Name: 3D Sfero Üretim için bir Verimli ve esnek Hücre Toplama Yöntemi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-03-27T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 46 s
Description: Öğrenin, metilselüloz matrisi kullanarak hücre toplanmasıyla 3D sferoid üretimini. Bu yöntem, hücre göçü ve invazyon çalışmaları için hızlı izolasyon sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, Queen's Üniversitesi Biyomedikal Görüntüleme Merkezi'nden M. Gordon'a yardımı için teşekkür eder. Bu çalışma, Kanada Kanser Araştırmaları Derneği (19439) ve Kanada Sağlık Araştırmaları Enstitüleri (MOP-142303) (LMM) ve Ontario Yüksek Lisans Bursları ve Terry Fox Araştırma Enstitüsü Transdisipliner Kanser Araştırmaları Eğitim Programı'ndan (SMM, EYL) ve Craig Jürisi Yaz Öğrenciliği (SMM) tarafından desteklenmiştir.

<ol><li>Zimmermann, M., Box, C., Eccles, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-dimensional+vs.+three-dimensional+in+vitro+tumor+migration+and+invasion+assays%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Two-dimensional vs. three-dimensional in vitro tumor migration and invasion assays.</a> Methods Mol Biol. 986 (986), 227-252 (2013).</li>
<li>Albini, A., Noonan, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+%27chemoinvasion%27+assay%2C+25+years+and+still+going+strong%3A+the+use+of+reconstituted+basement+membranes+to+study+cell+invasion+and+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The 'chemoinvasion' assay, 25 years and still going strong: the use of reconstituted basement membranes to study cell invasion and angiogenesis.</a> Curr Opin Cell Biol. 22 (5), 677-689 (2010).</li>
<li>Pampaloni, F., Reynaud, E. G., Stelzer, E. H. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+third+dimension+bridges+the+gap+between+cell+culture+and+live+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Mol.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">The third dimension bridges the gap between cell culture and live tissue.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 8 (10), 839-845 (2007).</li>
<li>Fennema, E., Rivron, N., Rouwkema, J., van Blitterswijk, C., de Boer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spheroid+culture+as+a+tool+for+creating+3D+complex+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Spheroid culture as a tool for creating 3D complex tissues.</a> Trends Biotechnol. 31 (2), 108-115 (2013).</li>
<li>Carletti, E., Motta, A., Migliaresi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scaffolds+for+tissue+engineering+and+3D+cell+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Scaffolds for tissue engineering and 3D cell culture.</a> Methods Mol Biol. 695, 17-39 (2011).</li>
<li>Foty, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+hanging+drop+cell+culture+protocol+for+generation+of+3D+spheroids%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A simple hanging drop cell culture protocol for generation of 3D spheroids.</a> J Vis Exp. (51), (2011).</li>
<li>Handschel, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prospects+of+micromass+culture+technology+in+tissue+engineering%5BTitle%5D)+AND+%22Head+Face+Med%22%5BJournal%5D)">Prospects of micromass culture technology in tissue engineering.</a> Head Face Med. 3, 4(2007).</li>
<li>Stuckhoff, A. P., DelValle, L. <a target="_blank" href="http://www.springer.com/us/book/9781627036399">Neuronal Cell Culture Methods and Protocols Vol. 1078 Methods in Molecular Biology</a>. Amini, S., White, M. K. 1078, Humana Press. 119-132 (2013).</li>
<li>Stewart, G. J., Wang, Y., Niewiarowski, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methylcellulose+protects+the+ability+of+anchorage-dependent+cells+to+adhere+following+isolation+and+holding+in+suspension%5BTitle%5D)+AND+%22Biotechniques%22%5BJournal%5D)">Methylcellulose protects the ability of anchorage-dependent cells to adhere following isolation and holding in suspension.</a> Biotechniques. 19 (4), 598-604 (1995).</li>
<li>Vinci, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+establishment+and+analysis+of+three-dimensional+tumor+spheroid-based+functional+assays+for+target+validation+and+drug+evaluation%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Biol%22%5BJournal%5D)">Advances in establishment and analysis of three-dimensional tumor spheroid-based functional assays for target validation and drug evaluation.</a> BMC Biol. 10, 29(2012).</li>
<li>Nagelkerke, A., Bussink, J., Sweep, F. C. G. J., Span, P. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+multicellular+tumor+spheroids+of+breast+cancer+cells%3A+How+to+go+three-dimensional%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Generation of multicellular tumor spheroids of breast cancer cells: How to go three-dimensional.</a> Anal. Biochem. 437 (1), 17-19 (2013).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yoktur.

Biz ucuz ve yaygın olarak kullanılan reaktifler kullanılarak in vivo dokuların mimarisi model 3D hücre parçacıklarının üretilmesi için hızlı ve esnek bir yöntem mevcut. Bizim protokol MC 8, 9 sitotoksik olmayan yapışkanlık arttırıcı özellikleri hücre toplama aracılık etmek ve hücre tekli-tabakası oluşumunu en aza indirmek için patlatır. hayvansal kaynaklardan izole edilmiş protein bazlı matrisler farklı olarak, MC, inert olan herhangi bir büyüme faktörl...

Tümör hücre davranışı biyolojik ilgili değerlendirme bu yeterli in vivo bulundu hücre mikro yansıtmaz, çünkü kısmen, geleneksel iki boyutlu (2D) hücre kültür yöntemleri kullanılarak meydan okuyor. Kültür (ör Boyden Chamber tahlilleri) halinde hücre dışı matris bileşenleri içeren alternatif yaklaşımlar, in vivo doku ortamının daha fazla fizyolojik olarak temsilidir. Bununla birlikte, tek tek hücre davranışının değerlendirilmesi ile sınırlı olabilir ve doku ya da tümör büyümesi 1, 2, 3 katkıda hücre-matris ve hücre-hücre etkileşimleri in vivo kombinasyonlarında karmaşık özetlemek yoktur. Çok hücreli sferoidler kullanımı, daha doğru in vivo hücre büyümesi 1 kompakt mimarisini yeniden üreten bir son yaklaşımdır4. Sferoidler normal hücrelerin hücre-matris etkileşimlerini incelemek için kullanılabilir, aynı zamanda bu tür metastatik büyüme ya da ilaç direnci 4 tümör progresyonu özelliklerini modeli tümör analogları olarak hareket edebilir. Sferoidler bir matris 5 veya daha hızlı bir şekilde yerleştirilmiş tek hücre çoğalması ile oluşturulabilir, birden fazla hücre toplanmasını teşvik ederek, tek bir hücre kümesi (örneğin, asılı damla, santrifüj yöntemleri) 6, 7 oluşturulur. Mevcut hücre toplama teknikleri pahalı malzeme veya özel ekipman gerekebilir. Buna ek olarak, bu sferoidler boyutları ve morfolojileri geniş bir yelpazede ve büyüme koşulları ya da zor tedaviler arasındaki karşılaştırmalar, büyük miktarlarda üretilmesi için zor olabilir. Son olarak, bu yöntem tarafından üretilen sferoidler proteinli ekstrasellüler izole etmek zor olabilirlular matrisi içinde diğer uygulamalarda kullanılmak üzere yerleştirilmiştir. Burada, ticari olarak temin edilebilen U tabanlı hücre itici plakalar ve bir atıl yapışkanlık arttırıcı matrisi, metil selüloz ile tutarlı bir şekilde boyutlandırılmış, hücre parçacıklarının hızlı oluşumu için sağlam ve kolayca değiştirilebilir hücresi agregasyonu yöntemler tarifedilmiştir. Oluştuktan sonra, bu çok hücreli küreler kolaylıkla geniş bir uygulama aralığında kullanım için izole edilir. Protokol de kolayca diğer hücre süreçleri değerlendirmek için kullanılabilir hücre çoğalması ile parçacıklarının üretilmesi için uyarlanmıştır. Burada, bu iki farklı küremsi oluşumu protokoller, örneğin uygulamaları immünofloresan boyama ile miktarı, hücre istilası deneyleri, bir anoikis deneyi göstermektedir.

<table><tbody><tr><td><güçlü > Tamponlar< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10x Fosfat tamponlu tuzlu su</td><td>Thermo Fisher Scientific&nbsp;</td><td>AM9625</td><td></td></tr><tr><td>Kalsiyum Klorür Çözeltisi</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>21114</td><td>PBS+ yıkama tamponu için kullanılır; Kalsiyum klorür ilavesi üzerine PBS+ yıkama tamponunu otoklavlamayın</td></tr><tr>PBS+ yıkama tamponu için kullanılan<td>Magnezyum Klorür Çözeltisi</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M1028</td><td>; Magnezyum klorür ilavesi üzerine PBS+ yıkama tamponunu otoklavlamayın</td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>Katalog numarası</td><td>Yorumlar</td></tr><tr><td>Küresel Oluşum İçin</güçlü></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>96 kuyulu U-dipli Hücre İtici Plaka</td><td>Greiner Bio-One</td><td>650970</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco'nun Modifiye Edilmiş Eagle's Medium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D5546</td><td>SH-SY5Y, PANC-1, TPC-1 hücre hatlarını kültürlemek için</td></tr><tr><td>F12K Orta</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>2112722</td><td>TT hücre hattını kültürlemek için</td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F1051</td><td>Partikül kirleticileri gidermek için kullanmadan önce</td></tr><tr><td>filtre Metil selüloz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M7027</td><td>100 mg / mL'ye kadar suda hazırlayın</td></tr><tr><td>Roswell Park Memorial Institute Medium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R8758</td><td>HCT-116, BxPC-3 hücre hatlarını kültürlemek için</td></tr><tr><td>TrypLE Express</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12605028</td><td>Ayrışma</td></tr> <tr><td>tamponuName</strong</td><td>>Company</td><td>Katalog numarası</td><td><güçlü > Yorumlar< / güçlü > <</td></tr> <tr><td>güçlü > İstilacı Testi için< / güçlü ></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>Sığır Tip I Kollajen</td><td>Corning Incorporated</td><td>354231</td><td>Stok 3.1 mg / mL; Kullanım sırasında buz üzerinde bakım yapın</td></tr><tr><td>DMEM Fenol Kırmızı İçermeyen Düşük Glikoz&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11054-20</td><td>Fenol Kırmızısı takviyeli ortama kıyasla daha az arka plan floresansı</td></tr><tr><td>Glial Hücre Hattı Türetilmiş Nörotrofik Faktör</td><td>Peprotech</td><td>450-10</td><td>Kemoatraktan</td></tr><tr><td>Name<</td><td>strong>Company</td><td>Katalog numarası</td><td>Yorumlar</td></tr><tr><td><güçlü>İmmünofloresan Mikroskobu için</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>#1.5 Coverglass Elektron</td><td>Mikroskobu Bilimleri</td><td>72225-01</td><td>Eksize edilmiş sferoidleri monte etmek için</td></tr><tr><td>Alexa-Fluor 488 Phalloidin</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A12379</td><td>1:200'de aktini boyamak için kullanılır</td></tr><tr><td>Sığır Serumu Albümini Bioshop</td><td>Canada Incorporated</td><td>ALB001</td><td>BSA bloke edici tamponda kullanılır</td></tr><tr><td>Dabco 33-LV</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>290734</td><td>Antifade</td></tr><tr><td>Gliserol&nbsp;</td><td>Bioshop Canada Incorporated</td><td>GLY001</td><td>MOWIOL montaj ortamında kullanılır</td></tr><tr><td>ImageJ Yazılımı</td><td>Ücretsiz, NIH-Görüntü</td><td></td> <td>analizi için kullanılır&nbsp;</td></tr><tr><td>Microslides</td><td>VWR International</td><td>48312-024</td><td>Eksize edilmiş sferoidlerin montajı için</td></tr><tr><td>MOWIOL 4-88</td><td>EMD-Millipore</td><td>475904</td><td>MOWIOL montaj ortamında kullanılır</td></tr><tr><td>Paraformaldehit&nbsp;</td><td>EMD-Millipore</td><td>PX0055-3</td><td>Sabitleme tamponunda kullanılan</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Bioshop Canada Incorporated</td><td>TRX777</td><td>Geçirgenlik tamponunda kullanılır</td></tr></tbody></table>

3d sfero Üretim için bir verimli ve esnek hücre toplama yöntemi

An Efficient and Flexible Cell Aggregation Method for 3D Spheroid Production

Tek tabakalı hücre kültürü yeterli kompleks hücre-hücre ve hücre-matris etkileşimlerini içeren dokuların in vivo davranış, modelde mevcut değildir. Üç boyutlu (3D) hücre kültür teknikleri yapışık hücre kültürü eksikliklerin giderilmesi için geliştirilen yeni bir yeniliktir. In vitro doku analogları üretmek için çeşitli teknikler geliştirilmiştir birlikte, bu yöntemler, kurma pahalı sıklıkla karmaşık özel teçhizat gerektirebilir ve genellikle sadece belirli hücre tipleri ile uyumluluğu ile sınırlıdır. Burada, tümör ve normal hücre çizgileri, çeşitli büyüme ile uyumlu uygun boyutta çok-3D parçacıklarının içine hücreleri toplanmasını sağlayan bir hızlı ve esnek bir protokol açıklar. Bu ankrajdan bağımsız sferoid nesil teşvik etmek ve yüksek ölçüde tekrarlanabilir biçimde, hücre mono tabakaları oluşumunu önlemek için, serum ve metil selüloz (MC) arasında değişen konsantrasyonlarda kullanmaktadır. Bireysel için en uygun koşullarınidual hücre çizgileri küremsi oluşturulması ortamda MC veya serum konsantrasyonlarını ayarlanması ile elde edilebilir. üretilen 3 boyutlu sferoidler hücre sinyal veya gen ekspresyon çalışmaları, bir aday ilaç tarama, veya tümör hücre istilası ve göç gibi hücresel süreçleri çalışma da dahil olmak üzere geniş bir uygulama aralığında, kullanım için toplanabilir. Protokol de kolayca tek hücre klonal sferoidler üretmek üzere uyarlanmış olan ve ankrajdan bağımsız büyüme ve anoikis direncini değerlendirmek için adapte edilebilir. Genel olarak, iletişim kuralı üreten normal ve tümör hücrelerinin in vivo büyüme dokuların 3D mikro-özetlemek ve model-leştirilmesi için 3D hücresi parçacıklarının kullanılması için kolaylıkla değiştirilebilir bir yöntem sağlar.

Bu hücre itici plakaları ve MC ile takviye sferoid formasyonu ortamını kullanarak ayn sferoidler oluşturmak için esnek ve etkili bir yöntem tarif eder. MC ve serum uygun koşullar altında, tek tek hücreler yerleşmek ve de alt az vermeden parçacıklarının oluşturulması için iyi merkezine bir araya yapışır. Bu protokol kullanılarak, küremsi hücre çizgileri, çeşitli (Şekil 2B) elde edilmiştir. MC ve serum titrasyonu tek bir küremsi parçalamadan manipülasyon sağlamak için yete...

Burada, hücre agregasyonu yoluyla 3B hücre sferoidlerinin oluşumu için hızlı ve esnek bir protokol açıklıyoruz. Bu, birden fazla hücre tipine kolayca uyarlanır ve hücre göçü, istila veya anoikis tahlilleri dahil olmak üzere çeşitli uygulamalarda ve hücre-matris etkileşimlerini görüntülemek ve ölçmek için uygundur.

3D Sfero Üretim için bir Verimli ve esnek Hücre Toplama Yöntemi

Monolayer cell culture does not adequately model the in vivo behavior of tissues, which involves complex cell-cell and cell-matrix interactions. ...

ANLATICI Bu yöntemin genel amacı, çeşitli hücre tabanlı analizlerde kullanılmak üzere, hücre agregasyonu yoluyla büyük miktarlarda dayanıklı hücre sferoidlerini verimli bir şekilde üretmektir. Bu tekniğin temel avantajı, hücre agregasyonu ve sferoid oluşumu için protein içermeyen, suda çözünür bir matris kullanmasıdır; bu da sferoidlerin kolay ve hızlı bir şekilde izole edilmesine olanak tanır. Bu yöntem, üç boyutlu bir mikroçevrede hücre-hücre ve hücre/matris etkileşimlerinin doku büyümesi üzerindeki etkileri hakkında hücre biyolojisinde yeni bilgiler edinilmesine yardımcı olabilir.ANLATICI Agregatları hazırlamadan önce, 50 mililitre ultrapure suyu 80 derece santigrat dereceye kadar ısıtın ve 10 gram metilselüloz tozu ekleyin. Partiküller eşit şekilde dağılana kadar süspansiyonu karıştırın. Ardından, nihai hacim 100 mililitre olana kadar soğuk ultrapure su ekleyin ve çözelti berraklaşıp, görünür katı madde içermeyen saman rengini alana kadar partikülleri 4 derece santigrat derecede gece boyunca saklayın.Çözünmemiş parçacıkları uzaklaştırmak için çözeltiyi 0.45 mikrometre filtreden geçirin ve filtrelenmiş çözeltiyi uygun kültür ortamında 1:5 mg/mL oranında seyreltin. Ardından, metilselüloz takviyeli ortamı 0.22 mikrometre süzgeçten filtreleyin. Sonrasında, bir biyogüvenlik kabininde, %70 konfluen bir subkültürü PBS ile yıkayın ve hücreleri bir hücre kültürü inkübatöründe üç mililitre Trypsin-EDTA birliktirme tamponu ile ayırın.Birkaç dakika sonra, hücreleri ışık mikroskobunda 10x büyütmede inceleyin. Hücreler plakadan ayrıldığında, reaksiyonu yedi mililitre serum takviyeli kültür ortamı ile nötralize edin. Hücre solüsyonunu yeni bir 15 mililitrelik tüpe aktarın ve ardından serbest kalan hücreleri santrifüjle toplayın.Kontamine edici partiküller dışında, başarısız sferoid oluşumunun en yaygın nedeni, kullandığınız hücre hattının agregasyonu ve büyümesi için suboptimal metilselüloz veya serum konsantrasyonlarının kullanılmasıdır. ANLATICI-Filtreli uçlu bir P1000 mikropipet kullanarak, pipet ucunu tüpün tabanına hafif bir açıyla bastırarak ve pellet'i parçalamak için uç içeriğinin tamamını boşaltmadan yavaşça pipetleme yaparak, pellet'i bir mililitre sferoid oluşum medyumu ile üç ila beş kez tritüre edin. Sayım yaptıktan sonra, hücre süspansiyonunu 1 × 10⁴ hücre/mL konsantrasyonuna seyreltin ve toz ile lifleri temizlemek için steril bir çok kanallı pipet rezervuarını filtrelenmiş ultra saf su ile durulayın.Hücreleri rezervuara aktarın ve hücrelerin rezervuarın dibine çökmesini önlemek için hücre süspansiyonunu periyodik olarak karıştırarak, 96 kuyucuklu U-tabanlı hücre itici plakanın her bir kuyucuğuna filtreli uçlar yardımıyla 100 microliters hücre transfer edin. Tüm hücreler yerleştirildiğinde, plakayı bir doku kültürü inkübatörüne yerleştirin ve sferoid oluşumunu gözlemlemek için kuyucukları günlük olarak kontrol edin. Hücreler altı saat içinde her bir kuyucuğun dibine çökmeli ve genellikle 24 ila 48 saat içinde bir sferoid şeklinde kümelenmelidir.Başarılı bir sferoid oluşumunu doğrulamak için, ışık mikroskobu altında bir P10 uç kullanarak sferoidin üzerine nazikçe besiyeri pipetleyin. Doğru şekilde oluşmuş sferoidler plakadan ayrılıp yuvarlanacak ve böylece 3-B yapıları doğrulanmış olacaktır. Sferoidleri kolajene gömmek için, sekiz kuyucuklu bir doku kültürü oda slaytının her bir kuyucuğunun tabanını, kuyucuk başına minimum 50 µL nötralize kolajen ile eşit şekilde kaplamak amacıyla ters pipetleme yöntemini kullanın.Tüm kuyucuklar kapatıldıktan sonra, oda slaytını ultrapure su ile doldurulmuş 35 milimetrelik bir doku kültürü kabının içine, ardından bunu da 10 santimetrelik bir doku kültürü kabına yerleştirin ve 10 santimetrelik doku kültürü kabını yaklaşık bir saat boyunca 37 °C'de inkübe edin. Kolajen polimerize olduğunda, önceden oluşturulmuş sferoidleri 1,5 mililitrelik mikrosantrifüj tüplerine dikkatlice aktarmak için P1000 filtreli uç kullanın. Sferoidler veya besiyeri eklenirken kolajenin bozulmasını önlemek için kolajen taban katmanlarının tamamen polimerize olana kadar inkübe edilmesi kritik önem taşımaktadır.Anlatıcı Hasat edilen sferoidleri masaüstü bir mikro santrifüjde toplayın ve süpernatantları uzaklaştırmak için bir P200 pipet kullanın; gerekiyorsa tüpü temiz bir kağıt havlu üzerine ters çevirerek fazla süpernatantı emdirin. Geniş ağızlı bir P200 pipet ucu kullanarak sferoidleri derhal 50 µL nötralize kolajen içinde yeniden süspanse edin ve sferoid-kolajen karışımlarını sekiz kuyucuklu doku kültürü oda slide'ının her bir kuyucuğuna dikkatlice aktarın. Kolajen polimerleşene kadar slide'ı inkübatöre geri yerleştirin.Yaklaşık bir saat sonra, başka bir inkübasyon için her bir kuyucuğa, ilgilenilen uygun işlemi içeren ısıtılmış kültür ortamından en az 100 microliters yavaşça ekleyin. Ardından, istila eden sferoidlerin optik görüntüleme kesitlerini elde etmek için bir floresan mikroskobu kullanın. Bu protokol kullanılarak, çeşitli hücre hatlarından sferoidler üretilebilir.Uygun metilselüloz ve serum uygulama koşulları altında, münferit hücreler çöker ve kuyucuğun merkezinde birbirine tutunarak, kuyucuk tabanına minimum düzeyde yapışan sferoidler oluşturur. Bazı hücre hatları, metilselülozun yokluğunda veya düşük konsantrasyonlarında hücre itici plakalara tutunabilmekte ve bu durum, etrafı hücre monotabakasıyla çevrili bir sferoid oluşumuyla sonuçlanmaktadır. Genel olarak, daha yüksek metilselüloz konsantrasyonları hücrelerin kuyucuğa tutunmasını engeller.Ancak çok yüksek metilselüloz konsantrasyonu hücre-hücre adezyonunu azaltır ve hücrelerin kuyucuğun dibine çökmesini engelleyerek, gevşek agregatların ve çok sayıda uydu sferoidin oluşmasına neden olur. Kollajen gömülü sferoidler, bireysel hücrelerin sferoidden dışarıya, çevredeki matrikse doğru invazyonunu indüklemek için bir kemoatraktan ile işlenebilir. Fikse edilmiş kollajen gömülü sferoidler, invaze olan hücrelerin sayısını ve mesafesini belirlemek için parlak alan mikroskopisiyle veya göç eden hücreler tarafından oluşturulan invaziv yapıları görselleştirmek için immünofloresan mikroskopisiyle görüntülenebilir.Hücrelerin, fragmanlara ayrılmadan manipüle edilebilecek kadar sağlam ve sonraki analizlerde kullanılmak üzere kolayca toplanabilecek yapısal bütünlüğe sahip sferoidler oluşturacak kadar yeterli süreye sahip olmaları önemlidir. Hücre büyüme protokolümüz, birden fazla hücre biyolojisi analizi için daha da uyarlanabilir. Örneğin, hücrelerin yüksek konsantrasyonlarda metilselüloz ile desteklenmiş ortamlara yerleştirilmesi, hücrelerin kanonik direncini değerlendirmek için kullanılabilir.Bu videoyu izledikten sonra, birçok hücre biyolojisi uygulaması için değerli bir araç olacak olan agregasyon yoluyla üç boyutlu hücre sferoidlerinin nasıl oluşturulacağı konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

an-efficient-flexible-cell-aggregation-method-for-3d-spheroid

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Biz 3D doku parçacıklarının ve potansiyel uygulama üreten hücre-hücre etkileşimleri farklılıkları ölçmek için basit ve hızlı bir yöntem açıklanmaktadır.

3D parçacıklarının Üretimi için Basit Asma Bırak Hücre Kültürü Protokolü

Spheroids, 2B hücre kültürü tek katmanlı modellere kıyasla bir hücrenin ortamını daha doğru bir şekilde temsil etmek için kullanılan bir tür 3B hücre kültürü modelidir. Örnek protokolde, bilim adamlarının bir kolorektal kanser hücre hattından sferoidler ürettiğini ve sferoidlerin büyümesini izlemek için canlı hücre görüntüleme uyguladığını göreceğiz.

Hücre Hatlarından Küresel Üretim: Üç Boyutlu (3D) Bir Hücre Kültürü Yöntemi

Biz hücre küresel leri yetiştirmek için bir motor destekli santrifüj mikroakışkan cihaz satıyoruz. Bu cihazı kullanarak, tek veya birden fazla hücre tiplerinin küresel leri yüksek yerçekimi koşullarında kolayca cokültüre edilebilir.

Çok Hücreli Üç Boyutlu Spheroidler Üretmek için Lab-on-a-CD Platformu

Burada, hücre süspansiyonunu tohumlamak için otomatik bir pipetleme sistemi kullanarak adipoz türevli stromal/kök hücre (ASC) sferoidlerinin büyük ölçekli üretimini açıklıyoruz, böylece küresel boyut ve şeklin homojenliğini sağlıyoruz. Bu ASC sferoidleri, 3D biyobaskı yaklaşımları için yapı taşları olarak kullanılabilir.

3D Biyobaskı için Adipoz Türevi Kök Hücre Sferoidlerinin Büyük Ölçekli, Otomatik Üretimi

Bu protokol, üç farklı sferoid tipinin üretimi için bir yöntemi, onları büyük ölçekli yüksek içerikli tarama ve analiz için uygun hale getirecek şekilde detaylandırmaktadır. Ek olarak, küresel ve bireysel hücre seviyelerinde nasıl analiz edilebileceğini gösteren örnekler sunulmaktadır.

Yüksek İçerikli Tarama ve Analiz Uygulamaları için Büyük Ölçekli Sferoid Üretimi için Sağlam Bir Yöntem

Mevcut protokol, 3D baskılı damga benzeri bir cihaz kullanarak uygun maliyetli bir şekilde büyük ölçekte doku sferoidleri üretmek için bir tekniği açıklamaktadır.

3D baskılı damga benzeri bir cihaz aracılığıyla doku sferoidlerinin üretilmesi

Görüntü yakalama ve proteomik kullanarak yüksek tekrarlanabilirliğe sahip sferoidlerin yetiştirilmesi ve fenotipik karakterizasyonu için bir protokol sunuyoruz.

Fonksiyonel 3D Küresel Hücre Kültürlerinin Yarı Otomatik Fenotipik Analizi

Burada, tümör sferoidlerinin hızlı, sağlam ve ucuz bir şekilde üretilmesini ve ardından hidrojel kapsüllenmesini sağlayan bir protokol sunuyoruz. Özel ekipman gerektirmediği için yaygın olarak uygulanabilir. Sferoid-matriks etkileşimlerini araştırmak ve in vitro doku fizyolojisi veya patoloji modelleri oluşturmak için özellikle yararlı olacaktır.

Sferoid-Matriks Etkileşimlerini İncelemek için Polietilen Glikol Hidrojellerde Tümör Sferoid Üretimi ve Kapsüllenmesi

Hücre sferoidleri, biyolojik uygulamalar alanında potansiyel bir model olarak kabul edilmiştir. Bu makale, tek tip hücre sferoidlerinin sağlam ve hızlı üretimi için etkili bir yöntem sağlayan bir 3D akustik montaj cihazı kullanarak hücre sferoidlerini ölçeklendirilebilir şekilde üretmeye yönelik protokolleri açıklamaktadır.

Hücre sferoidlerinin seri üretimi için üç boyutlu akustik montaj cihazı

Burada, takip çok parametreli canlı hücre mikroskobu gerçekleştirmek için farklı çok hücreli sferoid oluşturma yöntemlerini açıklıyoruz. Floresan ömür boyu görüntüleme mikroskobu (FLIM), hücresel otofloresan, boyama boyaları ve nanopartiküller kullanılarak, canlı üç boyutlu (3D) kanser ve kök hücre türevli sferoidlerde hücre metabolizması, hipoksi ve hücre ölümünün analizi için yaklaşım gösterilmiştir.

Çok Hücreli Sferoidlerin Üretimi ve Çok Parametreli Canlı Hücre Floresan Ömür Boyu Görüntüleme Mikroskobu (FLIM)

Bu çalışma, agaroz kalıplarında mikro kuyular oluşturmak için damga tabanlı bir sistem kullanarak 3D hücre yapıları oluşturmak için uygun maliyetli ve verimli bir metodoloji sunmaktadır. Sistem, tek tip sferoidlerin/organoidlerin oluşumunu teşvik eder, böylece hücre etkileşimlerini iyileştirir. Bu yaklaşım deneysel değişkenliği azaltır ve ilaç testi ve doku mühendisliğindeki uygulamaları destekler.

Yeni Bir Damga Cihazı Kullanılarak İki Boyutlu Hücre Kültürlerinden Üç Boyutlu Sferoidlerin/Organoidlerin Üretilmesi

Öğrenin, metilselüloz matrisi kullanarak hücre toplanmasıyla 3D sferoid üretimini. Bu yöntem, hücre göçü ve invazyon çalışmaları için hızlı izolasyon sağlar.

3D Sfero Üretim için bir Verimli ve esnek Hücre Toplama Yöntemi

Daha fazla video keşfet