Name: Yetişkin Zebra balığı Böbrek Nefron Kompozisyon ve Fonksiyon Analizi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-08-09T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 53 s
Description: Keşfedin yetişkin zebra balığı böbreğinde nefron segment kompozisyonu ve fonksiyon analizi yöntemlerini. Floresan boyama ve mikroskopi teknikleriyle böbrek anatomisi görselleştirilir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma aşağıdaki gelen RAW fon tarafından desteklenmiştir: Ulusal Sağlık Enstitüleri K01 DK083512, DP2&#39;deki OD008470, ve R01 DK100237 verir; Dimes Basil O&#39;Connor Başlatan Bilgin hibe # 5-FY12-75 Mart; Bilim ve Biyolojik Bilimler Bölümü Notre Dame Koleji Üniversitesi&#39;nden fon başlatmak; ve Gallagher Ailesi adına Elizabeth ve Michael Gallagher Notre Dame Üniversitesi cömert bir hediye kök hücre araştırmaları teşvik etmek. Maliyeciler çalışma tasarımı, veri toplama ve analizi, yayımlamak kararı, ya da yazının hazırlanmasında herhangi bir rolü vardı. Biz onların destek için Biyolojik Bilimler Bölümü kurmayları teşekkür ederiz ve bizim zebrabalıkları koloninin bakım ve refah onların üstün özveri için Notre Dame de Zebra Araştırma Merkezi. Son olarak, bu çalışma konusunda yorumlar, tartışmalar ve anlayışlar için bizim araştırma laboratuvarında üyelerine teşekkür ederim.

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Burada, biz yetişkin zebrabalıkları nefron segmenti bileşenlerin görselleştirme izin yöntemler tarif etmişlerdir. Floresan dekstran konjügatların enjeksiyonu bu proksimal tübül hücrelerinin 30,38 endositik özellikleri nedeniyle tercihli PCT etiketleme sağlar. Bu yöntem, farklı floresan konjugatlarının bir kuş sürüsü ile elde edilebilir dekstranlar varlığından büyük bir esneklik ile yapılabilir. İkinci etiketleme işlemleri gerekli değildir Buna ek olarak, lizin tamir edilebilir dekstranlar kullanımı PCT kesimleri etiketlemek için özellikle uygun bir yoldur. Bu, nispeten basit bir sinyal tespit edilmesini sağlar ve diğer birçok floresan etiketler, immunolabeling ve raportör transgenik çizgiler kullanımı ile uyumludur. Alkalin fosfataz Etiket aynı zamanda, PST PCT güçlü reaktivite ve biraz daha zayıf bir reaktiviteye sahip, proksimal tübül işaretler. Son olarak, DBA boyama bir ch gösterilecek uzak tübül segmentlerinde, etiketleme sağlararacteristic morfolojisi dallıdır. Immün olmayan kökenli, şeker bağlayıcı proteinler olan çeşitli lektin molekülleri, memeli nefron kesimleri 47 ayırmak için yaygın olarak kullanılmaktadır. O memeli böbreklerde 47. toplama kanalları işaretlemek için kullanılır gibi zebrabalıkları DBA, distal tübül kesimleri ile korelasyon olması ilginçtir. Birlikte ele alındığında, bu yöntemler, böbrek bileşimi ve işlevini belge çeşitli kombinasyonlar halinde kullanılabilir. Bu yöntemlerin hepsi tüm böbrek hazırlıklar kullanılabilir beri, tamamen daha fazla zaman tüketen, sıkıcı yöntemlerle, örneğin, cryosection iş ve immunolabeling kullanımına dayanmadan organın her nefron yapısını ve fonksiyonunu değerlendirmek için araçlar sağlar. Bununla birlikte, bu yöntemler, makalede açıklanan lekeleri cryosection olarak geçerli değildir. Cryosection analizi immünohistokimyası belirli peptidleri algılamak için daha uygundur (bütün montaj kıyasla) örnekleri oluştururDES, ancak elbette bu tip analiz uygun bir birincil antikor kullanılmasını gerektirir. Ne yazık Zebrafish hayvan modeli ile çalışan bir büyük sınırlama antikorların düşük mevcudiyet kalır. Böylece WİSH yani, en yaygın olarak kullanılan kalır &#39;git, gen ekspresyonunun analizi için prosedür. Mor veya kırmızı çökeltileri üretmek için BCIP NBT ve / veya INT substrat reaksiyonlar kullanarak DİLERİZ cryosections floresan boyama ile uyumlu değildir. Bir seçenek floresan WİSH tespiti, zebra balığı embriyonik örnekler için optimize edilmiş olan ve yetişkin böbreğinin kullanım için uygun olabilir bir prosedürün kullanımı çağırmak olacaktır. Bu video makalede yöntemlerin açıklaması ayrı ayrı bölümler gibi eGFP veya mCherry gibi bir muhabir ile etiketlenmiş edildiği transgenik zebrafish hatları ile birlikte floresan, WISH gibi teknikler ile daha fazla deneyler için izin vermelidir. Alternatif olarak, yöntemler, burada tarif edilen edebildiğidiğer hayati boyalar, örneğin, diğer lektinlerin ile kombinasyon halinde test edilebilir d. Böylece, daha fazla uyum ve burada açıklanan yöntemlerin genişleme bütün montaj böbrek hazırlıkları ve analiz için araştırmacının ihtiyaçlarına göre çağırılacak. Bu durumda, bu yöntemler, devam eden yenileme çalışmaları için Zebrafish modeli ile birlikte uygulanması için ve genetik hastalığın modelleme geniş bir potansiyele sahiptir. Böbrek hatalarımız için yenilikçi araştırma ve tedaviler için acil bir ihtiyaç vardır. Milyonlarca insan, konjenital akut ve / veya kronik nedenlerden kaynaklanan her yıl böbrek hastalığı çeşit muzdarip. Ayrıca, böbrek hastalığı prevalansı bu hastalıkları küresel bir halk sağlığı sorunu 14,15 yaparak, dünya çapında yükselmeye devam ediyor. Harici bir diyaliz makinesi böbrekler bu rolü gerçekleştirmek mümkün değilse metabolik atıkların bir hastanın kanını kurtulmak için hizmet sayede örneğin hemodiyaliz gibi tedaviler mevcuttur. Ne yazık kiTedavisi devam eden yaşam için gerekli olduğu, bu müdahale, sınırlamaları vardır. Ayrıca, hastalar en sonunda hasta, bekleme üzerine yerleştirildiği zaman almak için yıllar alabilir bir böbrek nakli gerektirecektir. Hatta bir böbrek nakli aldıktan sonra, birçok hasta prosedürü sonucunda olumsuz etkileri acı ve hayatlarının geri kalanı için bu etkileri savaşmak zorundadır. Bu zorluklar, böbrek hastalığı önlemeye ya da belki de, doku rejenerasyonu 8,16,52,53 ek olarak bir yardımcı olmak için ya da yeni tedavilerin geliştirilmesi için ciddi bir ihtiyaç göstermektedir. Biyomedikal laboratuarlarda insan deneğin kullanımının bariz etik kısıtlamaları göz önüne alındığında, hayvan modeller, insan hastalığının patogenezinde çalışma için yeni tedavilerin testleri için gereklidir. Anatomik benzerlik ve evrimsel yakın bir sonucu olarak, fare, insan hastalıklarının 45 en yaygın olarak kullanılan model olmuştur. Ancak, bu hayvanın belirli sınırlamalar dahil olmak üzere, vardıryetersizlik ing in vivo ve büyük ölçekli genetik ekranlar tamamladıktan pratiklik organ gelişimini görselleştirmek için. Zebra balığı insan hastalığı 45,46 organ gelişimi ve modelleme çalışmaları için uygun bir ve faydalı model organizma vardır. Insan hastalığı ile ilgili olarak, zebrabalıkları fonksiyonel homologları ve insan genlerinin tüm 54,55 yaklaşık% 70 mevcuttur. Son çalışmalar böbrek araştırmalar 31,37,56 birçok alanları için zebrafish programını ortaya koymuştur. AKI sonra Zebrafish yenilenme ve onarım çalışmaları tübül epitel rejenerasyon ve neonephrogenesis oluşur ve 30,37 Timecourse rejenerasyon boyunca üst üste iki süreç olduğunu göstermektedir. Bir aminoglikozid antibiyotik olarak adlandırılan gentamisin kullanımı yetişkin zebrabalıkları 29,30,37 ABH sonuçlarını incelemek için aracılığıyla bir yaralanma paradigması olarak kullanılmıştır. Gentamisin bir yaklaşık olarak iki haftalık bir süre boyunca yaralanmayı takip eden, proksimal tubules yeniden, ve bu arada yeni nefron organı 29,30,37 boyunca oluştururlar. Genel olarak, epitel rejenerasyon düzenleyen mekanizmalar son derece tartışmalı kalır. Tamir işleminin bir önerilen mekanizmasında, lümenine ölü hücre dökülmesi ve ardından başlangıç ​​akut yaralanma olay vardır. Sonra, yeni hücreler ayırt sonra de-farklılaşma, çoğalma ve göç olayları bir dizi, yaralı bazal membran repopulating ve yaralı siteye işlevini geri vardır. Alternatif olarak, diğer çalışmalar yedek hücreler nefron tübüller içinde ikamet kök / progenitör hücrelerden kaynaklanan ileri sürmüşlerdir. Zebrabalıkları neonephrogenesis süreci ile ilgili olarak, hücre agregatları gentamisin enjeksiyon 29,30 tarafından aşağıdaki AKI gözlenmiştir. Bu agregalar sonra zaten mevcut olan tübüllerine 29,30 içine indiğimizde yeni nefron içine olgun. Nefron epitel rejenerasyonu ve neonephr birleştiren ortak konuogenesis onların sırf gizem faktörü: Şu anda bu rejeneratif kahramanlık geçerli anlayışlar vardır daha ortaya nasıl hakkında katlanarak daha sorular vardır. Ancak bugüne kadar, kanıt birkaç heyecan verici çizgileri zebrafish kullanarak böbrek yenilenmesi araştırması gerçekten de doğrudan öteleme potansiyel 56-58 olabilir insan AKI içine ilgili karşılaştırmalı bilgiler sağlayabilir olduğu fikrini desteklemektedir. Kimyasal tarama son histon deasetilaz inhibitörü metil-4-(feniltio) -butanoat (m4PTB) 56,57 tanımlanmasına yol açan zebrafish embriyo böbrek projenitör hücrelerin çoğalmasını arttırmak küçük molekülleri tanımlamak için. Gentamisin kaynaklı AKI ile zebra balığı larvalarına karşı Bu bileşimin uygulanmasıyla larva yaşama ve artmış renal tübüler çoğalması 56,58 gelişmiş olduğunu göstermektedir. Orta işemi ile uyarılan AKI ile farenin m4PTB ile muamele edildi, geri kazanımlarının Assoc hızlandırıldırenal tübüler hücrelerin 58 çoğalan hem tübüler atrofi ve hücre döngüsü tutuklama bir azalma ile iation. Bu bulgular, normal zebra balığı böbrek gelişimi ve / veya AKI rejeneratif tepki sorumlu yollar memelilerin 56 ile konserve olacağını göstermektedir. Böylece, ileri çalışmalar söz konusu sinyalizasyon yolları belirlemek ve bunların etkileşimleri-zebrabalıkları nefroloji alanında bu önemli hedef için bir umut cadde sağlar anlamak rejenerasyon-yani mekanizmalarını ayrı kızdırmak için gerekli iken. Bunlar da bu protokolde tarif nefron hücre etiket gibi araçlar, AKI modellerinde böbrek kompozisyon ve özelliğe değerlendirmek için kullanılabilir tahlillerin bir grubunu temsil eder. Dahası, böbrek hastalığı transjenik modelleri karakterize uygulanabilir ve böbrek baraj sonra nefron yapının restorasyon teşvik edebilen kimyasal terapötik durumların belirlenmesinin yol sağlayabiliryaş.

Böbrek vücutta fizyolojik fonksiyonları yerine getiren bir çok kompleks bir organdır. Böbreğin en önemli işlevi, metabolik atık atılımı olduğunu ve bu görevi yakından sıvı dengesinin korunması ile iç içedir. Böbrek eş zamanlı kan basıncı, elektrolit düzeyleri ve asit-baz dengesini düzenleyen ederken, kan filtreleme ve idrar oluşturarak bu işleri gerçekleştirir. Nefron denilen çok özel epitel tübülleri böbrek 1,2 temel fonksiyonel birim olarak hizmet vermektedir. Yetişkin omurgalılarda, nefron genellikle birçok tübülleri oldukça küçük organ haline paketi dolayısıyla izin veren bir merkezi drenaj sistemini çevreleyen sıkıca sarılmış bir düzende organize edilmektedir. Örneğin, her bir insan böbrek üstü 1.000.000 nefron 3 içerebilir. Fare gibi diğer memeliler böbrek başına 4 8-10 bin nefron sırasına sahip. Böbrek karmaşıklık derecesi, bu memeliler ve diğer vert arasındaki farklılıktoplam nefron sayısında varyasyonlar ve böbrek içindeki mimari düzeni nedeniyle ebrates. Pronephros, mezonefrostan ve metanephros: Omurgalı türlerin çok üç ardışık gelişim sırasında böbrek yapıları ve nefron bağış ve düzenleme ile ilgili artan karmaşıklık her bir form görüntüler oluştururlar. Muhafaza edilmesi son böbrek yapısı yetişkin böbreğinin organ tipik olarak bir ya da mesonephros metanephros 2 olarak hizmet vermektedir. Her bir böbrek şekilde, ancak, nefron bazlı kompozisyon 2&#39;ye sahiptir. Nefron böbrek beygir ve metaboliti salgısı ve reabsorption birlikte kan filtrasyon sorumludur. Nefron epitel hücrelerden oluşan basit tübüler yapılardır ve farklılaşmış epitellerinden ayrık, son derece uzmanlaşmış alanları belirli görevleri yerine hangi segmental bir örgüt daha var. Nefron boyunca süzülen madde akış için, tipik haliyle, üç büyük parçaları Compris ki oradaE her birim: (1) renal korpuskül, proksimal, orta ve distal segmentleri ile (2) bir borucuk, ve (3) bir toplama kanalı 1. Proksimal tübül organik çözücüler, özellikle glükoz ve amino asitlerin 1 geri emiliminin sorumludur. Ara tübül (veya Henle loop) tuz ve su Kural 1 önemli bir sitedir. Son olarak, tuz ve diğer iyonlarının ince ayar tübül içinde ve uzak toplama kanalında ortaya çıkar ve son derece endokrin sistemi 1 tarafından düzenlenir. Oradan, süzüntü sonuçta bir atık ürün 1 olarak vücuttan çıkan, üreter ve mesane üzerinden geçecek. Böbrek fonksiyon kaybı, normal nefron etkinliği önlemek nedenleri çok sayıda kaynaklanıyor olabilir. Bu nedenler böbrek gelişimi, örneğin, yaralanma farklı türde nefron 5 veya nedenleri sakat doğumlara yol konjenital defektler (genetik ve environme hem kaynaklanan sırasında oluşabilirntal kökenleri). Edinsel yaralanmalar geniş akut böbrek hasarı (ABH) veya kronik böbrek hasarı (KBH) olarak kategorize edilir. AKI genellikle iskemi veya toksin maruziyeti 6,7 kaynaklanan böbrek fonksiyonlarında ani bir kaybı içermektedir. Memelilerde, nefron epitel onarım tür yaralanmalarda 8 sonra mümkün olduğunu ve birçok kişi AKI sonra böbrek fonksiyonlarında tam restorasyon sergilerler. % 70 insidans aralığında 6,7 - Ancak, AKI geniş bir 30 arasında rapor edilmiştir, yüksek morbidite ve mortalite ile ilişkilidir. CKD, aksine, tipik olarak 8,9 fibroz ile bağlantılı uzun süreli hasar yıl kaynaklanan böbrek fonksiyon kaybı ile ilişkilidir. Ya bir diğer 10-12 bireyin yatkınlık gibi ayrıca bir etkileşimi, AKI ve KBH arasında var. Örneğin, AKI muzdarip olanlar CKD ve hatta ölüme 13 daha duyarlıdırlar. Böbrek hastalığı görülme sıklığı, ABD&#39;de hem de dünya genelinde, epide ulaşmıştırmikrofon oranlarda ve yaşlı nüfus böbrek 14,15 için rejeneratif tıp müdahaleleri tanımlamak için artan bir ihtiyaç vardır-bu nedenle genişledikçe artacağı tahmin edilmektedir. AKI hasta kurtarabilirsiniz bu bilgiye rağmen, uzun böbrek doğuştan rejeneratif güçlerine olmayan bir organ olduğu düşünülmektedir. Bu geleneksel görünümünü büyük ölçüde son yıllarda 16 olarak revize edilmiştir. AKI sonra farelerde ve sıçanlarda böbrek hasarı araştıran bir çalışma nefron tübül epitel hücrelerinin çoğalmasını ve fonksiyonel nefron 17-20 yeniden göstermiştir. Memeliler nefron yenilemek için bu adaptif bir yeteneğe sahip olmasına rağmen, böbrek fibrozis ve KBH 21 yol tetiklenebilir önemli sınırlamalar ve uyumsuz tepkiler vardır. Örneğin, yeni bir çalışma kemirgen nefron tekrarlanan epitel hücre ablasyon azalmış rejenerasyon ve hav böbrek fibroz-düşündüren nefron ile ilişkili olduğunu göstermiştiradet rejenerasyon eşik 22 sınırlıdır. Yetişkin memeli böbrek, kayıp ya da hasarlı olanları yerine yeni nefron oluşturan dolayısıyla imha kalıcı bir nefron açığı 8,9 yol açtığına dair kanıt yoktur. İlginçtir, bazı omurgalılar nefron epitelyaya yenileyici tarafından ve aynı zamanda yeni nefron üreterek AKI cevap yok, bir süreç neonephrogenesis veya nefron neojenezi 23 olarak anılacaktır. Neonephrogenesis toksin maruziyeti veya kısmi rezeksiyon sonrası balık oluşur ve yaralanma modelleri tarihsel olarak daha yakın akvaryum balığı 24,25, tilapia 26, paten 27, Medaka&#39;nın 28, ve, Zebra balığı 29,30 dahil ettik. Bunlardan, Zebra balığı böbrek rejenerasyon sorumlu hücresel ve moleküler yollar keşfetmek için uygun bir genetik araştırma modeli sağlar. Bu video makalede, biz yetişkin zebrabalıkları nefron segmentleri etiketlemek nasıl gösterilmektedir. Nefron anatomi, moleküler özellikleri Bilgi,ve fonksiyonel özellikleri zebrafish kullanarak başarılı bir gelecek böbrek çalışmalar için gereklidir. Yetişkin zebrabalıkları böbrek mezonefron yapıdır ve yetişkin memelilerin, kuşlar, sürüngenler 31 bulunan metanephros yapıdan daha nefron sayısında ve organizasyon açısından doğası gereği daha az karmaşıktır. Bununla birlikte, zebra balığı nefron kademeli bir kurum memelilere benzerdir ve birinci gen ekspresyon çalışmaları 31-35 göre embriyonik böbrek belgelenmiştir. Zebra balığı embriyo nefron proksimal kıvrık tübül (PCT) dahil lineer borucuk kesimleri, proksimal düz tübül (PST), distal erken (DE), ve distal geç (DL) 31-35 (Şekil 1) içerir. Zebra balığı yetişkin nefron benzer tüp şeklindeki segmentleri 30,31,36,37 (Şekil 1) sahip. PCT ayrıca fonksiyonel bir fenotip ile tanımlanabilir: PCT epitel hücreleri içinde mevcut floresan etiketli dekstran bileşikleri (boyut olarak 10-70 kDa) bir araya getirecekembriyonik böbrek ve yetişkin zebrabalıkları iki kullanılmıştır dolaşımı, bu proksimal tübül hücreleri 38-41 (Şekil 1) endositik alımını değerlendirmek. Zebra balığı ve memeliler arasında nefron segmentlerinden biri fark Zebra balığı bir ara tubule veya Henle 30-37 döngü yoksun olduğunu; Memelilerde bu segment fonksiyonları su tasarrufu için, ve zebra balığı kendi idrarı konsantre bir aciliyet olmadan bir tatlı su türü olduğundan, bu zebra balığı Bu segmenti 32,33 yoksun olması şaşırtıcı değildir. Bu nedenle, genel olarak, büyük ölçüde bileşimin nefron zebrabalıkları ve memeli böbrek 32,33 arasında muhafaza edilir. Bu benzerlikler gelişimsel nefrogenezisi 32-35,42 sırasında renal ifade edilen genlerin fonksiyonlarını incelemek ve bu şekilde olabilir, insan koşullarının önemli listesine ilave sayısız böbrek hastalıkları 43,44 modellemek için kullanılan bir araştırma aracı olarak zebrafish sağlamıştır kullanılarak incelenmiştirZebra balığı 45,46. Bugün, yetişkin zebrabalıkları böbrek nedeniyle genetik tractability ve bu türün gen fonksiyonu ve sinyal yolları sorgulamak için kullanılabilir teknolojik kaynakların genişleyen damak böbrek rejenerasyon karşılaştırmalı çalışmalar için cazip bir modeldir. Çeşitli çalışmalar AKI 29,30,37 sonra rejenerasyon mekanizmalarının araştırılması için Zebrafish mesonephrosun kullandık. Yetişkin zebrabalıkları böbrek kullanmaya devam AKI araştırma için, nefron işlevselliği ankete farklı nefron bölgeleri ve yöntemleri etiketlemek zarif yöntemler olması esastır. Yetişkin böbrek analizi için çeşitli yöntemler embriyonik böbrek protokollerden adapte edilmiştir. Yetişkin Zebrafish floresan işaretli dekstran enjekte edilmesi, zebra balığı embriyolarının 38-41 (Şekil 1) deki gibi, endositoz yoluyla 30 mezonefron nefron olarak PCT epitel etiketler. Bu yöntem, visualiz için kullanılmıştırproksimal tübüller restore fizyolojik fonksiyonu 30 (Şekil 1) bir değerlendirilmesini sağlar AKI, sonrasında kendi reabsorbing mülkünü geri e. Nefron proksimal tübül bir başka özelliği, bu alandaki epitel hücreleri, endojen alkalin fosfataz faaliyetinin yüksek seviyelerini gösteren bir fırça sınır 37 sahip olmasıdır. Bu nedenle, yakın epitel cin çarpmış (Enzimle İşaretlenmiş Floresans) olarak bilinen bir floresan-dayalı bir teknik kullanılarak 47 -97 yetişkin zebrabalıkları böbrekte görsel olarak tespit edilebilir. Burada, biz proksimal tübül fonksiyonel değerlendirmesini almak ve bu tübül segment boyutu ve konturları harita şekilde, yetişkin zebrabalıkları böbrekte floresan dekstran alımı tayinidir 30,48 gerçekleştirmek için nasıl açıklar. Sonra, fluoresan bir etiket alkalin fosfataz ile erişkin nefron proksimal tübül bölgelerini etiketlemek için teknikleri açıklar. Üçüncü olarak, ilk kez rhod gösterecekamin-etiketli lektin Dolichos memeli böbrek 49 toplama kanalları genel bir işaretleyici olarak kullanılmaktadır aglutinini (DBA), biflorus, yetişkin zebrabalıkları böbrek uzak tübül işaretler. DBA alkalin fosfataz boyama dışlayan olduğu gibi, bu etiketler geniş yetişkin zebrabalıkları nefronun pan-uzak menziller karşı pan-proksimal ayırt etmek için bir yol sağlar. Bütün montaj ve Kriyostaz histolojik bölümlerde hem de bu floresan lekeleri uygulanması boyunca, benzersiz her nefron segmenti tespit çözünen taşıyıcı genlerin ekspresyon alanları ile bu etiketleri ilişkilidir. Bu nedenle bu protokol de bizim embriyo DİLERİZ protokol 50 dayanan in situ hibridizasyon (DİLERİZ) analizlerinde yetişkin doku bütün montaj için modifiye doku işleme prosedürleri için bir rehber içerir. Bu prosedürler, O morfolojik ve fonksiyonel özelliklerini belge çeşitli kombinasyonlarda (Şekil 2) kullanılabilirf yetişkin zebrabalıkları böbrek nefron. Böylece, bu protokol yenileme çalışmaları, diğer renal hastalık modelleri içinde fenotipik karakterizasyonu uygulanabilir ve hatta yetişkin böbreğinin oluşumunu çalışmak için kullanılır.

<table><tbody><tr><td>1X PBS</td><td>10 X PBS'nin</td><td></td><td></td> damıtılmış suda seyreltilmesiyle yapılır.</tr><tr><td>1 X PBS'de 1X PBST</td><td></td><td></td><td>% 0.1 Tween-20 deterjan.</td></tr><tr><td>1 X PBS'de %0,05 Tween</td><td></td><td></td><td>, %0,05 Tween-20 deterjanlı 1X PBS.</td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Amerikan Biyoanalitik</td><td>AB02038</td><td></td></tr><tr><td>%4 PFA/1X PBS</td><td></td><td></td><td>%4 PFA'yı (w/v) (Elektron Mikroskobu Bilimleri, Cat # 19210) 1 X PBS'de çözün, çeker ocakta sıcak bir plaka üzerinde kaynatın. Kullanmadan hemen önce çözdürün ve stokları tekrar dondurmayın.</td></tr><tr><td>İnce Forseps</td><td>Roboz</td><td>RS-1050</td><td>Dumont Cımbız Deseni #55&nbsp;</td></tr><tr><td>Cam kaydırak</td><td>Thermo-Fisher</td><td>4445</td><td>Beyaz Frost&nbsp;</td></tr><tr><td>Cam lamel</td><td>Thermo-Fisher</td><td>12-540A</td><td>18 x 18 mm</td></tr><tr><td>Modelleme kili</td><td>Hasbro</td><td>Playdoh</td><td>Diğer modelleme killeri ikame edilebilir ve benzer şekilde çalışabilir</td></tr><tr><td>Sürgülü tutucu</td><td>Thermo-Fisher</td><td>12-587</td><td>İsteğe bağlı: slaytları düz saklamak için karton tepsi</td></tr><tr><td>Ağartma çözeltisi</td><td></td><td></td><td>Çamaşır suyu karışım formülü (20 ml'lik bir çözelti için): 1.6 ml %10 Potasyum hidroksit çözeltisi 0.6 ml %30 Hidrojen peroksit çözeltisi 100 &mu; l% 20 Ara Damıtılmış su ile 20 ml'ye doldurun</td></tr><tr><td>Potasyum hidroksit</td><td>Sigma</td><td>221473</td><td></td></tr><tr><td>Hidrojen peroksit</td><td>Sigma</td><td>H1009</td><td></td></tr><tr><td>Engelleme çözeltisi Engelleme Çözeltisi</td><td></td><td></td><td>(10 ml'lik bir çözelti için): % 0.05 Ara 2 ml fetal buzağı serumu 150 & ile 8 ml 1X PBS; l DMSO</td></tr><tr><td>Alkalin fosfataz aktivitesi tespiti</td><td>Invitrogen</td><td>E6601</td><td>ELF 97 Endojen Fosfataz Tespit Kitini kullanıyoruz. Çalışan substrat çözeltisini hazırlamak için, üreticinin talimatlarına göre substratı algılama tamponunda 20 kat seyreltin.</td></tr><tr><td>Alkalin fosfataz yıkama çözeltisi</td><td></td><td></td><td>Yıkama Tamponu Çözeltisi Tarifi (100 ml'lik bir çözelti için): 5 ml 0.5 M EDTA 120 mg Levamisole 95 ml 1X PBS</td></tr><tr><td>Dekstran, floresein, 40.000 MW</td><td>Invitrogen</td><td>D1844</td><td>50 mg / ml stok çözeltisi yapmak için damıtılmış su ile seyreltin, ve alikotları dondurucuda -20 ° C'de saklayın.</td></tr><tr><td>Dekstran, kaskad mavisi, 10.000 MW</td><td>Invitrogen</td><td>D1976</td><td>50 mg / ml'lik bir stok çözeltisi yapmak için damıtılmış su ile seyreltin ve alikotları dondurucuda -20 ° C'de saklayın.</td></tr><tr><td>Dekstran, lucifer sarısı, 10.000 MW</td><td>Invitrogen</td><td>D1825</td><td>50 mg / ml stok çözeltisi yapmak için damıtılmış su ile seyreltin ve alikotları dondurucuda -20 ° C'de saklayın.</td></tr><tr><td>Dekstran, tetrametilrodamin (floro-yakut), 10.000 MW</td><td>Invitrogen</td><td>D1817</td><td>50 mg / ml'lik bir stok çözeltisi yapmak için damıtılmış su ile seyreltin ve alikotları dondurucuda -20 ° C'de saklayın.</td></tr><tr><td>Dolichos biflorus aglütininin (DBA)-rodamin</td><td>Vektör laboratuvarları</td><td>RL-10-32</td><td>DBA Boyama Çözeltisi (100 & mu için; l çözüm): 1 &mu; l DBA 99 &mu; l of 1X PBS</td></tr><tr><td>Propidium iyodür</td><td>İnvitrogen</td><td>E6601</td><td></td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Invitrogen</td><td>P1304MP</td><td></td></tr><tr><td>Vectashield sert set montaj ortamı</td><td>Vektör laboratuvarları</td><td>H-1400</td><td></td></tr><tr><td>Mikro kapak camı</td><td>VWR</td><td>48393081</td><td></td></tr><tr><td>Dimetil sülfoksit, DMSO</td><td>Amerikan Biyoanalitik</td><td>67-68-5</td><td></td></tr><tr><td>Sükroz</td><td>Sigma</td><td>S0289</td><td></td></tr><tr><td>EDTA, 0.5 M çözelti, pH 8.0</td><td>Amerikan Biyoanalitik</td><td>AB00502</td><td></td></tr><tr><td>Levamisol</td><td>Sigma</td><td>L-9756</td><td></td></tr><tr><td>Doku dondurma ortamı</td><td>Triangle Biomedical Sciences, Inc.</td><td>TFM-C</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-Tek Kriyomold Biyopsisi, 10 x 10x 5 mm</td><td>Sakura Finetek</td><td>4565</td><td></td></tr><tr><td>TruBond 380 yapıştırıcı mikroskop slaytları</td><td>Tru Scientific</td><td>0380W</td><td></td></tr><tr><td>Sıvı engelleyici ve süper PAP kalemi</td><td>Elektron Mikroskobu Bilimleri</td><td>71312</td><td></td></tr><tr><td>İmmüno leke nem odası</td><td>Evergreen Scientific</td><td>240-9020-Z10</td><td></td></tr><tr><td>Kriyostat</td><td>Therm</td><td>Microm & Trade; HM 525 Kriyostat</td><td></td></tr><tr><td>Stereomikroskop</td><td>Nikon</td><td>SMZ645; SMZ1000; 83455 P-Mavi GFP/DAPI; 83457 P-Bağış GFP/FITC; Kullanılan 83457 P-TRITC</td><td>Filtre seti şu şekildeydi: DAPI, propidyum iyodür, dekstran-kaskad mavisi ve alkalin fosfataz tespiti için Hoechst/DAPI filtresi kullanıldı. GFP/FITC filtresi, dekstran-FITC, dekstran lusifer sarısı ve anti-GFP tespiti için kullanıldı. TRITC filtresi, dekstran-floro-yakut, PI ve DBA tespiti için kullanıldı.</td></tr><tr><td>Bileşik mikroskop</td><td>Nikon</td><td>96310 C-FL UV-2E/C DAPI; 96311 C-FL B-2E/C FITC; 96313 C-FL Y-2E/C Kullanılan Texas Kırmızı Filtre</td><td>seti aşağıdaki gibidir: DAPI, propidyum iyodür, dekstran-kaskad mavisi ve alkalin fosfataz tespiti için Hoechst/DAPI filtresi kullanıldı. GFP/FITC filtresi, dekstran-FITC, dekstran lusifer sarısı ve anti-GFP tespiti için kullanıldı. Texas Red filtresi, dekstran-floro-yakut, PI ve DBA tespiti için kullanıldı. &nbsp;</td></tr></tbody></table>

yetişkin zebra balığı böbrek nefron kompozisyon ve fonksiyon analizi

Analysis of Nephron Composition and Function in the Adult Zebrafish Kidney

Zebra balığı modeli böbrek geliştirme, yenilenme ve hastalığı incelemek için ilgili sistem olarak ortaya çıkmıştır. Hem embriyonik ve yetişkin zebrabalıkları böbrekler yüksek omurgalıların memeliler dahil olmak üzere diğer ile muhafaza edilmektedir nefron olarak bilinen bir işlevsel birimler oluşmaktadır. Zebra balığı Araştırma zamanlarda yetişkin nefron hasar meydana sonra iki farklı fenomen sızmak olduğunu göstermiştir: Birincisi, tahrip tübül epitel hücreleri yerine mevcut nefron içinde sağlam yenilenmesi vardır; ikinci olarak, tamamen yeni nefron neonephrogenesis olarak bilinen bir süreç böbrek öncü hücrelerden üretilmektedir. Bunun aksine, insan ve diğer memeliler nefron epitelyal rejenerasyon için sadece sınırlı bir yeteneği var gibi görünmektedir. Bugüne kadar, bu böbrek rejenerasyon olayların sorumlu mekanizmalar anladım kötü kalır. Yetişkin zebrabalıkları böbrekler hem nefron epitel rejenerasyonu ve neonephrogenesis uğradığından, onlar olağanüstü bir deneysel bıraktı sağlamakBu olayları incelemek digm. Ayrıca, böbrek rejenerasyon düzenleyen hücresel ve moleküler mekanizmaları tanımlamak için kullanılabilir Zebra balığı modelinde mevcut genetik ve farmakolojik araçlar geniş bir yelpazesi var. Bu tür bir araştırma önemli yönü nefron yapısı ve fonksiyonu değerlendirilmesidir. Bu protokol, yetişkin zebrabalıkları böbrek, böbrek ve test bileşimi nefron özelliğe ölçmek için kullanılabilir etiketleme teknikleri yer verilmiştir. Bu durumda, bu yöntemler arasında, ancak bunlarla kısıtlı değildir yetişkin zebrabalıkları böbrek yetmezliği paradigmaların, nephrotoxicant maruz rejimler veya nitroredüktaz aracılı hücre ablasyon tekniği olarak hedef hücre ölümü genetik yöntemler ileride fenotipik nitelendirilmesi için geniş çapta uygulanabilir. Dahası, bu yöntemler, yetişkin böbrek oluşumunda genetik pertübasyonları incelemek için kullanılabilir ve aynı zamanda kronik hastalık modelleme boyunca renal durumunu değerlendirmek için uygulanabilir.

Zebra balığı yetişkin böbrek böbrek yenilenmesi ve hastalık çalışmalar için mükemmel bir sistemdir. Böyle bir araştırmanın önemli bir yönü nefron yapısı ve fonksiyonu değerlendirmesidir. Bu protokol nefron borucuk kompozisyonunun ve böbrek geri emiliminin değerlendirilmesi için uygulanabilecek çeşitli yöntemler anlatılmaktadır.

Yetişkin Zebra balığı Böbrek Nefron Kompozisyon ve Fonksiyon Analizi

The zebrafish model has emerged as a relevant system to study kidney development, regeneration and disease. Both the embryonic and adult zebrafish kidneys ...

Aşağıdaki deneyin genel amacı, yetişkin zebra balığı böbreğindeki nefron segment bileşimini ve işlevselliğini değerlendirmektir. Bu, önce floresan etiketli dekstrinin zebra balıklarını bağlayan bir yuvaya enjekte edilmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adım, sonraki etiketleme yöntemlerine doku hazırlamak için böbreğin çıkarılması ve sabitlenmesidir.Daha sonra, pigmentasyonu gidermek için böbrek ağartılır ve daha sonra istenen nefron segmentlerini floresan olarak etiketlemek için boyanır. Sonuçlar, seçilen leke veya lekelere dayalı olarak böbrek anatomisinin görselleştirilmesini sağlayan immünofloresan, mikroskopi ve/veya parlak alan görüntüleme kullanılarak elde edilir. Aşağıdaki etiketleme yöntemleri, organ anatomisi ile ilgili böbrek alanındaki temel soruları yanıtlamaya yardımcı olabilir ve nefron bileşimini incelemek ve bir yaralanma olayından önce ve sonra böbrek işlevselliğini değerlendirmek için kullanılabilir.Bu tekniklerin etkileri, yetişkin böbrek oluşumundaki genetik anomalilerin incelenmesine kadar uzanır ve ayrıca kronik hastalık modellemesi sırasında böbrek durumunu değerlendirmek için de uygulanabilir. Başlamak için, çözeltiyi anestezi uygulanmış bir balıktan boşaltın ve hayvanı dikkatlice ıslak bir sünger kalıbın ventral tarafına yerleştirin. Daha sonra, bir insülin şırıngasını 20 mikrolitre çözülme dekstrin stok çözeltisi ile doldurun.İğneyi, yerleştirme karnın ventral orta hattında sığ bir açıyla gerçekleşecek şekilde yerleştirin. Organları hafifçe enjekte etmekten kaçınmak için, vücut duvarını kaldırmak ve çözeltiyi enjekte etmek için bir alan oluşturmak için enjeksiyondan hemen sonra iğneyi kaldırın. Enjeksiyondan sonra, anesteziden kurtulmak için balığı yavaşça tanka geri koyun.Başlamak için, anestezi uygulanmış bir balıktan herhangi bir fazla solüsyonu boşaltın ve bir kağıt mendil veya kağıt havlu üzerine koyun. Baş ve iç organları çıkardıktan sonra, vücut duvarlarını açmak için süper ince diseksiyon iğneleri kullanın. Hayvanın sırt duvarına yapışık olan böbrek organını bulun.Böbreği sırt duvarından ayırmak için ince forseps kullanın. Böbreği nazikçe bir XPBS içeren beş mililitrelik bir cam şişeye yerleştirin ve her biri beş dakika boyunca üç kez yıkayın. Böbreği bir transfer pipeti ile çıkarın ve temiz bir cam üzerine yerleştirin Bir ila iki damla bir XPBS ile kaydırın.Böbreği slayt üzerinde düzleştirmek için ince forseps kullanın, hiçbir dokunun kıvrılmadığından veya başka bir şekilde kendi üzerine devrilmediğinden emin olun. Böbreğin düz konumlandırılmasını kolaylaştırmak için bağ dokusunda küçük kesiler yapmak için bir tungsten tel aleti kullanılabilir. Ardından, 18 x 18 milimetrelik bir cam kapak kaymasının her bir köşesine küçük modelleme kili parçaları yerleştirin.Kapak kızağını hafif bir açı tutarak yavaşça böbreğin üzerine yerleştirin. Hava kabarcıklarının sıkışmasını en aza indirmek için, gerekirse kapak kayma ve sürgü arasındaki boşluğu doldurmak için bir XPBS daha ekleyin. Ayrı bir zebra balığı grubu ötenazi yapılır ve gece boyunca fiksatif içine batırılır.Hazır olduğunda, böbreği sırt vücut duvarından dikkatlice ayırmak için ince forseps kullanın ve organı bir cam şişeye yerleştirin. Diseke edilmiş böbreği üç ila beş mililitre bir XPBS ile her biri beş dakika boyunca% 0.05 ile üç kez yıkayın. Daha sonra, PBS solüsyonunu çıkarın ve böbreği 30 dakika boyunca üç mililitre% 5 sükroz solüsyonu ile durulayın.Bu süreden sonra, çözeltiyi üç mililitre% 30 sükroz ile değiştirin ve ertesi gün gece boyunca dört santigrat derecede saklayın. Solüsyonu çıkarın ve üç ila beş mililitre ağartma solüsyonu eklemeden önce böbreği iki kez yıkayın. Böbrek organında bulunan melanosit pigmentasyonunu gidermek için, cam şişeyi bir döndürücüye yerleştirin ve pigmentasyonun kaybolmasını dikkatlice izleyin.Depigmentasyon tipik olarak yaklaşık 20 dakika sürer, ancak bazen 60 dakika kadar sürebilir. Ağartma solüsyonu çok uzun süre açık bırakılırsa, parçalanma meydana gelebilir ve bu nedenle, pigmentasyon böbrek yıkamasından iki kez çıkarıldığında bütünlüğü kontrol etmek için numunenin her 10 ila 15 dakikada bir izlenmesi ve oda sıcaklığında bir saat boyunca %4 PFA solüsyonu ile inkübe edilmesi önerilir. Daha sonra,% 4 PFA çözeltisini çıkarın ve son yıkamadan sonra böbreği üç ila beş mililitre bloke edici solüsyonda üç kez yıkayın ve böbreği oda sıcaklığında iki saat inkübe edin.Engelleme tamamlandığında, doğrudan seçilen boyama protokolüne geçin. Bloke edici solüsyonu çıkarın ve böbreğin en az 10 dakika boyunca bir XPBS'de ıslanmasına izin vermeden önce böbreği üç kez yıkayın. Bu süre zarfında, böbreği 12 kuyulu veya 24 oyuklu bir kültür kabına aktarın.Numuneyi kaplamak için bir XPBS'yi yeterli çalışan alkalin fosfataz substrat çözeltisi ile değiştirin ve numuneyi oda sıcaklığında 30 dakika boyunca bir döndürücüye yerleştirin. Bu süreden sonra, böbreği alkalin fosfataz yıkama tampon çözeltisinde yıkayarak reaksiyonu durdurun. Böbreği 10 ila 15 dakika boyunca üç kez yıkama tamponu çözeltisi ile durulayın.Ardından, yıkama tamponu solüsyonunu çıkarın ve böbreği temiz bir bardağa monte edin. Etiketleme kitinde bulunan fosfataz montaj ortamını kaydırın. Alkalen fosfataz lekeli böbreği bir stereo mikroskop veya Debbie filtre setine bağlı bileşik mikroskop kullanarak görselleştirin.İlk olarak, DBA'yı bir XPBS'de seyrelterek 200 mikrolitrelik bir çalışma DBA çözeltisi hazırlayın. PBS çözeltisini 200 mikrolitre DBA çözeltisi ile değiştirin ve numuneyi oda sıcaklığında bir saat boyunca bir döndürücüye yerleştirin. Bu süreden sonra, DBA çözeltisini çıkarın ve böbreği her biri beş dakika boyunca üç ila beş mililitre bir XPBS ile üç kez yıkayın.Bir XPBS'yi çıkarın ve böbreği temiz bir cam kızak üzerine monte edin. Daha önce gösterildiği gibi, bir floresan stereo mikroskop veya bileşik mikroskop üzerinde standart bir Trixie veya Texas kırmızı filtre seti kullanarak böbreğin DBA lekeli distal segmentlerini görselleştirin. Ağartılmamış bir böbreğin bu parlak alan görüntüsünde, siyah pigmentasyon dağınık melanosit popülasyonuna karşılık gelir.Burada nefron PCT segmentleri dekstrin enjeksiyonundan üç gün sonra görüntülendi. İç kısım, melanositli tek bir nefronun görüntüsünü içerir. Bu görüntü, melanosit pigmentasyonunun çıkarılmasından sonra yetişkin bir böbreği göstermektedir.Bu temsili görüntüler, PCT segmentleri arasındaki hafif morfolojik varyasyonları gösterirken, birçok nefron PCT sıkıca sarılmıştır. Diğer nefronlar, minimum sarmal dekstrin kaskad mavisi dekstrin, Lucifer sarısı ve Dekstrin floro Yakut'a sahip PCT bölgelerini içerir, hem dekstrin Cascade Blue hem de Lucifer Yellow, Lucifer sarı ile tedavi edilen böbreklerde gözlenen çok daha yüksek arka plana sahip bazı spesifik olmayan etiketleme gösterir. Buna karşılık, dekstrin floro Ruby, yoğun PCT etiketlemesi ile önemli ölçüde azaltılmış arka plan gösterdi.PCT taşıyıcı hücre tipinin spesifik bir belirtecini tespit etmek isteyerek boyanan yetişkin bir böbrek, çeşitli sıkıca sarılmış ilmekli PCT alanlarının bir dağılımı ile dekstrin alımının karakteristik bir ekspresyon paterni ve ayrıca tutarlı bir geniş çap gösteren daha uzun PCT uzantıları gösterir. Bu videoyu izledikten sonra, yetişkin zebra balığı böbreğindeki nefron segmentlerini, örneğin alkalin fosfatazlı proksimal tübül ve DBA'lı tıbbi distal tübül gibi nasıl başarılı bir şekilde etiketleyeceğinizi iyi anlamış olmalısınız. %4 paraldehit ile çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve bu işlemi gerçekleştirirken her zaman mont, eldiven ve gözlük gibi önlemlerin alınması gerektiğini unutmayın.

analysis-nephron-composition-function-adult-zebrafish

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu protokol, yetişkin zebrafish organların tanımlanması ve diseksiyon için bir prosedür açıklanmıştır.

Yetişkin Zebra balığı Organları diseksiyonu

Zebrafish böbrek, her iki böbrek ve hematopoetik yetişkin kök / progenitör hücrelerin ev ve bu omurgalı bir model organizmadaki hücre tipleri ve onların soyu incelemek için olağanüstü bir fırsat teşkil etmektedir. Burada, yetişkin zebrafish böbrek hücre izolasyonu, nakli, böbrek ve / veya kan hücre popülasyonlarının ifade çalışmaları gibi uygulamalar için de kullanılabilir belirlemek ve cerrahi kaldırmak için araştırmacı sağlayan ayrıntılı bir diseksiyon prosedürü göstermektedir.

Yetişkin Zebra balığı Böbrek diseksiyonu

Insanlarda akut böbrek hasarı (AKI), böbrek nefron oluşturan epitel hücrelerin zarar görmesine neden olduğu yaygın bir klinik sorundur ve AKI, yüksek ölüm oranları% 50-70 ile...

Zebra balığı Pronephros Lazer Ablasyon Böbrek Epitel Rejenerasyon Eğitim

Bu video, yetişkin zebra balığı böbreğinin düz bir montajının diseksiyonunu ve hazırlanışını göstermektedir. Hazırlanan düz montaj, numune analizi için mikroskop altında görselleştirilebilir.

Böbrek Düz Montaj Hazırlığı: Yetişkin Zebra Balığı Böbreğinin Mikroskobik Analizi için Düz Bir Montajın İncelenmesi ve Hazırlanması Prosedürü

Bu videoda, yetişkin zebra balığı böbreğinin depigmentasyonunu ve ardından boyama prosedürleri için hazırlanmasını gösteriyoruz. Boyama sonrası, yetişkin zebra balığı böbreği, böbrek rejenerasyonu, böbrek hastalığı modellerinin fenotipik karakterizasyonu ve nefron işlevselliği için kullanılabilir.

Zebra Balığı Böbreğinin Depigmentasyonu ve Prestainasyonu: Yetişkin Zebra Balığı Böbreğini Boyamaya Hazırlama Tekniği

Burada, gentamisin enjeksiyonu ile akut böbrek hasarını indükleyerek erişkin böbrek rejenerasyonunu incelemek için güvenilir bir yöntem sunuyoruz. Yaralanmanın gentamisin dozajına ve çevre sıcaklığına bağlı olduğunu, lhx1a+'yı etiketlemek için yerinde hibridizasyon kullanarak, yeni nefronlar geliştirdiğini gösterdik.

Gentamisin Kaynaklı Sakatlık tarafından Yetişkin Zebra balığı Böbrek Rejenerasyon

Zebra balığı, kronik böbrek hastalığı (KBH) modellemek için popüler bir araçtır. Ancak, kendi küçük boyutu imkansız geleneksel yöntemlerle böbrek fonksiyonlarını değerlendirmek için yapar. Biz CKD zebrafish böbrek fonksiyonunun kantitatif analiz sağlayan bir floresan boya böbrek boşluk tahlil 1 açıklar.

Bir Floresan Gümrükleme Testi kullanarak Zebra balığı Böbrek Fonksiyon Değerlendirilmesi

Burada anlatılan yöntemi fokal ve düzlemsel kaymasını düzeltmek için optik bölümlendirilmeleri ve güçlük basit stratejileri yürütebilecek diseksiyon mikroskobu bir floresan kullanılarak Zebra balığı embriyolarının organ gelişiminin time-lapse analiz sağlar.

diseksiyon mikroskobu kullanılarak Time-lapse Görüntüleme ile Zebra balığı Böbrek Kalkınma Analizi Optik Kesit için donatılmış

kemoterapötik antibiyotik arasında değişen ilaçlar yer alır nephrotoxins, kaynaklanacak böbrek yaralanmaları, kimin patogenezi tam olarak anlaşılamamıştır karmaşık bozuklukları oluşabilir. Bu protokol, zebra balığı böbrek koruyucu önlemlerin tanımlanması için uygulanabilir, bu koşullar, hastalık modelleme için nasıl kullanılabileceğini göstermektedir.

Zebra balığı Nephrotoxin Mikroenjeksiyon Akut Böbrek Yaralanması Model

Bu protokol, cisplatin'i nefrotoksik ajan olarak kullanarak yetişkin zebra balıklarında Akut Böbrek Yaralanmasına (AKI) neden olacak prosedürleri açıklar. Renal dokuda inflamasyon ve hücre ölümünü analiz etmek için tekniğin tekrarlanabilirliğini ve iki tekniği değerlendirme adımlarını, akış sitometrisini ve TUNEL'i ayrıntılı olarak detaylandırdık.

Yetişkin Zebra Balıklarında Cisplatin tarafından İndüklenen Akut Böbrek Yaralanması Modeli

Zebra balığı böbrek gelişimini anlamak için önemli bir modeldir. Burada, mezonephros gelişimi sırasında zebra balığı larvalarında ve yavrularda gen ekspresyonunu tespit etmek için bir in situ melezleme protokolü optimize edilmiştir.

In Situ Mesonephros Gelişimi Sırasında Zebra Balığı Larvaları ve Yavrularında Melezleme

Keşfedin yetişkin zebra balığı böbreğinde nefron segment kompozisyonu ve fonksiyon analizi yöntemlerini. Floresan boyama ve mikroskopi teknikleriyle böbrek anatomisi görselleştirilir.

Yetişkin Zebra balığı Böbrek Nefron Kompozisyon ve Fonksiyon Analizi

Daha fazla video keşfet