Davranışsal yanıt profilleri larva balık incelenmesi için deneysel protokol: nöro-uyarıcı kafein uygulamaya

Balık modellerinin birçok avantajı vardır ve daha sonra biyomedikal bilimlerde giderek daha fazla kullanılmaktadır. Geliştirmeden ilaç keşfine ve toksikoloji çalışmalarına kadar. Balık modellerinin davranışları da benzer şekilde çevresel ve biyomedikal araştırmalar için giderek daha fazla kullanılmaktadır.

Burada, çevresel biyomedikal bilimleri ilerletmek için sucul toksikoloji ve davranışsal ekoloji alanında onlarca yıllık araştırma deneyiminden yararlanmak özellikle önemlidir. Yöntemimiz, kimyasalların biyolojik etkilerini ve sunabilecekleri fayda ve tehlikeleri anlamak için kullanılabilir. Bu protokolün en önemli avantajı, çevre ve biyomedikal bilimlere yararlılığı olan kimyasal aktivitelerin tanısal olarak anlaşılması için hassas ve hızlı bir yaklaşım sağlamasıdır.

Bu tekniğin sonuçları, ticari biyoaktivitelerin ve davranışsal etkilerin teşhisini desteklemeyi amaçlamaktadır. Bu kimyasalların çoğu genellikle önemli toksisite bilgilerinden yoksundur. Bununla birlikte, farmasötikler ve pestisitler gibi diğer kimyasalların etkilerini anlamak için de uygulanabilir.

Bu hususun dikkate alınması önemlidir, çünkü karşılaştırmalı çevresel farmakoloji ve toksikoloji verileri endüstriyel bileşikler için genellikle eksiktir. Değişen aydınlık, karanlık fotoğraf dönemleri sırasında larva lokomotor aktivitesini ölçmeye ek olarak, bu protokol larva fotomotor tepkilerini ölçmek için de kullanılabilir. Işıktan karanlığa ve karanlıktan aydınlığa geçişler arasındaki hareket farkının büyüklüğünü etkili bir şekilde inceler.

Başlamak için, kafeini sulandırılmış sert suda çözün. Daha sonra daha düşük kafein tedavi seviyeleri üretmek için seri seyreltmeler yapın. Bireysel maruz kalma odalarını hazırlamak için, zebra balığı için dört adet 100 mililitrelik cam behere 20 mililitre çözelti dökün.

Şişman minnows için üç adet 500 mililitrelik cam behere 200 mililitre çözelti dökün. Daha sonra, döllenmeden dört ila altı saat sonra 10 yaşlı zebra balığı embriyosunu beherlerin her birine yerleştirmek için bir transfer pipeti kullanın. Modifiye edilmiş bir transfer pipeti kullanarak, yumurtadan çıktıktan sonraki 24 saat içinde yaşlandırılmış 10 şişman başlı minnow larvasını maruz kalma odalarının her birine yerleştirin.

Zebra balığı ve şişman kafa minnow odalarını bir kuluçka makinesine yerleştirin. 96 saat sonra, tek tek balıkları 48 ve 24 kuyulu plakalardan oluşan ayrı kuyucuklara yükleyin. Kayıt haznesine en az bir larva balığı içeren bir kuyu tabağı yerleştirin.

Ardından video izleme yazılımında dosya oluşturma protokolünü tıklayın. Diyalog kutusunun konum sayısı alanına, kuyu plakasının tek tek kuyucuklarının sayısını girin. Ve ekranın üst OK.At tıklayın, tam ekran görüntüle'yi tıklayın.

Kuyu plakasının tepegöz kamera görüntüsünü görüntülemek için. Ardından çizim alanları simgesini tıklayın. Etiketli alanlar alanındaki daire simgesini seçin.

İmleci kullanarak, plakanın sol üst kuyusunun dairesel video izleme alanını tanımlayın. Sağ üst işareti seçin ve sağ üst taraftaki görüntüleme alanını iyi bir şekilde çizin. Ardından, sağ alt kısmı iyi bir şekilde özetlemek için alt işareti seçin.

Kuyu izleme alanlarını tanımladıktan sonra, yazılımdan kalan kuyuların görüntüleme alanlarını tanımlamasını istemek için oluştur'a tıklayın. Kalibrasyon alanında, ölçek çiz'e tıklayın ve plaka boyunca yatay bir çizgi çizin. Çizgi çizildikten sonra, kalibrasyon ölçümü etiketli bir iletişim kutusu görünecektir.

Bu kutuya kuyu plakası uzunluğunu girin ve Tamam'a tıklayın. Kalibrasyon alanında gruplandırmak için uygula'ya tıklayın. Çizim yöneticisinden çıkmak için, çizim alanları simgesini tıklatın. Ardından, döşeme simgesini tıklayın.

İmleci kullanarak, görüntüleme ekranında görünen tüm kutuları, her biri yeşil olacak şekilde vurgulayın. Görünümü ve tam ekranı tıklayın. Ardından algılama eşiği kutusunda bkg'ye tıklayın ve piksel algılama eşiğini ayarlamak için eşik ayar çubuğunu kullanın.

Uygun eşik seçildikten sonra gruba uygula'yı tıklayın. Hareket eşiği etiketli kutuya, istenen hareket hızı izleme parametrelerini girin. Hız parametreleri ayarlandıktan sonra gruba uygula'ya tıklayın.

Ardından, açılır menüden protokol parametreleri'ne tıklayın. İletişim kutusunda zaman sekmesini seçin ve gözlem ve entegrasyon sürelerini girin. Tamam'a tıklayın ve parametreler açılır menüsünden hafif sürüşü seçerek hafif sürücü ayarları iletişim kutusunu açın.

Her fotoğraf dönemi için açık koyu fotoğraf dönemi sürelerini ve ışık yoğunluğunu ayarlayın. Ardından Tamam'ı tıklayın. Ardından, gözlem protokolünü kaydedin.

İlk olarak, deney balığını içeren kuyu plakasını davranışsal kayıt odasına yerleştirin. Ardından önceden geliştirilmiş izleme protokolünü açın. Video izleme görüntüleyicide, tüm larvaların görünür olduğundan, her kuyucukta yalnızca bir larva bulunduğundan ve kuyuların tanımlanan gözlem alanlarıyla hizalandığından emin olun.

Ardından, deneye tıklayın ve yürütün. Verilerin adını belirtin ve konumunu kaydedin. Ve önceden tanımlanmış tüm görüntüleme alanlarını vurgulamak için birkaç canlı görüntü simgesine tıklayın.

Son olarak, kayıt odasının panelini kapatın ve arka plana ve ardından bilgisayar monitöründe başlat'a tıklayın. 96 saatlik kafein fathead minnow larvalarına maruz kaldıktan sonra, fotomotor tepki, zebra balığından daha düşük seviyelerde kafein tarafından değiştirildi. Bununla birlikte, zebra balıklarında belirgin şekilde daha fazla sayıda fotomotor uç noktası etkilenmiştir.

Ek olarak, aydınlık ve karanlık lokomotor aktivite, taşınan mesafe, hareket sayısı ve hareket süresi için üç hız eşiğinde analiz edildi. Her iki türde de, kafein lokomotor uç noktaları önemli ölçüde etkileyen tüm aktiviteyi inhibe etti. Bu prosedürü gerçekleştirirken, davranışsal tahlilleri dar ve belirli bir zaman penceresiyle bağlamayı unutmamak önemlidir.

Çünkü günün saati larva balıklarının davranışlarını etkileyebilir. Bu prosedürü takiben, balık davranışlarıyla ilgili ek soruları yanıtlamak için diğer kimyasallardaki standartlaştırılmış kılavuzlara yöntemler uygulanabilir. Bu videoyu izledikten sonra, çevre ve biyomedikal bilimlerle ilgili standartlaştırılmış yönergelerle toksisite biyo-tahlilleri gerçekleştirirken larva balığı modellerinin davranışlarını ve fotomotor tepkilerini nasıl gözlemleyeceğinizi iyi anlamış olmalısınız.

Bazı kimyasallarla çalışmanın tehlikeli olabileceğini unutmayın, bu nedenle bu protokolü uygularken uygun kişisel koruyucu ekipman giydiğinizden emin olun.