Photolithographically Tanımlı Parylene-C hücre Desenlendirme: SiO 2 Yüzeyleri

Bu prosedürün genel amacı, silikon dioksit hizmetleri üzerindeki hücreleri, önceden tanımlanmış bir temel paraline tasarımına göre modellemektir. Bu, önce istenen desende bir fotoğraf maskesi oluşturularak gerçekleştirilir. İkinci adım, bir silikon gofreti oksitlemek ve ardından paraline ile kaplamaktır.

Daha sonra, bir mikroelektronik temiz oda tesisinde gerçekleştirilen fotolitografik işlemler, istenen tasarımı ortaya çıkarmak için paraline kaplamayı seçici olarak aşındırmak için kullanılır. Son adım, önce piranha asidi kullanılarak cipsleri aktive etmek ve daha sonra üç ila 12 saat boyunca fetal buzağı serumunda inkübe etmektir, daha sonra kültür için bir hücre süspansiyonu uygulanabilir. Sonuç olarak, hücre paterni, diseksiyon mikroskobu kullanılarak canlı hücre görüntüleme ile veya konfokal floresan mikroskobu kullanılarak fiksasyondan sonra değerlendirilebilir.

Bu tekniğin mevcut birkaç hücre modelleme platformuna göre ana avantajı, biyolojik ajanları temiz odaya getirmeye gerek olmamasıdır. Ayrıca, desen çipleri önce par asit ve ardından serum ile aktive edilene kadar süresiz olarak saklanabilir. İstenen paraline C konfigürasyonunu tasarlamak için, CIF veya GDS iki dosyasını okuyabilen, yazabilen bir düzen düzenleyici yazılım paketi kullanın.

Fotoğraf maskesi üreticisini uygun bir mikroelektronik tesisine yaptırın veya şirket içinde yapın. Tesisler varsa, 200 nanometrelik bir silikon dioksit tabakası oluşturmak için bir silikon gofreti 950 santigrat derecede atmosferik bir yatay fırında 40 dakika oksitleyin. Bundan sonra, kalınlığı küçük bir nokta ile onaylayın.

Spektroskopik reflektometre. Gofretleri vakum biriktirme sistemine yerleştirin, hazne kapağının içine sinüs yapışma arttırıcı uygulayın. Pompalama aşağı döngüsü sırasında, sinüs yapışma arttırıcısı, oksitlenmiş gofret yük paraline, bir vakum biriktirme sistemi kullanarak miligram dimer başına 1.3 nanometre hızında ortam sıcaklığında fırın tortu paraline C kaplar.

Bundan sonra, HMDS yapışma arttırıcıyı paraline kaplı gofret üzerine yatırın. Uygun bir foto rezistans kaplama sistemi kullanarak, foto rezistans kaplama sistemini kullanarak bir mikronluk bir kalınlık elde etmek için pozitif foto rezistans uygularken gofreti 30 saniye boyunca 4.000 RPM'de döndürün, ardından gofreti 90 santigrat derecede 60 saniye boyunca yumuşak bir şekilde pişirin. Şimdi hem gofret hem de önceden üretilmiş fotoğraf maskesini bir maske hizalayıcıya yerleştirin.

İstenen deseni fotoreziste aktarmak için fotorezist kaplı gofreti UV ışığıyla maruz bırakın. Daha sonra, açıkta kalan gofreti 110 santigrat derecede 60 saniye pişirin. Daha sonra, altta yatan silikon dioksiti ortaya çıkarmak için bir oksijen plazma aşındırma sistemi kullanarak korunmasız paraline Hoff'ta uygun bir geliştirici solüsyonunda geliştirerek açıkta kalan tüm fotorezisti gofretten çıkarın.

Daha sonra cipsleri küp küp doğradıktan sonra tozsuz kutularda gerekene kadar saklayın. Bu prosedürde, bir asetonu 10 saniye boyunca yıkayarak kalan fotorezisti talaşlardan çıkarın. Daha sonra deiyonize damıtılmış H2O içinde üç kez durulayın, daha sonra taze pirana asidini bir asit çeker ocakta yapın, cipsleri 10 dakika boyunca piana asidine batırarak temizleyin ve aşındırın.

Daha sonra cipsleri deiyonize H2O içinde üç kez durulayın ve laminer akışlı bir doku kültürü başlığında steril bir kültür kabına aktarın. Altı oyuklu bir plakaya oyuk başına iki çip yerleştirerek hücre deseni için çipleri etkinleştirin. Daha sonra, tüm cipsleri tamamen daldırmak için iki mililitre fetal sığır serumu ekleyin.

Cipsleri 37 santigrat derecede üç ila 12 saat serumda inkübe edin. Şimdi çipleri aktivasyon solüsyonlarından çıkarın. Hank'in dengeli tuz solüsyonunda 10 saniye boyunca bir kez yıkayın.

Daha sonra çipleri bir kültür kuyucuğuna yerleştirin ve seçilen hücre tipini normal büyüme ortamında bir süspansiyon olarak plakalayın. Optimum hücre kaplama yoğunluğu, hem hücre tipine hem de çip üzerindeki paraline C'nin geometrik modeline bağlıdır. Mililitrede beş çarpı 10 ila dördüncü hücre yoğunluğu mantıklı bir başlangıç noktasıdır.

Görüntüleme, hücre modellemesi için altta yatan motivasyona göre uyarlanır, ancak canlı hücre davranışı, bir diseksiyon mikroskobu ve uygun bir röle merceğine sahip bir dijital kamera kullanılarak kolayca değerlendirilebilir. İşte üç gün sonra paraline C silikon dioksit üzerinde kültürlenen HEC 2 93 hücrelerinin canlı hücre görüntülemesi. İn vitro, gemiler fetal sığır serumunda üç saat boyunca inkübe edildi ve hücreler, mililitre başına beş kez 10 ila dördüncü hücre konsantrasyonunda süspansiyon halinde kaplandı.

Paraline C, hücre yapışmasını teşvik ederken, çıplak silikon dioksit hücreleri iter. Bu şekil, silikon dioksit üzerinde çeşitli paraline C paternleri üzerinde büyütülen primer insan glioma türevli kök benzeri hücrelerin immünofloresan görüntülerini göstermektedir. Burada şema, retiküler paraline tasarımını, glial fibriler asidik protein için boyanmış sabit hücrelerin floresan mikrografını ve aynı çip üzerindeki canlı hücrelerin ışık mikrografını göstermektedir.

Burada, farklı bir paraline tasarımında GFAP lekeli hücreleri gösteren bir floresan görüntü ve kollu paraline tasarımında düğümün yansıma görüntüsü yer almaktadır. Ve bu şekil, paraline C silikon dioksit üzerinde kültürlenen üç T, üç L, bir hücrenin canlı hücre görüntülemesini göstermektedir. Dört gün in vitro olarak, çipler fetal sığır serumunda üç saat boyunca aktive edildi ve hücreler, mililitre başına dördüncü hücrelerin beş katı 10'luk bir konsantrasyonda süspansiyon halinde kaplandı.

Bu örnekte, platform, hücrelerin Lene C ve silikon dioksit bölgeleri üzerinde eşit derecede birleştiği modellemeye izin vermez. Bu protokolü gerçekleştirirken, pirana tedavisinden hemen sonra serum aktivasyonunun gerçekleşmesi gerektiğini hatırlamak önemlidir. Bunun yapılmaması, desenleme sürecinin baltalanmasına neden olur.

Piranha asidi ile çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini unutmayın. Piranha asidini kimyasal bir davlumbazda hazırlayın ve kullanın ve uygun gözlük, laboratuvar önlüğü ve eldiven giydiğinizden emin olun.