infüzyonu uygulayın. Varsa sızıntıları ek sütürlerle kapatın.

Şimdi, insizyonun üst kısmında kateter için bir geçiş bırakarak karın kaslarını monofilaman sütürlerle kapatın. Hayvanların tüpü ısırmasını önlemek için içi boş bir metal çubuk kullanarak kateteri interskapular bölgeye tünelleyin. Cerrahi işlemden sonra, metal çubuk deri altına, karın ve sırt kaslarının üzerine yerleştirilmelidir.

Çubuğu hayvanın deri altından interskapular bölgeye doğru itin. Karın kaslarını ve cildi emilmez monofilaman sütürlerle kapatarak cerrahi işlemi tamamlayın. Şimdi, implante edilen kateterin geçirgenliğini ve stabilitesini salin ile yıkayarak kontrol etmek oldukça önemlidir.

İnfüzyon çözeltisi mesaneden çıkıp üretradan boşalmalıdır. Analjezik deri altına uygulandıktan sonra, kateterin dış ucu plastik bir filmle kapatılmalı ve kateter sıçanın alt sırt derisine sabitlenmelidir. Son olarak, hayvanın 30 dakika boyunca iyileşmesine izin verilmelidir.

Sitomtriye başlamadan önce, cihazların uygun şekilde kalibre edildiğinden emin olun. Sıçanı, dijital bir terazi üzerinde duran ve içinde yağ bulunan bir kapla desteklenmiş metabolik bir kafese yerleştirin. Bir sonraki adım, implante kateteri bir luer uç aracılığıyla üç yollu bir musluğa bağlamaktır.

Musluk, basınç dönüştürücüye ve bir infüzyon pompasına bağlanmalıdır. Basınç dönüştürücü, bir amplifikatör aracılığıyla veri toplama sistemine bağlanır ve halka açık yazılım kullanan bir bilgisayar, mesaneye salin infüzyonu yapmak için infüzyon pompasını çalıştırarak kontrol ölçümlerine başlar. 30 dakikalık süre boyunca, metabolik kafes, sıçanın boşalttığı hacmi tahmin etmek için kullanılan dijital bir terazi üzerine asılır.

Mesane dolarken ve boşalırken intravezikal basınç kaydedilir. Bir sonraki adımda, 30 dakikalık başka bir veri toplama süresi boyunca ilaçlar sistemik veya intravezikal olarak uygulanabilir. Deney tamamlandığında, hayvan sakrifiye edilmelidir.

Bir sıçandan elde edilen tipik bir basınç izleği, sıvı infüzyonu sırasında belirli bir eşiğe ulaşılana kadar mesanede yavaş bir basınç artışı olduğunu göstermektedir. Ardından mesane kasılacak ve üriner sfinkter açılıp instilled çözeltinin üretra üzerinden geçişine izin verecektir. Böylece mesane boşaltılmış olur.

Kasılma duracak ve basınç yeniden bazal seviyeye düşecektir. Bir fareden toplanan veriler aynı özelliklerin tamamına sahiptir. Hardal yağı veya mo'nun moleküler hedeflerini belirlemek için sitometri kullanılmıştır. MO, idrar kesesi gibi visseral organların inflamasyon ve hiperaljezi deneysel modellerinde uzun süredir kullanılan oldukça reaktif bir bileşiktir.

Beklendiği üzere, 10 millimolar MO'nun intravezikal infüzyonu, vahşi tip farelerde kontraktil aralıkta güçlü bir azalmaya neden olmuştur. İlginç bir şekilde, MO reseptörü TRPA1 eksikliği olan fareler, aynı koşullar altında vahşi tiplere benzer bir sonuç göstermiştir. Buna karşın, MO'nun bir TRPV1 nakavt faresindeki sistemetrik parametrelerde neden olduğu değişim, vahşi tip fareye göre çok daha zayıftır; hem TRPA1 hem de TRPV1 nakavt olan çift nakavt fareler ise MO dozuna neredeyse yanıtsız kalmıştır.

Veriler, TRP V1'in MO ile indüklenen viseral irritasyonda kilit bir rol oynayabileceğini göstermektedir. MO'nun intravezikal infüzyonu öncesindeki ve sırasındaki ortalama anlık boşaltım sıklığı bu verileri desteklemektedir. Ortalama sıklık, salin infüzyonuna göre belirlenmiştir.

Bu prosedür uygulanırken, infüzyon çözeltisinin karın boşluğuna sızmaması için kateterin mesaneye sıkıca tutturulduğundan emin olmak önemlidir. Bu videoyu izledikten sonra, mesaneye kateter implantasyonu ve uyanık veya anestezi altındaki hayvanların kontrollü mesane perfüzyonu altında bir sistometri platformuna yerleştirilmesini içeren intravezikal basınç ölçümünün nasıl yapılacağı konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.