Fare Pnömonektomi ve Protez İmplantasyonu ile İç Akciğer Yüzey Alanının Ölçümü için Standart Bir Yöntem

Bu prosedürün genel amacı, pnömonektomi ve protez implantasyonundan sonra bir fare akciğerinin iç yüzey alanını doğru bir şekilde ölçmektir. Bu yöntem, mekanik kuvvete bağlı erişkin akciğer rejenerasyonunda akciğerin morfolojik ve fizyolojik fonksiyonlarının analiz edilmesine yardımcı olur. Bu tekniğin temel avantajı, akciğer fonksiyon durumunun güvenilirliğini ve tekrarlanabilirliğini artırmayı vaat eden iç akciğer yüzey alanını doğru bir şekilde ölçmektir.

Fareyi, ventral tarafı erişilebilir olan bir entübasyon platformunda ameliyata hazırlayın. Daha sonra dili dışarı çekin ve ses tellerini kılavuz kateterlerle uyumlu küçük bir hayvan laringoskopu ile inceleyin. Daha sonra 20 gauge intravenöz entübasyon kanülünü trakeaya iç açıyla nazikçe yerleştirin.

Ardından, fareyi sağ yanal yaslanmış bir pozisyona getirin ve kanülü mekanik bir ventilatöre bağlayın. Kanülün trakeaya yerleştirilmesini değerlendirmek için göğsü gözlemleyin. İnspiratuar basıncı 12 santimetre suya ayarlayın ve solunum hızını dakikada 120 nefese ayarlayın.

Şimdi, açıkta kalan cildi en az üç alternatif Betadine ve% 70 etanol ile temizleyin. Daha sonra beşinci interkostal boşluğa iki ila üç santimetrelik posterolateral torakotomi insizyonu ile ameliyata başlayın. Noyes yaylı makas kullanarak kas sistemine nüfuz edin.

Ardından, sol akciğeri ortaya çıkarmak için 1,5 santimetrelik bir kesi yapın. Ameliyat boyunca gerektiği gibi, kanamayı durdurmak için yüksek sıcaklıkta bir koterizatör kullanın. Daha sonra, sol akciğer lobunun 1 / 3'ünü künt uçlu forseps ile göğüsten kaldırın ve sol akciğerin tamamını çıkarmak için pamuklu çubuk kullanın.

Şimdi, sol akciğer lobunun pulmoner arterini ve bronşlarını tanımlayın ve batırılmış bir cerrahi dikişle hilumdaki bronşları ve damarları sıkıca bağlayın. Daha sonra, sol akciğer lobunu ligasyondan üç ila dört milimetre kesin, dikişi kesmemeye dikkat edin, bu da pnömotoraks ile sonuçlanabilir. Sonra, göğüs duvarını bir dikişle kapatın.

Ardından, üç ila dört milimetre boşluklu beş ila altı kesintili dikiş kullanarak kas tabakasını ve cilt tabakasını sırayla dikin. Cerrahi dikiş iğnesini kalpten uzak tuttuğunuzdan emin olun. Kardiyak ponksiyon öldürücüdür.

Son olarak, cerrahi bölgeyi povidon-iyot ile dezenfekte edin. Ardından, fareyi 38 santigrat derecelik bir termal pedin üzerine yerleştirin. Spontan solunum geri dönene kadar ventilatörü kullanmaya devam edin.

Daha önce tarif edilen işlemi gerçekleştirin, ancak akciğeri çıkardıktan hemen sonra protezi yerleştirmeye hazırlanın. Künt forseps kullanarak, elipsoid silikon protezin merkezini kavrayın. Daha sonra, göğüs boşluğunu ortaya çıkarmak için kaburgayı forseps ile tutarken, protezi çok nazikçe yerleştirin.

Protezin ön düzlemi ile göğüs yüzeyi arasında 45 derecelik bir açıyla girin. Künt forseps kullanarak, protezin tamamen sol boş göğüs boşluğu içinde olduğundan emin olun. Şimdi, sandığı kapatın ve daha önce açıklandığı gibi fareyi izleyin.

Bu prosedür için, 10 mililitrelik bir serolojik pipetten çıkarılan bir piston, iğne adaptörlü 40 santimetre uzunluğunda esnek bir tüp, bir akış hızı kontrol valfi ve 18 gauge iğneden oluşan özel bir şişirme tüpü monte edin. Monte edildikten sonra, pipeti bantla bir büfeye sabitleyin. Pipetin üst kısmı ile tezgah arasındaki mesafe en az 30 santimetre olmalıdır.

Fareyi anestezik enjeksiyonla ötenazi yaptıktan sonra, sterilize edilmiş bir tahtaya sabitleyin ve sternumu kesmek ve akciğer loblarını açığa çıkarmak için göğsü dikkatlice açın. Ardından trakeayı açığa çıkarın. Ardından, şişirme tüpünü yeni yapılmış %4 PFA ile doldurun ve tüpteki tüm kabarcıkları çıkarın.

Ardından iğneyi soluk borusuna yerleştirin. Sızıntıyı önlemek için, trakeayı damar klipsleriyle klipsleyin. Şimdi, akciğeri 25 santimetre su sabit bir transpulmoner basınçta fiksatif ile şişirin.

Tam genişleme için akciğerleri oda sıcaklığında iki saat inkübe edin. Şişirmeden sonra, fiksatifin hacim yer değiştirmesine dikkat edin. Şimdi, trakeayı serbest bırakın ve çevredeki bağ dokularından sağlam akciğerleri nazikçe inceleyin.

Makas kullanın ve çok nazik olun. Daha sonra, akciğerleri% 4 PFA ile doldurulmuş 50 mililitrelik konik bir tüpte 12 saat boyunca dört santigrat derecede bir çalkalayıcı üzerinde hafifçe sallayarak inkübe edin. Ardından, metin protokolünde açıklandığı gibi işleme ve boyama işlemlerine devam edin.

MLI'yi ölçmek için, 20x büyütmede parlak alan altında toplanan bölümlerde kullanılan ajanın görüntülerini kullanın. Üç farklı akciğer bölümünden, her biri yaklaşık bir milimetre kare olan toplam 15 örtüşmeyen görünümü rastgele seçin ve ardından bunları havalandırın. Yalnızca arterler ve damarlar, ana hava yolları veya alveol kanalları olmayan alanları kullanın.

Analiz için, bir cetvel aracı kullanarak seçilen her alanın üzerine 10'a 10'luk bir ızgara çizin. Bu nedenle ızgara çizgileri yaklaşık 100 mikron aralıklıdır. Daha sonra, iki bitişik alveolar epitel arasındaki uzunluk olarak çizgi boyunca bir kesişme noktası bulmak için.

Örneğin, çift başlı oklar uzunlukları gösterir. Her bir ızgara çizgisi boyunca tüm bu uzunlukları sayın ve MLI, kesişim uzunluklarının ortalama değeridir. Açıklanan protokoller kullanılarak, PNX ile tedavi edilen fareler, protez implante edilmiş farelerle karşılaştırıldı.

Kullanılan fareler sekiz haftalık CD-1 erkeklerdi ve sol akciğer lobları rezeke edildi. Protez, sol akciğer lobunun boyutunu ve şeklini taklit eder ve sol akciğer lobu çıkarıldıktan sonra göğse yerleştirilmiştir. Ameliyattan 14 gün sonra, kalan sağ akciğerin iç hacmini belirlemek için özel yapım bir şişirme tüpü kullanıldı.

PNX ile tedavi edilen beş farede sağ akciğerin ortalama hacmi yaklaşık 1.4 mililitre idi, bu da protez implante edilmiş beş fare için 1.05 mililitre olan önemli ölçüde daha büyüktü. Kalan sağ akciğerlerdeki MLI değerleri de anlamlı olarak daha yüksekti. Bu parametreler kullanılarak, iç akciğer yüzey alanı hesaplandı ve protez implante edilen farelerde önemli ölçüde daha küçük olduğu bulundu.

Bu videoyu izledikten sonra, mekanik kuvvete bağlı alveoler rejenerasyon fare modeli için iç akciğer yüzey alanının nasıl hesaplanacağını iyi anlamış olmalısınız.