In vitro Radiobiology denemeleri için Lineer Hızlandırıcı kullanımı

Radyasyon tedavisi en sık lineer hızlandırıcılar kullanılarak yapılır. Bu protokol, araştırmacıların doğrusal bir hızlandırıcı kullanarak radyasyonun hücreler üzerindeki biyolojik etkilerini değerlendirmelerine olanak tanır. Bu tekniğin avantajı doğrusal bir hızlandırıcı kullanarak, araştırmacılar klinik olarak ilgili doz ve doz oranları geniş bir yelpazede çalışabilirsiniz.

Ayrıca, bu protokol kanser hücrelerinin her türlü için kullanılabilir. Bu yöntem, burada gösterilen benzer ekipman kullanılarak gerçekleştirilebilir. Örneğin, diğer satıcılar tarafından üretilen doğrusal hızlandırıcılar.

Doğrusal hızlandırıcı kullanarak dosimetrik hesaplamalar yaparken deneyimli olmayan bireyler, numuneye istenilen dozu sağlamak için gerekli monitör birimlerinin doğru sayısını hesaplamak için mücadele edebilirler. Onlar bir deneyim tıbbi fizikçi veya dosimetrist tavsiye arayarak yararlanacaktır. Doğrusal bir hızlandırıcı kullanarak numuneye doğru doz teslim etmek dikkatli bir yerleştirme gerektirir.

Planlanan ışınlama iki gün önce, bir kültür başlık çalışan, 15 mililitrelik santrifüj tüp içine bir kültür plakası glioma kök benzeri hücreleri toplamak için steril beş mililitrelik pipet kullanın. Bir tezgah santrifüj üç dakika için 200 kez g hücreleri santrifüj. Supernatant atın ve tripsin-EDTA bir mililitre ile hücre pelet resuspend.

Pelet sindirmek ve tripsin-EDTA tek bir hücre süspansiyon yapmak için beş dakika oda sıcaklığında kuluçka. Sindirim sırasında her iki dakikada bir, yavaşça hücrelerin iyice sindirilir emin olmak için santrifüj tüp alt sallamak. Sonra trypsin söndürmek için kök hücre kültürü medya üç mililitre ekleyin, yavaşça karıştırın, ve santrifüj 200 kez g bir tezgah santrifüj üç dakika.

Supernatant attıktan sonra, hücre kültürü medya beş mililitre ile hücre pelet resuspend ve bir hemositometre ile hücreleri saymak. Plaka beş milyon hücre hücre kültürü medya 10 mililitre içeren iki 10 santimetre plakaları bölünmüş ve 37 santigrat derece 48 saat kuluçka. Planlanan ışınlamahemen önce, hücreleri ve santrifüj daha önce yapıldığı gibi toplamak.

Supernatant atın ve hücre kültürü medya beş mililitre ile hücre pelet resuspend. Bir mililitre hücre süspansiyonunun iki mililitre hücre kültürü ortamı içeren 35 milimetrelik bir plakaya aktarılması, ortamın bir santimetre yüksekliğe ulaştığından emin olun. Kontaminasyon riskini azaltmak için kaplamalı hücreleri ikincil bir konteynere aktarın ve hücreleri ışınlamak için bir yardımcı araç üzerindeki kaptaki hücreleri ışınlama tesisine getirin.

Bir gün önce, hücre kültürü başlık çalışan, bağlı hücre hattı için hücre kültürü plaka DMEM orta kaldırmak için bir vakum bağlı bir Pasteur pipet kullanın. Daha sonra hücreleri beş mililitre steril PBS ile yıkayın ve artık ortamı durulayın. Kültür yemeğiiçine bir mililitre tripsin-EDTA ekleyin ve tüm yemeğin kapalı olduğundan emin olmak için kültür plakasını yavaşça yatırın.

Beş dakika oda sıcaklığında kuluçkadan sonra, üç mililitre DMEM ortam ile tripsin-EDTA reaksiyonu söndürün. Hücreleri 15 mililitrelik santrifüj tüpü, santrifüj tüpü, santrifüj içine toplamak ve daha sonra el yazmasıaçıklandığı gibi hücreleri kültüre almak için beş mililitrelik pipet kullanın. LINAC'ın konsol yazılımını kullanarak bu önceden hazırlanmış bu hücreleri ışınlamak için hızlandırıcı gantry ve kolimatör sıfır dereceye ayarlayın, x ve y çenelerini simetrik beş santimetre kare alan boyutuna açın ve çok yapraklı kolimatörleri geri çekin.

Tedavi kanepesine en az beş santimetre su eşdeğeri malzeme ekleyin ve hücre çanamasını LINAC'ın hedefinin ortasına ışınlanacak şekilde yerleştirin. Hücreleri 1,5 santimetre civarında altı megavoltluk bir X-ışınına maksimum dozda yerleştirin ve yemeğin üzerine bir santimetre daha su eşdeğeri malzeme ekleyin. Ön işaretçiyi LINAC'ın başına yapıştırın ve birikme malzemesinin yüzeyine değene kadar uzatın.

Tablo yüksekliğini kaynaktan birikme yüzeyine olan uzaklık 100 santimetre olana kadar ayarlayın. Tedavi kasasını bırak, diğer tüm bireylerin gittiğinden emin ol. Odada başka hücre olmadığını doğrulayın ve kasa kapısını kapatın.

Alan boyutunu doğrulayın, birimleri izleyin ve konsoldaki dakika başına birimleri izleyin ve ardından radyasyon hücresi için ışını etkinleştirin. Bu protokol kullanılarak üç glioma kök benzeri hücre örneği hazırlandı ve ışınlamadan 24 saat sonra toplandı. Hücre döngüsü profilleri hesaplandı ve hücre döngüsünün farklı aşamalarında hücrelerin yüzdeleri ile gösterildi.

G2 hücre döngüsü arrest glioma kök hücrelerinin ışınlandıktan sonra standart doz oranı veya ekstra yüksek doz oranı ile, ışınlandırılmayan kontrol hücreleri ile karşılaştırıldığında gözlendi. Doğru dozu teslim etmek için, bir santimetre ulaştığından emin olmak için kültür çanağında ortamın yüksekliğini ölçmek en önemlidir. Bu prosedürü takiben, diğer biyolojik tahliller yapılabilir, immünboyama gibi, batı leke, ve hücre döngüsü analizi.

Bu prosedür araştırmacılar klinik olarak ilgili doz ve doz oranı ayarları sağlar yana, birçok hücre kültürü tabanlı modellerüzerinde radyasyon etkisini değerlendirmek için kullanılabilir.