JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 4:01 dk. • April 30th, 2023
İstenen hücre hattını yapışkan bir 2D tek katman olarak büyütün. Kültür ortamını çıkarın ve fosfat tamponlu salin veya PBS ile yıkayın. Ardından, tripsin ekleyin ve hücreler şişe yüzeyinden ayrılırken ve yuvarlak şekilli hale gelirken inkübe edin. Tripsini nötralize etmek ve hücreleri askıya almak için taze ortam ekleyin. Karışımı konik bir tüpe aktarın ve hücreleri peletlemek için bir santrifüj kullanın.
Süpernatanı taze ortamla değiştirin ve hücrenin peletini yeniden süspanse edin. Hücre sayılarını saymak ve çalışma konsantrasyonunu hesaplamak için bir hemositometre kullanın. Ardından, doğru miktarda hücre karışımını yuvarlak tabanlı ultra düşük yapışma özelliğine sahip bir kuyu plakasına aktarın ve inkübe edin. Hücreler dibe çöker ve toplanır. Sonunda birbirlerine bağlanacaklar ve kompakt bir 3D hücre düzeneği olan sferoid oluşturacaklar.
Örnek protokolde, bir kolon kanseri hücre hattından 3D sferoidlerin nasıl oluşturulacağını ve oluşumlarını izlemek için canlı görüntülemenin nasıl uygulandığını göreceğiz. İlgilenilen kolorektal kanser hücre hattını beş mililitre PBS ile yıkayarak ve hücreleri şişenin tabanından 0.5 mililitre tripsin ile 37 santigrat derecede beş dakika boyunca ç
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin