Name: Fare Pnömonektomi ve Protez İmplantasyonu ile İç Akciğer Yüzey Alanının Ölçümü için Standart Bir Yöntem (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-07-26T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 46 s
Description: Keşfedin fare pnömonektomi ve protez implantasyonu sonrası iç akciğer yüzey alanını ölçme yöntemini. Bu teknik akciğer morfolojisi ve rejenerasyon süreçlerinin güvenilir analizini sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, yardım için Pekin Ulusal Biyolojik Bilimler Enstitüsü&#39;nü kabul etmek istiyorlar. Bu çalışma Pekin Belediye Tabiat Bilimleri Vakfı (No. Z17110200040000) tarafından desteklenmiştir.

Bu protokolde kullanılan tüm prosedürler, Pekin Ulusal Biyolojik Bilimler Enstitüsünün Laboratuar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı için Yönergelerdeki önerilere uygun olarak gerçekleştirildi. 8 haftalık CD-1 erkek fareler, deneyler gerçekleştirilene kadar spesifik bir patojen içermeyen (SPF) tesiste barındırıldı. Ameliyatlar tamamen anestezi uygulanmış fareler kullanılarak gerçekleştirildi (diğer bir deyişle çimdikleme tepkileri olmadan). Ameliyattan sonra fareler yeterli miktarda yiyecek ve tatlı su ile sıcak, nemli bir odada tutuldu. Fareler, intraperitoneal enjeksiyon yoluyla verilen bir anestetik doz aşımı kullanılarak öldürüldü. 1. Fare PNX Cerrahisi <ol><li> İntraperitoneal (IP) enjeksiyon yoluyla farelere sodyum fenobarbital (120 mg / kg vücut ağırlığı) ve buprenorfin (0.1 mg / kg vücut ağırlığı) ile tamamen uyartın. Fareler artık parmak ucu ile tepki göstermediğinde ameliyat yapın. </li><li> Farelerin sol toraksındaki saçları kimyasal madde ile çıkarınilatory tedavisi (~ 3 x 3 cm 2 alan). </li><li> Her fareyi, ventral tarafı operatöre bakacak şekilde entübasyon platformuna sabitleyin ( Şekil 1A ). </li><li> Farenin dilini çekin ve ses tellerini, kateterleri 18 ( Şekil 1A ) yönlendirmek için bir çentik içeren küçük bir hayvan laringoskopu ile aydınlatın. </li><li> Solunum sırasında ses tellerinin hareketlerini gözleyerek ses tellerini ayırt edin. Anterior açı 19 ile trakea 20 G intravenöz entübasyon kanülünü yavaşça yerleştirin. </li><li> Fareleri sağ yanal yatık konuma getirin ve kanülü mekanik bir ventilatöre bağlayın ( örn., Basınç kontrollü , Malzeme Tablosuna bakın). Fare göğsünün solunum hareketlerini gözleyerek kanülün trakeaya sokulduğunu kontrol edin ( Şekil 1B ). </li><li> İnspirasyon basıncını ayarlayınVentilatörü 12 cm H 2 O&#39;ye ayarlayın ve solunum hızını dakikada 120 nefes alma değerine ayarlayın ( Şekil 1B ). </li><li> Cerrahi bölgedeki cildi betadin ve% 70 etanol ile arındırın. </li><li> 5. interkostal boşluktaki boşluğa Noyes Bahar Makas (kesici kenar: 14 mm, uç çapı: 0.275 mm) ile cilt ve kasları keserek 2-3 cm posterolateral torakotomi insizyonu yapın ( Şekil 2B , C ). Torakotomi prosedürü için kullanılan cerrahi aletler kullanımdan önce sterilize edilir. </li><li> Sol akciğerin ortaya çıkması için 5. interkostal boşluğa 1.5 cm&#39;lik bir kesi yapın ( Şekil 2D , E ). Ameliyat sırasında kanamayı durdurmak için yüksek sıcaklıkta bir koterizer kullanın. </li><li> Sol akciğer lobunun üçte birini künt uçlu forseps ile göğüsten kaldırın ( Şekil 2F ) ve daha sonra solun tamamını dışarı çekmek için bir pamuk çubuğu kullanınAkciğer ( Şekil 2G ). </li><li> Sol akciğer lobunun pulmoner arter ve bronşunu belirleyin ( Şekil 2G ). </li><li> Bronşu ve damarları ipek cerrahi dikişle hilumda sıkıca bağlayın ve ligasyondan 3-4 mm uzakta sol akciğer lobunu kesin ( Şekil 2H , I ). NOT: (toraks boşluğunda yani hava veya gaz) pnömotoraks neden olabilir sol hilusta, üzerinde dikiş knot kesmeye özen gösterin. </li><li> 1 dikiş ile göğüs duvarını kapatın ve kas tabakasını ve cilt tabakasını sırayla 5-6 kesilmiş sütürleri kullanarak dikin. Her dikiş arasında 3-4 mm boşluk bırakın ( Şekil 2M , 2N ). NOT: Cerrahi dikiş iğnesini kalpten uzak tutun; İstenmeyen kardiyak ponksiyon ölümle sonuçlanır. </li><li> Cerrahi alanı povidon iyotla dezenfekte edin. </li><li> AfteCerrahi işlem, fareyi 38 ° C&#39;lik bir termal yastığa yerleştirin ve spontan solunum hareketleri başlayana kadar fareyi vantilatörün içine bağlayın ( Şekil 2O ). </li></ol> 2. Protez İmplantasyonu <ol><li> PNX prosedürünün adımları 1.1 - 1.13&#39;ü gerçekleştirin (farenin sol akciğer lobu çıkarıldığı noktaya kadar). </li><li> Künt forseps kullanarak silikon protezin (müşterinin yaptığı, 12 mm uzunluğunda, 3 mm kalınlığında, 7 mm genişliğinde, 0.2 g, elipsoid şeklinde) kelepçeleyin ( Şekil 2J ). Silikon protezi yerleştirmeden önce sterilize edin. </li><li> Göğüs boşluğunu ortaya çıkarmak için kaburgayı bir elinizle forsepsle tutun ve daha sonra başka bir elle boş protezi sol boş torak boşluğuna yerleştirin. NOT: Ekleme açısı protezin ön yüzü ile göğüs arası yüzeyi arasında yaklaşık 45 derecedir ( Şekil 2K ,L). Protezi yerleştirirken çok nazik olun. Aşırı kuvvet plevral rüptüre neden olur. </li><li> Protezin sol boş torak boşluğunu kapladığından emin olmak için künt forsepsle protezin yönünü ayarlayın. </li><li> Fare PNX prosedürünün 1.14 - 1.16 adımlarını uygulayın. </li></ol> 3. ILV ölçümü <ol><li> Tek kullanımlık bir serolojik pipetten (10 mL), bir iğne adaptörü olan 40 cm uzunluğunda bir esnek borudan, bir akış hızı kontrol valfinden ve 18 G&#39;lik bir iğneden çıkarılmış bir pistondan oluşan özel bir cihaz hazırlayın (&quot;şişme tüpü&quot;). Montajdan sonra, pipeti bantla bir tahtaya sabitleyin ( Şekil 3A ). Pipet üstü ile deney tezgahı arasındaki mesafe en az 30 cm olmalıdır. </li><li> Elle çalkalanarak, 55 ° C&#39;lik bir su banyosunda 500 gr önceden ısıtılan 1x fosfat tamponlu salin (PBS) içinde 20 g PFA&#39;nın eritilmesi ile taze% 4 paraformaldehit (PFA) fiksasyon çözeltisi hazırlayınSolüsyon berrak olana kadar her 10 dakikada bir temizleyin. Oda sıcaklığına soğuttuktan sonra, solüsyonu 0.45 um&#39;lik bir filtreyle süzün. DİKKAT: PFA kullanırken uygun kişisel koruyucu ekipmanı (PPE) giyin. </li><li> Anestezik doz aşımı dozunda (% 0.8 fenobarbital sodyum, 1000 U / mL heparin) fareleri kurban edin. </li><li> Her fare bir polistiren diseksiyon plakası üzerinde sabitleyin ve% 70 alkol ile püskürtün. </li><li> Farenin göğsünü dikkatli bir şekilde açın ve akciğer loblarını iyice ortaya çıkarmak için göğüs uçlarını makas kullanarak kesin. </li><li> Trakea maruz bırakmak için aşırı makroyu makas kullanarak çıkarın. Trakeayı özofagustan ayırdığınızdan emin olun. </li><li> Karın aortunu kesin ve sağ kalp sağ ventrikülüne 25-gauge iğne yerleştirin; Bu yerleştirmeden önce iğneyi 20 mL şırınga ile birleştirin. Akciğerler beyaza dönüşene kadar kan hücrelerini çıkarmak için yavaşça kalbe 1x PBS itin. Tipik olarak, pulmoner kan damarlarını temizlemek için 5 - 10 mL PBS gereklidir. </li><li> Doldurun thE% 4&#39;lük yeni PFA ile özel olarak yapılmış enflasyon tüpünü ve enflasyon tüpündeki tüm kabarcıkları çıkartın. </li><li> Enflasyon borusunun 18-mertebeli iğnesini trakea sokun ve sıvı sızıntısını önlemek için trakeaya gemi klipsleri ile bağlayın. </li><li> 25 sm bir sabit, transpülmoner basınç / H2O 2, 20% 4 PFA ile akciğerlerini şişirmek. Akciğerleri oda sıcaklığında 2 saat inkübe ederek tamamen akciğer genişletmesini sağlayın. Bu &quot;ön-düzeltme&quot; adımı, akciğer morfolojisini korumak için kritik önem taşır. <ol><li> Enflasyon borusunu izleyerek ilk% 4 PFA hacminin değerini kaydedin ve nihai hacmi kaydedin. İç akciğer hacmi, ilk% 4 PFA hacminden eksi son 4% PFA hacmine eşittir. </li></ol></li><li> Trakea bağlayın ve makas kullanarak, çevredeki bağ dokularından akciğerleri hafifçe parçalayın (akciğerleri sağlam tutun). Akciğerlere zarar vermemek için çok nazik olun. </li><li> incuAkciğerleri, 4 ° C&#39;de 12 saat boyunca çalkalayıcıda hafifçe çalkalayarak (50 dev / dak)% 4&#39;lük PFA ile dolu 50 ml&#39;lik bir konik tüpe koyun. Doku işleme ve boyama işlemlerine devam edin (bkz. Bölüm 4). </li></ol> 4. Doku Gömme, Kesitleme ve Hematoksilen ve Eozin (H &amp; E) Boyama <ol><li> Düzeltmeden sonra, akciğerlerden kalbi ve aşırı bağ dokularını düzeltmek için Noyes Bahar Makas kullanın. Akciğer loblarını trakeaya bağlayan bronşu keserek bireysel akciğer loblarını nazikçe ayırın. </li><li> Bir yörünge çubuğu çalkalayıcıda (50 dev / dak) akciğer loblarını 50 mL 1x PBS&#39;de (30 dakika / yıkama) 3-4 kez yoğun yıkayın. </li><li> Son yıkamayı takiben, doku 50 mL&#39;lik konik tüplerin dibine (yaklaşık 12 saat) batıncaya kadar akciğer loblarını 4 ° C&#39;de% 30 sükroz çözeltisine (1x PBS) daldırmak suretiyle kriyoproteksiyona uğratın. </li><li> Gömülmeden ve cryosectioning dokularından önce, forseps ile tüplerden akciğer lob örnekleri çıkarın, acces korumakHistolojik analiz için sory lobları, aksesuar lop numunelerinin yüzeyinden kalan sukroz çözeltisini ilave edin ve sonra yaklaşık 30 dakika boyunca optimum kesme ısısı (OCT) bileşiğini içeren bir Petri kabına iyice daldırın. </li><li> Cryomolds kullanarak sıvı azot içerisindeki OCT gömülü aksesuar lob örneklerini dondurun. Lobun en geniş yüzey alanını kalıbın tabanına paralel konuma getirin. </li><li> Histolojik analiz için cryosectioning sırasında her numune için toplam üç 10-μm kalınlığında bölümleri hazırlayın. İlk 1 mm&#39;lik dokuyu atın, 10 mm kalınlığında bir bölüm toplamayın, 0.5 mm doku atın, başka bir bölüm toplamayın, 0.5 mm doku atın ve üçüncü (son) bölümü toplayın. </li><li> H &amp; E boyamayı yapmadan önce bölümleri 1 saat boyunca havayla kurutun. </li><li> H &amp; E boyama yapın <ol><li> Musluk suyundaki 3-4 değişikliklerdeki bölümleri yıkayın ve daha sonra bölümleri taze hematoksilen içinde 2 dakika boyayın; Musluk suyunun altında yıkayın; Fazla hematoksileni çıkarmak için bölümü% 1 HC1-% 70 etanol solüsyonuna iki kez batırın. </li><li> Parçayı taze eozin içinde 3 dakika boyunca boyayın; % 95 etanol içinde iki ardışık 30 s yıkama ve% 100 etanol ile iki 30 s yıkama ile bölümleri kurutun; Ksilen bölümlerini 30 s temizleyin, temizleme adımını bir kez taze ksilen içinde tekrarlayın; Slaytları, cam lamelleri kullanarak montaj ortalığına monte edin. </li></ol></li></ol> 5. MLI ölçümü <ol><li> Parlak alan mikroskopu kullanarak H &amp; E lekeli aksesuar lob bölümlerinin dijital görüntülerini (20X büyütme) elde edin. </li><li> MLI&#39;yi ölçmek için, 3 bölümden oluşan uygun alanlardan (arterler, damarlar, ana hava yolları ve alveolar kanallar olmaksızın) rastgele toplam 15 bindirmeyen görüntü (1000 μm x 1000 μm) seçin. </li><li> 10 adet eşit dağıtılmış dikey çizgi ve 10 adet eşit olarak dağıtılan yatay çizgi ile bir ızgarayı yerleştirin.Cetvel aracını kullanarak seçilen alanlarda gth (1000 μm); Her hat 100 μm aralıklarla ayrılır ( Şekil 4B ). </li><li> Bir kesişmenin değerini iki bitişik alveolar epitelyum arasındaki doğrusal uzunluk olarak tanımlayın. Her bir 1000 μm uzunluk çizgisi boyunca tüm kesişme değerlerini ölçün. </li><li> Her bir ızgara için, 10 yatay 1000 μm uzunluk çizgisi ve 10 dikey 1.000 um uzunluk çizgisi arasındaki tüm kesme noktalarının değerlerini ölçün. NOT: MLI, her aksesuar lob için hazırlanan 3 bölümden analiz edilen toplam 15 ızgaradan kesme uzunluklarının ortalama değeridür. </li></ol> 6. ISA&#39;nın hesaplanması <ol><li> Denklem 1&#39;i kullanarak ISA&#39;yı hesaplayın ( Giriş&#39;e bakın). ILV&#39;nin ölçümü için bölüm 3&#39;e bakınız ve MLI&#39;nin nicelendirilmesi için bölüm 5&#39;e bakınız. </li></ol>

<ol><li>Liu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((MAPK-Mediated+YAP+Activation+Controls+Mechanical-Tension-Induced+Pulmonary+Alveolar+Regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">MAPK-Mediated YAP Activation Controls Mechanical-Tension-Induced Pulmonary Alveolar Regeneration.</a> Cell Rep. 16 (7), 1810-1819 (2016).</li>
<li>Thurlbeck, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Internal+surface+area+and+other+measurements+in+emphysema%5BTitle%5D)+AND+%22Thorax%22%5BJournal%5D)">Internal surface area and other measurements in emphysema.</a> Thorax. 22 (6), 483-496 (1967).</li>
<li>Knudsen, L., Weibel, E. R., Gundersen, H. J. G., Weinstein, F. V., Ochs, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+air+space+size+characteristics+by+intercept+%28chord%29+measurement%3A+an+accurate+and+efficient+stereological+approach%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Assessment of air space size characteristics by intercept (chord) measurement: an accurate and efficient stereological approach.</a> J Appl Physiol. 108 (2), 412-421 (2010).</li>
<li>Weibel, E. R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWeibel%2C+ER+%22Morphometry+of+the+Human+Lung%22">Morphometry of the Human Lung</a>. , Springer-Verlag. Berlin Heidelberg. (1963).</li>
<li>Duguid, J. B., Young, A., Cauna, D., Lambert, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+internal+surface+area+of+the+lung+in+emphysema%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pathol+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">The internal surface area of the lung in emphysema.</a> J Pathol Bacteriol. 88, 405-421 (1964).</li>
<li>Branchfield, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pulmonary+neuroendocrine+cells+function+as+airway+sensors+to+control+lung+immune+response%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Pulmonary neuroendocrine cells function as airway sensors to control lung immune response.</a> Science. 351 (6274), 707-710 (2016).</li>
<li>Ding, B. -S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial-derived+angiocrine+signals+induce+and+sustain+regenerative+lung+alveolarization%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Endothelial-derived angiocrine signals induce and sustain regenerative lung alveolarization.</a> Cell. 147 (3), 539-553 (2011).</li>
<li>Dunnill, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+methods+in+the+study+of+pulmonary+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Thorax%22%5BJournal%5D)">Quantitative methods in the study of pulmonary pathology.</a> Thorax. 17 (4), 320-328 (1962).</li>
<li>Weibel, E. R., Gomez, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Architecture+of+the+human+lung.+Use+of+quantitative+methods+establishes+fundamental+relations+between+size+and+number+of+lung+structures%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Architecture of the human lung. Use of quantitative methods establishes fundamental relations between size and number of lung structures.</a> Science. 137 (3530), 577-585 (1962).</li>
<li>Thurlbeck, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+internal+surface+area+of+nonemphysematous+lungs%5BTitle%5D)+AND+%22Am+Rev+Respir+Dis%22%5BJournal%5D)">The internal surface area of nonemphysematous lungs.</a> Am Rev Respir Dis. 95 (5), 765-773 (1967).</li>
<li>Butler, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+adult+lung+growth+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Evidence for adult lung growth in humans.</a> N Engl J Med. 367 (16), 244-247 (2012).</li>
<li>Hsia, C. C. W., Herazo, L. F., Fryder-Doffey, F., Weibel, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Compensatory+lung+growth+occurs+in+adult+dogs+after+right+pneumonectomy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Compensatory lung growth occurs in adult dogs after right pneumonectomy.</a> J Clin Invest. 94 (1), 405-412 (1994).</li>
<li>Thurlbeck, S. W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pneumonectomy+in+Rats+at+Various+Ages%5BTitle%5D)+AND+%22Am+Rev+Respir+Dis%22%5BJournal%5D)">Pneumonectomy in Rats at Various Ages.</a> Am Rev Respir Dis. 120 (5), 1125-1136 (1979).</li>
<li>Cagle, P. T., Langston, C., Thurlbeck, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Effect+of+Age+on+Postpneumonectomy+Growth+in+Rabbits%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr+Pulmonol%22%5BJournal%5D)">The Effect of Age on Postpneumonectomy Growth in Rabbits.</a> Pediatr Pulmonol. 5 (2), 92-95 (1988).</li>
<li>Langston, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alveolar+multiplication+in+the+contralateral+lung+after+unilateral+pneumonectomy+in+the+rabbit%5BTitle%5D)+AND+%22Am+Rev+Respir+Dis%22%5BJournal%5D)">Alveolar multiplication in the contralateral lung after unilateral pneumonectomy in the rabbit.</a> Am Rev Respir Dis. 115 (1), 7-13 (1977).</li>
<li>Cohn, R. <a target="_blank" href="http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/ar.1090750206/abstract">Factors Affecting The Postnatal Growth of The Lung.</a> Anatomical Record. 75 (2), 195-205 (1939).</li>
<li>Hsia, C. C., Wu, E. Y., Wagner, E., Weibel, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preventing+mediastinal+shift+after+pneumonectomy+impairs+regenerative+alveolar+tissue+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Lung+Cell+Mol+Physiol%22%5BJournal%5D)">Preventing mediastinal shift after pneumonectomy impairs regenerative alveolar tissue growth.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 281 (5), L1279-L1287 (2001).</li>
<li>Das, S., MacDonald, K., Chang, H. -Y. S., Mitzner, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+of+mouse+lung+intubation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A simple method of mouse lung intubation.</a> J Vis Exp. (73), e50318(2013).</li>
<li>Liu, S., Cimprich, J., Varisco, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+pneumonectomy+model+of+compensatory+lung+growth%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Mouse pneumonectomy model of compensatory lung growth.</a> J Vis Exp. (94), (2014).</li>
<li>Silva, M. F. R., Zin, W. A., Saldiva, P. H. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Airspace+configuration+at+different+transpulmonary+pressures+in+normal+and+paraquat-induced+lung+injury+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Respir+Crit+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Airspace configuration at different transpulmonary pressures in normal and paraquat-induced lung injury in rats.</a> Am J Respir Crit Care Med. 158 (4), 1230-1234 (1998).</li>
<li>Yilmaz, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+quantification+of+heterogeneous+lung+growth+following+extensive+lung+resection+by+high-resolution+computed+tomography%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Noninvasive quantification of heterogeneous lung growth following extensive lung resection by high-resolution computed tomography.</a> J Appl Physiol. 107 (5), 1569-1578 (2009).</li>
<li>Voswinckel, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterisation+of+post-pneumonectomy+lung+growth+in+adult+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Respir+J%22%5BJournal%5D)">Characterisation of post-pneumonectomy lung growth in adult mice.</a> Eur Respir J. 24 (4), 524-532 (2004).</li>
<li>Ravikumar, P., et al. <a target="_blank" href="http://jap.physiology.org/content/jap/97/4/1567.full.pdf">Regional Lung Growth and Repair Regional lung growth following pneumonectomy assessed by computed tomography.</a> J Appl Physiol. 97, 1567-1574 (2004).</li>
<li>Gibney, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+murine+post-pneumonectomy+lung+regeneration+by+18FDG+PET+imaging%5BTitle%5D)+AND+%22EJNMMI+Res%22%5BJournal%5D)">Detection of murine post-pneumonectomy lung regeneration by 18FDG PET imaging.</a> EJNMMI Res. 2 (1), (2012).</li>
<li>Muñoz-Barrutia, A., Ceresa, M., Artaechevarria, X., Montuenga, L. M., Ortiz-De-Solorzano, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+lung+damage+in+an+elastase-induced+mouse+model+of+emphysema%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biomed+Imaging%22%5BJournal%5D)">Quantification of lung damage in an elastase-induced mouse model of emphysema.</a> Int J Biomed Imaging. 2012, (2012).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Bu protokolde, fare sol akciğer PNX ve protez yerleştirildikten sonra pulmoner parametrelerin ölçümü hakkında ayrıntılı açıklamalar sağlarız. ISA, şimdi birçok pulmoner hastalıkta solunum fonksiyonlarının değerlendirilmesi ve yaralanmanın yol açtığı alveol rejenerasyonunda önemli bir metrik olarak düşünülmektedir. Bununla birlikte, pulmoner araştırma topluluğu ISA&#39;nın yararlı bir metriği olarak yararlı olduğu konusunda anlaşmaya rağmen, günümüze kadar ISA hesaplamak için kullanılan iki parametre olan ILV ve MLI&#39;...

Akciğerin temel işlevi, kan damarları ile atmosfer arasındaki oksijen ve karbon dioksit değişimidir. Bronkopulmoner displazi (BPD), kronik obstrüktif akciğer hastalığı (COPD) ve akut solunum yolu enfeksiyonları gibi akciğer hastalıkları, ISA 2 azalmasına neden olur. Akciğer hastalığını araştıran araştırmacılar, MLI, ILV, gaz değişim birimi sayısı, ISA ve akciğer dokusu uyumluluğu 2 , 3 dahil olmak üzere akciğerlerdeki morfolojik değişiklikleri değerlendirmek için çeşitli niceliksel yöntemler geliştirmiştir. Weibel ve ark.nın öncü çalışmaları 4 ve Duguid ve ark. 5 , ISA&#39;nın insan akciğerlerindeki akciğer gaz değişim kapasitesinin doğrudan bir ölçümü olarak kullanılabileceğini ve amfizemin ciddiyetini belirlemek için bir kriter olarak kullanılabileceğini birlikte ortaya koymuştur. Son beş yılda yayınlanan bir dizi çalışma, akciğer morfolojik parametrelerini ( örn. </eM&gt; ISA ve MLI) 6 gelişme sırasında ve yaralanma PNX 1 , 7 kurtarma sırasında farelerin akciğerlerinde morfolojik ve fonksiyonel değişiklikleri değerlendirmek için. ISA, Denklem 8 , 9 kullanılarak hesaplanır: <img alt="Denklem" src="/files/ftp_upload/56114/56114eq1.jpg" /> , Burada ILV, iç akciğer hacmi ve MLI, pulmoner periferik hava sahası büyüklüğünü 10 gösteren aracı bir parametredir. PNX, bir veya daha fazla akciğer lobunun cerrahi olarak çıkarılması, insanlar 11 , fareler 1 , köpekler 12 , sıçanlar 13 ve tavşanlar 14 , 15 dahil olmak üzere birçok türe ait alveol rejenerasyonunu uyardığı yaygın olarak bildirilmiştir. SaplamaOn dört gün sonra fareler, akciğer y sonrası PNX önceden var olan alveoller genişlemesi ve alveollere de novo oluşumu hem ISA, ilv restorasyonu ve kalan akciğer dokularında 1 alveol sayısını katkı göstermiştir. Biz ve diğerleri, PNX&#39;yi takiben boş göğüs boşluğuna sünger, balmumu veya özel şekil verilmiş bir protez gibi materyallerin sokulduğunu ( örn. , Protez implantasyonu) alveol rejenerasyonunu engellediğini gösterdik. Artık mekanik kuvvetin alveol rejenerasyonunu başlatmak için en önemli faktörlerden biri olarak işlev gördüğü tam olarak bilinmektedir 1 , 16 , 17 . Bu tür çalışmalar, alveol rejenerasyonunu kantitatif olarak değerlendirmek için bir kriter olarak PNX ile tedavi edilen ve Protez implante edilen akciğerlerden alınan ISA değerlerinin etkinliğini vurgulamıştır. Gözlemci önyargılarının ölçülen vayı önemli derecede etkilediği bilinmektedirAkciğer morfolojik parametreleri ( örn. , MIL ve ILV). ISA hesaplamasında kullanılan iki parametre olan hem ILV hem de MLI&#39;yi belirlemede bu önyargıdan kurtulmak için standart protokoller kullanılabilir. Burada, bu akciğer parametrelerini ölçmek için oldukça ayrıntılı ve standartlaştırılmış protokoller sunuyoruz. Daha da önemlisi, ISA&#39;yı doğru bir şekilde ölçebilme özelliği, yaralanmaya bağlı alveolar rejenerasyon modellerinde akciğer fonksiyonlarının güvenilirliğini ve tekrarlanabilirliğini artırmayı ve çoklu pulmoner hastalıklarda mekanik keşifleri kolaylaştırmayı taahhüt eder.

<table><tbody><tr><td>Düşük maliyetli koter seti</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>18010-00</td><td></td></tr><tr><td>Noyes makas</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>15012-12</td><td></td></tr><tr><td>Standart desen forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11000-12</td><td></td></tr><tr><td>Castroviejo Mikro İğne Tutucular</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>12060-01</td><td></td></tr><tr><td>Gemi klipsleri</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>18374-44</td><td></td></tr><tr><td>IV Kanül-20 ölçer</td><td>Jinhuan Tıbbi Ürün A.Ş., LTD.</td><td>29P0601</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi sütür</td><td>Jinhuan Medical Product Co., LTD.</td><td>F602</td><td></td></tr><tr><td>Fare entübasyon platformu</td><td>Penn-Century, Inc</td><td>Model MIP</td><td></td></tr><tr><td>Küçük Hayvan Laringoskop</td><td>Penn-Century, Inc</td><td>Model LS-2-M</td><td></td></tr><tr><td>TOPO Küçük Hayvan Vantilatörü</td><td>Kent Scientific</td><td>RSP1006-05L</td><td></td></tr><tr><td>Termal ped</td><td>Stuart ekipmanları</td><td>SBH130D</td><td></td></tr><tr><td>Pentobarbital sodyum tuzu</td><td>Sigma</td><td>P3761</td><td></td></tr><tr><td>Heparin sodyum tuzu</td><td>Sigma</td><td>H3393</td><td></td></tr><tr><td>Hematoksilen Çözeltisi</td><td>Sigma</td><td>GHS132</td><td></td></tr><tr><td>Eozin Y çözeltisi, alkolik</td><td>Sigma</td><td>HT110116</td><td></td></tr><tr><td>10 mL Pipet</td><td>Thermo Scientific</td><td>170356</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehit</td><td>Sigma</td><td>P6148</td><td></td></tr><tr><td>OCT Bileşik</td><td>Doku-Tek</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>kriyoseksiyon makinesi</td><td>Leica</td><td>CM1950</td><td></td></tr><tr><td>Tek Kullanımlık Taban Kalıpları</td><td>Fisher HealthCare</td><td>22-363-553</td><td></td></tr><tr><td>18 gauge iğne</td><td>Becton Dickinson</td><td>305199</td><td></td></tr><tr><td>Povidone iyot</td><td>Fisher Scientific</td><td>19-027132</td><td></td></tr><tr><td>Tek için% 70 etanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP82011</td><td></td></tr><tr><td>İnfüzyon setleri </td><td>Weigao</td><td>SFDA 2012 3661704</td><td></td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu tuzlu su</td><td>Gibco</td><td>10010023</td><td></td></tr><tr><td>Bantları</td><td>kullanın 3M Scotch</td><td>8915</td><td></td></tr><tr><td>Pamuk ped</td><td>Vinda</td><td>Dr.P</td><td></td></tr><tr><td>Silikon protez</td><td>Özel yapım</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Brightfield mikroskobu</td><td>Olympus</td><td>VS120</td><td></td></tr><tr><td>Cetvel aracı</td><td>Adobe Photoshop (Fotografik</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

fare pnömonektomi ve protez İmplantasyonu ile İç akciğer yüzey alanının Ölçümü için standart bir yöntem

A Standardized Method for Measuring Internal Lung Surface Area via Mouse Pneumonectomy and Prosthesis Implantation

Pulmoner morfoloji, fizyoloji ve solunum fonksiyonları hem fizyolojik hem de patolojik durumlarda değişir. Akciğerin gaz değişim kapasitesini temsil eden iç akciğer yüzey alanı (ISA), solunum fonksiyonunu değerlendirmek için kritik bir kriterdir. Bununla birlikte, gözlemci yanlılığı, akciğer morfolojik parametreleri için ölçülen değerleri önemli ölçüde etkileyebilir. Burada tanımladığımız protokol, ISA hesaplaması için kullanılan iki morfolojik parametrenin ölçümleri sırasındaki varyasyonları en aza indirir: iç akciğer hacmi (ILV) ve ortalama doğrusal kesişme (MLI). Hem pnömonektomi (PNX) hem de protez implantasyon fare modellerinde alveolar rejenerasyonun sonucunu belirlemek için ISA'yı morfometrik ve fonksiyonel bir parametre olarak kullanarak, PNX tedavisini takiben artan ISA'nın göğüs boşluğuna bir protez implantasyonu ile önemli ölçüde bloke edildiğini bulduk1. ISA'yı doğru bir şekilde ölçme yeteneğinin, yalnızca yaralı kaynaklı alveoler rejenerasyon modellerinde akciğer fonksiyon çalışmalarının güvenilirliğini ve tekrarlanabilirliğini geliştirmesi değil, aynı zamanda çoklu pulmoner hastalıkların mekanik keşiflerini teşvik etmesi beklenmektedir.

<html> Burada, PNX ile işleme tabi tutulan bir grup ve bir protez implantasyonu (Protez yerleştirilmiş) grubu ile bir deney gerçekleştirdik. Bu gruplamalar, araştırma grubumuzdan daha önce yayınlanmış bir çalışmada kullanılan gruplamalarla aynıdır 14 . Fare PNX ve protez yerleştirme prosedürleri Şekil 2&#39;de gösterilmektedir. Ameliyatlar ve kantifikasyon için 8 haftalık CD...

Akciğer hastalıklarında ve yaralanmaya bağlı alveol rejenerasyonunda akciğer morfolojisi ve fizyolojisini değerlendirmek için iç akciğer yüzey alanı (ISA) kritik bir kriterdir. Burada hem akciğer pnömonektomisinde hem de protez implantasyon fare modellerinde ISA için önyargı önlemeyi en aza indirecek standart bir yöntem açıklanmaktadır.

Fare Pnömonektomi ve Protez İmplantasyonu ile İç Akciğer Yüzey Alanının Ölçümü için Standart Bir Yöntem

Pulmonary morphology, physiology, and respiratory functions change in both physiological and pathological conditions. Internal lung surface area (ISA), ...

Bu prosedürün genel amacı, pnömonektomi ve protez implantasyonu sonrası bir fare akciğerinin iç yüzey alanını doğru bir şekilde ölçmektir. Bu yöntem, mekanik kuvvetle tetiklenen yetişkin akciğer rejenerasyonunda akciğerin morfolojik ve fizyolojik fonksiyonlarının analiz edilmesine yardımcı olur. Bu tekniğin temel avantajı, akciğer fonksiyon durumunun güvenilirliğini ve tekrarlanabilirliğini artırmayı vaat eden iç akciğer yüzey alanının doğru bir şekilde nicelleştirilmesidir.Fareyi, ventral tarafı erişilebilir olacak şekilde bir entübasyon platformunda cerrahiye hazırlayın. Ardından dili dışarı çekin ve kılavuz kateterlerle uyumlu küçük hayvan laringoskopu ile ses tellerini inceleyin. Sonra, 20 gauge intravenöz entübasyon kanülünü iç açıyla trakeaya nazikçe yerleştirin.Ardından, fareyi sağ yan yatış pozisyonuna getirin ve kanülü mekanik bir ventilatöre bağlayın. Kanülün trakeaya yerleşimini değerlendirmek için göğüs bölgesini gözlemleyin. İnspiratuar basıncı 12 cm H₂O olarak ve solunum hızını dakikada 120 nefes olacak şekilde ayarlayın.Şimdi, açıkta kalan cildi Betadine ve %70 etanol ile en az üç kez ardışık şekilde ovalayarak temizleyin. Ardından, beşinci interkostal boşluğa iki il

a-standardized-method-for-measuring-internal-lung-surface-area-via

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Endotelyal endotel / glycocalyx yüzey tabakası ideal intravital mikroskobu kullanılarak incelenmiştir. Intravital mikroskop teknik gibi akciğer gibi hareketli bir organ zordur. Biz eş zamanlı aydınlık ve floresan mikroskop serbestçe-hareket eden endotel yüzey tabakasının kalınlığını belirlemede nasıl kullanılabileceğini...

Fare Pulmoner Endotelyal Yüzey Katman in vivo ölçümü olarak

Bu protokolün amacı, KOAH'ın bir fare modelinde kronik akciğer patolojilerini ölçmek için otomatik yöntemler sağlamaktır. Protokol, fareleri sigara dumanına (CS) maruz bırakmayı, pulmoner fonksiyonu ölçmeyi, akciğerleri şişirmeyi ve farelerde amfizem ve küçük hava yolu yeniden şekillenmesini ölçmek için morfometri yöntemlerinin kullanılmasını içerir.

Sigara Duman maruz kalan Fare Akciğer Amfizem ve Küçük Havayolu Yaptırma otomatik ölçüm

Fare pnömonektomisi, kompansatuar akciğer büyümesinin yaygın olarak kullanılan bir modelidir. Bu prosedür, altta yatan mekanizmaları aydınlatmak için soy izleme veya transgenik fare modelleri ile birlikte kullanılabilir.

Telafi Akciğer Büyüme Fare Pnömonektomi Modeli

Burada, farelerde akciğer basınç-hacim eğrisini basit ve güvenilir bir şekilde ölçmek için bir protokol sunuyoruz ve bu, iki yaygın akciğer patolojisi olan pulmoner fibroz ve amfizemde fenotipik parankimal değişiklikleri tespit etmek için yeterince duyarlı olduğunu gösteriyor. Bu metrik, gelişen patoloji ile akciğerin yapısal değişikliklerini ölçmek için bir araç sağlar.

Fare Akciğerler Basınç-hacim Eğrisi Ölçümü

Bu yazının amacı, büyük ölçüde akciğer kanseri ya da diğer patolojiler ile kurulum ve fare akciğerlerin analizine yardımcı olacak basit yöntemler tarif etmektir. Biz sadece ve güvenilir akciğer instilasyonlar, fiksasyon ve akciğer hacim ölçümleri yürütmek için 3 protokol sunuyoruz.

Fare Akciğer Kanseri Araştırma Faydalı instillation ve Fiksasyon Yöntemi

Biz önceden airways yaralanma ile Klima tarafından fare ciğerlerine akciğer kanser hücrelerinin orthotopic engraftment önemli ölçüde geliştirmek için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu yaklaşım aynı zamanda akciğer microenvironment, metastatik yayılması, akciğer kanseri komorbiditeler içinde stromal etkileşimleri çalışmaya uygulanabilir ve daha verimli bir şekilde hasta oluşturmak için xenografts türetilmiş.

Bleomycin ile fareler Airways önceden Merkezi Klima Orthotopic akciğer kanseri hücre Engraftment verimliliğini artırır

Burada, akciğerin yüksek çözünürlüklü, intravital görüntülemesini sağlayan murine toraks için kalıcı olarak indwelling optik pencerenin cerrahi implantasyonu için bir protokol sunuyoruz. Pencerenin kalıcılığı, akciğerdeki dinamik hücresel süreçlerin, özellikle de yayılan tümör hücrelerinin metastatik ilerlemesi gibi yavaş gelişen süreçlerin incelenmesine çok uygun hale getirir.

Akciğere Kanser Metastazını Araştırmak İçin Kalıcı Bir Pencere

Bu protokol, bir farenin en uygun şekilde konumlandırılmasının ve kamera tabanlı bir otoskopun transoral olarak yerleştirilmesinin glotisin görselleştirilmesini, minimal doku travması ile hızlı entübasyonu ve akciğerlere tutarlı sıvı verilmesini nasıl sağladığını gösterir.

Fare Akciğerine Sıvı İletimi için Geliştirilmiş Metodoloji: Tüketici Otoskopu Kullanılarak Entübasyon

Burada, lezyon tarafında intratrakeal damlatma yoluyla tek taraflı bleomisin ile indüklenen pulmoner fibrozis modelinde ventilasyon bölgelerini ölçmek için mikro-bilgisayarlı tomografi (mikro-BT) kullanan bir protokol sunuyoruz.

Preklinik Modellerde Pulmoner Fibrozisin Gelişmiş Değerlendirmesi için Mikro-BT Kullanılarak Tek Taraflı Akciğer Hacmi Analizi

Akciğer kanseri için yeni tedaviler geliştirmenin en büyük zorluğu, bölgesel hastalık metastatik hastalığa ilerlerken tümör mikro çevresinin modellenmesini içerir. Burada, zaman içinde hastalığın in vivo olarak izlenmesine izin veren ortotopik bir sinjeneik akciğer kanseri modeli oluşturmanın basit bir yöntemini açıklıyoruz.

Akciğer Kanserinin Sinjeneik Ortotopik Fare Modelini Oluşturmak için Minimal İnvaziv Bir Yöntem

Keşfedin fare pnömonektomi ve protez implantasyonu sonrası iç akciğer yüzey alanını ölçme yöntemini. Bu teknik akciğer morfolojisi ve rejenerasyon süreçlerinin güvenilir analizini sağlar.

Fare Pnömonektomi ve Protez İmplantasyonu ile İç Akciğer Yüzey Alanının Ölçümü için Standart Bir Yöntem

Daha fazla video keşfet