Name: İnsan Subkutan Yağ Dokusunda Adipoz Endotel Hücresi/Adiposit Çapraz Konuşmasının İncelenmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-04-05T14:35:00.000+00:00
Duration: 6 min 35 s
Description: Keşfedin, insan subkutan yağ dokusundan mikrovasküler endotelyal hücre izolasyonu ve adipositlerle çapraz konuşmayı. Bu yöntem kardiyometabolik hastalıklarda hücresel etkileşimleri anlamak için hasta kaynaklı dokular kullanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<meta charset="utf8"></head><body>İnsan SATMVEC'leri: İzolasyon ve Adiposit Çapraz Konuşma Çalışmaları

<ol><li>Bierhansl, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Central+role+of+metabolism+in+endothelial+cell+function+and+vascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology%22%5BJournal%5D)">Central role of metabolism in endothelial cell function and vascular disease.</a> Physiology. 32 (2), 126-140 (2017).</li>
<li>Aird, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cell+heterogeneity%5BTitle%5D)+AND+%22Cold+Spring+Harb+Perspect+Med%22%5BJournal%5D)">Endothelial cell heterogeneity.</a> Cold Spring Harb Perspect Med. 2 (1), a006429(2012).</li>
<li>Rajendran, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+vascular+endothelium+and+human+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Biol+Sci%22%5BJournal%5D)">The vascular endothelium and human diseases.</a> Int J Biol Sci. 9 (10), 1057-1069 (2013).</li>
<li>Brown, O. I., Bridge, K., Kearney, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nicotinamide+adenine+dinucleotide+phosphate+oxidases+in+glucose+homeostasis+and+diabetes-related+endothelial+cell+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Cells%22%5BJournal%5D)">Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidases in glucose homeostasis and diabetes-related endothelial cell dysfunction.</a> Cells. 10 (9), 2315(2021).</li>
<li>Luk, C., Haywood, N. J., Bridge, K. I., Kearney, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Paracrine+role+of+the+endothelium+in+metabolic+homeostasis+in+health+and+nutrient+excess%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cardiovasc+Med%22%5BJournal%5D)">Paracrine role of the endothelium in metabolic homeostasis in health and nutrient excess.</a> Front Cardiovasc Med. 26 (9), 882923(2022).</li>
<li>Click-iT EdU Imaging Kits. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.thermofisher.com/document-connect/document-connect.html?url=https://assets.thermofisher.com/TFS-Assets%2FLSG%2Fmanuals%2Fmp10338.pdf">https://www.thermofisher.com/document-connect/document-connect.html?url=https://assets.thermofisher.com/TFS-Assets%2FLSG%2Fmanuals%2Fmp10338.pdf</a> (2024).</li>
<li>Bouïs, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelium+in+vitro%3A+A+review+of+human+vascular+endothelial+cell+lines+for+blood+vessel-related+research%5BTitle%5D)+AND+%22Angiogenesis%22%5BJournal%5D)">Endothelium in vitro: A review of human vascular endothelial cell lines for blood vessel-related research.</a> Angiogenesis. 4 (2), 91-102 (2001).</li>
<li>Ades, E. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HMEC-1%3A+establishment+of+an+immortalized+human+microvascular+endothelial+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">HMEC-1: establishment of an immortalized human microvascular endothelial cell line.</a> J Invest Dermatol. 99 (6), 683-690 (1992).</li>
<li>Chi, J. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+cell+diversity+revealed+by+global+expression+profiling%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Endothelial cell diversity revealed by global expression profiling.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 100 (19), 10623-10628 (2003).</li>
<li>Brignole, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((213+ESC+Guidelines+on+cardiac+pacing+and+cardiac+resynchronization+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+Heart+J%22%5BJournal%5D)">213 ESC Guidelines on cardiac pacing and cardiac resynchronization therapy.</a> Eur Heart J. 34 (29), 2281-2329 (2013).</li>
<li>Greenspon, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trends+in+permanent+pacemaker+implantation+in+the+United+States+from+1993+to+2009%3A+Increasing+complexity+of+patients+and+procedures%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Coll+Cardiol%22%5BJournal%5D)">Trends in permanent pacemaker implantation in the United States from 1993 to 2009: Increasing complexity of patients and procedures.</a> J Am Coll Cardiol. 60 (16), 1540-1545 (2012).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Prioritized+Research+Agenda+for+Prevention+and+Control+of+Noncommunicable+Diseases%22">Prioritized Research Agenda for Prevention and Control of Noncommunicable Diseases</a>. Mendis, S. A., Alwan, A. , World Health Organization. Geneva. (2011).</li>
<li>Brown, O. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationship+among+diabetes%2C+obesity%2C+and+cardiovascular+disease+phenotypes%3A+A+UK+biobank+cohort+study%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes+Care%22%5BJournal%5D)">Relationship among diabetes, obesity, and cardiovascular disease phenotypes: A UK biobank cohort study.</a> Diabetes Care. 46 (8), 1531-1540 (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>170L CO2 İnkübatör</td><td>GS Biotech</td><td>170G-014</td><td></td></tr><tr><td>2-NBDG (2-(N-(7-Nitrobenz-2-oksa-1,3-diazol-4-il)Amino)-2-Deoksiglukoz)</td><td>İnvitrojen</td><td>N13195</td><td></td></tr><tr><td>%4 PARAFIX tamponlu histolojik fiksatif</td><td>VWR Kimyasalları</td><td>PRC/R/38/1</td><td></td></tr><tr><td>Akt (tAkt) Tavşan&nbsp; 1:1000</td><td>Hücre Sinyalizasyon Teknolojisi</td><td>9272</td><td></td></tr><tr><td>BD Venflon Pro Safety 14 g x 45 mm, Turuncu, 50/pk</td><td>Medisave</td><td>393230</td><td></td></tr><tr><td>Sığır Serumu Albümin solüsyonu, %7,5</td> <td>Merck</td><td>A8412-100ML</td><td></td></tr><tr><td>CD144&nbsp;( VE-Cadherin) Antikor, anti-insan, PE, REAfinity</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-118-495</td><td></td></tr><tr><td>CD31 Antikor, anti-insan, PerCP-Vio 700, REAfinity</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-110-811</td><td></td></tr><tr><td>CD31 Mikro Boncuk Kiti, insan, 1 kit</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-935</td><td></td></tr><tr><td>CD45 Antikor, anti-insan, FITC, REAfinity</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-110-769</td><td></td></tr><tr><td>Hücre Ekstraksiyonu Tampon</td><td>İnvitrojen</td><td>FNN0011</td><td></td></tr><tr><td>Santrifüj 5804 R</td><td>Eppendorf</td><td>5805000060</td><td></td></tr><tr><td>Görüntüleme için Click-iT EdU Hücre Proliferasyon Kiti, Alexa Fluor 488 boya</td><td>Invitrogen</td><td>C10337</td><td>Hücre proliferasyonu görüntüleme kiti</td></tr><tr><td>Kollajenaz / Dispas, 500 mg</td><td>Roche / Merck</td><td>11097113001</td><td></td></tr><tr><td>Corning Matrigel Büyüme Faktörü Azaltılmış (GFR) Temel Membran Matrisi</td><td>Corning&nbsp;</td><td>354230</td><td>Bodrum Membran Matrisi</td></tr><tr><td>Corning 100 mm TC ile işlenmiş Kültür Kabı</td><td>Corning&nbsp;</td><td></td><td></td>430167</tr><tr><td>Costar 24 Kuyulu Şeffaf TC ile İşlem Görmüş Çok Kuyulu Plakalar, Ayrı Ayrı Sarılmış, Steril</td><td>Corning&nbsp;</td><td>3526</td><td></td></tr><tr><td>Costar 6 Kuyulu Şeffaf TC ile İşlem Görmüş Çoklu Kuyulu Plakalar, Ayrı Ayrı Sarılmış, Steril</td><td>Corning&nbsp;</td><td>3516</td><td></td></tr><tr><td>CytoFLEX S &ndash; 4 lazer akış Sitometresi</td><td>Beckman</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ölü Hücre Temizleme Kiti</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-101</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco&prime; s Fosfat Tamponlu Tuzlu Merck</td><td></td><td>D8537-500ML</td><td></td></tr><tr><td>EASYstrainer Hücre elek, 50 mL tüpler, 70 ve mikro için; m mesh, Mavi, steril, 50/pk</td><td>Greiner Bio-One</td><td>542070</td><td></td></tr><tr><td>Endotel Hücre Büyüme Ortamı MV</td><td>PromoCell</td><td>C-22020</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Safe-Lock mikro test tüpleri</td><td>Merck</td><td>EP0030120094</td><td></td></tr><tr><td>Etilendiamintetraasetik asit çözeltisi</td><td>Merck</td><td>E8008-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 24 Kuyu TC ile İşlem Görmüş Hücre Polistiren Geçirgen Destek Yardımcı Plakası, Kapaklı, Steril, 1/Paket, 50/Kutu</td><td>Appleton Woods</td><td>CF537</td><td></td></tr><tr><td>Falcon 0.4 ve mikro ile 24 Kuyulu Plaka için Geçirgen Destek; m Şeffaf PET Membran, Steril, 1/Paket, 48/Kutu</td><td>Appleton Woods</td><td>CF521</td><td></td></tr><tr><td>Dondurma Ortamı Cryo-SFM</td><td>PromoCell</td><td>C-29912</td><td></td></tr><tr><td>Jelatin çözeltisi, suda %2</td><td>Merck</td><td>G1393-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Gibco Antibiyotik-Antimikotik (100x), 100mL</td><td>Fisher Scientific</td><td>11570486</td><td></td></tr><tr><td>Gibco TrypLE Select Enzim (1x), fenol kırmızısı yok</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td>12563029</tr><tr><td>Hanks ve başbakan; Dengeli Tuz çözeltisi</td><td>Merck</td><td>H6648-500ML</td><td></td></tr><tr><td>İnsan Deri Altı Preadiposit Hücreleri</td><td>Lonza</td><td>PT-5020</td><td></td></tr><tr><td>Incucyte ZOOM</td><td>Essen BioScience</td><td></td><td>Canlı hücre analiz sistemi</td></tr><tr><td>İnsülin çözeltisi insan</td><td>Merck</td><td>I9278-5ML</td><td></td></tr><tr><td>LS Sütunları, 25/pk</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td></td></tr><tr><td>MACS MultiStand</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-303</td><td></td></tr><tr><td>MACS Doku Depolama Solüsyonu</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-100-008</td><td></td></tr><tr><td>MACSmix Tüp Döndürücü</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-753</td><td>Tüp Döndürücü</td></tr><tr><td>MS Sütunları, 25/pk</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-201</td><td></td></tr><tr><td>NuPAGE 4&ndash; % 12 Bis-Tris Jel</td><td>İnvitrojen</td><td>NP0322BOX</td><td></td></tr><tr><td>OctoMACS Ayırıcı</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-109</td><td></td></tr><tr><td>PGM-2 Preadiposit Büyüme Ortamı-2 BulletKit</td><td>Lonza</td><td>PT-8002</td><td></td></tr><tr><td>Fosfo (Ser1177) eNOS Tavşan 1:1000</td><td>Hücre Sinyalizasyon Teknolojisi</td><td>9570</td><td></td></tr><tr><td>Fosfo-Akt (Ser473) Tavşan ve nbsp; 1:1000</td><td>Hücre Sinyalizasyon Teknolojisi</td><td>4060</td><td></td></tr><tr><td>Ön Ayırma Filtreleri 30 & m, 50/pk</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-041-407</td><td></td></tr><tr><td>Propidium İyodür (PI)/RNase Boyama Çözeltisi</td><td>Hücre Sinyalizasyon Teknolojisi</td><td>4087</td><td></td></tr><tr><td>QuadroMACS Ayırıcı</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-976</td><td></td></tr><tr><td>Neşter Tek Kullanımlık Steril Stil 10</td><td>VWRI</td><td>501</td><td></td></tr><tr><td>Vidalı kapaklı tüp, 15 ml, (Lx&Oslash;): 120 x 17 mm, PP, baskılı</td><td>Sarstetd</td><td>62.554.502</td><td></td></tr><tr><td>Vidalı kapaklı tüp, 50 ml, (Lx&Oslash;): 114 x 28 mm, PP, baskılı</td><td>Sarstedt</td><td>62.547.254</td><td></td></tr><tr><td>Vidalı kapaklı tüp, 50 ml, (Lx&Oslash;): 114 x 28 mm, PP, baskılı</td><td>Sarstetd</td><td>62.547.254</td><td></td></tr><tr><td>Toplam eNOS Fare 1:1000</td><td>BD Biosciences</td><td>610297</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100, BioUltra, moleküler biyoloji için</td><td>Merck</td><td>93443-500ML</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-Aktin (C4) Fare 1:5000</td><td>Santa Cruz Biyoteknoloji</td><td>&nbsp; SC-47778</td><td></td> Serisi</tr></tbody></table>

İnsan subkutan yağ dokusunda adipoz endotel hücresi/adiposit Çapraz konuşmasının İncelenmesi

Studying Adipose Endothelial Cell/Adipocyte Cross-Talk in Human Subcutaneous Adipose Tissue

hSATMVEC saflığı ve fenotip <img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66608/66608fig01v2.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66608/66608fig01large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66608/66608fig02.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66608/66608fig02large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66608/66608fig03.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66608/66608fig03large.jpg" target="_blank"></a><img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66608/66608fig04.jpg"> <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66608/66608fig04large.jpg" target="_blank"></a><a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66608/Supplementary%20Table%201.zip" target="_blank"></a>

İnsan Subkutan Yağ Dokusunda Adipoz Endotel Hücresi/Adiposit Çapraz Konuşmasının İncelenmesi

Microvascular endothelial cells (MVECs) have many critical roles, including control of vascular tone, regulation of thrombosis, and angiogenesis. ...

studying-adipose-endothelial-celladipocyte-cross-talk-human

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Yağ dokusu (AT) tüm vücut homeostazını etkileyebilir, bu nedenle adiposit farklılaşması ve fonksiyonunun moleküler mekanizmalarını anlamak önemlidir. İndüklenmiş adiposit apoptozu için bir model olarak adiposit homeostazı, farklılaşması ve hipoksi maruziyetini analiz ederek bu süreçlere yeni bakış açıları kazandırmak için bir protokol sunuyoruz.

Farklılaşma ve Apoptoz Homeostazis sayesinde Yetişkin Organizmalar içinde Adiposit Numaraları Yönetmeliği Mekanizması

Burada Manyetik Aktif Hücre Ayırma (MCS) kullanarak Perivasküler Adipoz Doku (PVAT) Adiposit Progenitör Hücre (APC) popülasyonlarının izolasyonu için bir yöntem rapor. Bu yöntem, floresan-Aktive Hücre Ayırma (FACS) ile karşılaştırıldığında, yağ dokusunun gramı başına APC'nin artan bir izolasyonuna izin verir.

Manyetik Aktive Hücre Ayırma ile İzole Edilen Perivasküler Adipoz Doku&#39;ndan Adiposit Progenitörlerinin Genleşmesi ve Adipogenez İndüksiyonu

Yağ dokusu vasküler ataları gelen beyaz ve bej adiposit farklılaşma obezite metabolik iyileştirme için potansiyel taşımaktadır. CD34 + CD31 + insan yağı endotel hücre izolasyon ve bir sonraki vitro genişleme ve farklılaşma beyaz ve bej adiposit içine iletişim kurallarını açıklar. Birkaç aşağı akım uygulamaları ele alınmıştır.

Yalıtım, genişleme ve Adipojenik indüksiyon CD34 + CD31 + insan Omental ve deri altı yağ dokusu endotel hücrelerden

Yüksek lipid içeriği nedeniyle yağ dokusu geleneksel histolojik yöntemlerle görselleştirmek için zor oldu. Adipo-temiz sağlam etiketleme ve yağ dokusu yüksek çözünürlüklü hacimsel floresan görüntüleme sağlayan tekniği temizleyerek bir dokudur. Burada, numune hazırlama, ön, boyama, takas ve montaj için görüntüleme yöntemleri açıklanmaktadır.

Adipo-Clear: Bir doku Yöntem yağ dokusu üç boyutlu görüntüleme için temizlenmesi

Biz adipoz doku metabolik fenotip katkıda matris ve adiposit lerin rollerinin diseksiyon sağlayan bir 3D insan ekstrasellüler matriks-adiposit in vitro kültür sistemi açıklar.

Bir İnsan 3D Ekstrasellüler Matrix-Adiposit Kültür Modeli Matrix-Hücre Metabolik Crosstalk Çalışma için

Wnt-1 Cre+/-periaortik yağ dokusundan elde edilen adipoz türetilmiş kök hücrelerin (NCADSCs) izolasyonu, kültürü ve adipojenik indüksiyonu için bir protokol salıyoruz. Rosa26RFP/+ fareler. NCADSCs in vitro adipogenez veya lipogenez modelleme için ADSCs kolay erişilebilir bir kaynak olabilir.

Periaortik Yağ Dokusundan Nöral Adipoz-Türetilmiş Kök Hücrelerin İzolasyon, Kültür ve Adipojenik İndüksiyonu

Bu protokol, adipojenik ve fibro-inflamatuar stromal hücre alt popülasyonlarını murin karın içi beyaz yağ dokusu (WAT) depolarından floresanla aktive edilen hücre sınıflandırması veya immünmanyetik boncuk ayırma yoluyla izole etmek için teknik yaklaşımı açıklar.

Murin İntraabdominal Yağ Depolarından Adipojenik ve Fibroinflamatuar Stromal Hücre Alt Popülasyonlarının İzolasyonu

Bu protokol, adipositlerden yüksek kaliteli RNA elde etme metodolojisi ve akış sitometrisi ile analiz için çoklu membrana bağlı belirteçlerin boyanması yoluyla SVF-makrofajların fenotipleştirilmesi dahil olmak üzere, canlı adipositlerin ve stromal vasküler fraksiyon-SVF hücrelerinin insan viseral yağından tek bir işlemde izolasyonu için etkili bir kollajenaz sindirim yöntemi sağlar.

İnsan Viseral Yağ Dokusundan Canlı Adiposit ve Stromal Vasküler Fraksiyonun RNA Analizi ve Makrofaj Fenotiplemesine Uygun İzolasyonu

Makale ve ilgili video, umbilikusu çevreleyen bölgelerden deri altı yağ dokusu örnekleri elde etmek için perkütan bir biyopsi tekniğini göstermektedir. Bu yöntem, yağ dokusundaki bir dizi parametreyi (örneğin, gen veya protein ekspresyonu, enzim aktivitesi, lipit içeriği) araştırmak için düşük riskli ve etkili bir yoldur.

Mini Liposuction Tekniği ile İnsan Subkutan Yağ Dokusu Örneklemesi

Bu protokol, preadipositleri elde etmek ve in vitro adiposit diferansiyasyonunu sağlamak için stromal vasküler fraksiyonun (SVF) murin yağ dokusundan yarı otomatik izolasyonunu tanımlar. Kollajenaz sindirimi için bir doku ayrıştırıcısı kullanmak deneysel varyasyonu azaltır ve tekrarlanabilirliği arttırır.

Bir Doku Dissosiyatör Kullanarak Stromal Vasküler Fraksiyonun Murin Beyaz Yağ Dokusundan Yarı Otomatik İzolasyonu

Keşfedin, insan subkutan yağ dokusundan mikrovasküler endotelyal hücre izolasyonu ve adipositlerle çapraz konuşmayı. Bu yöntem kardiyometabolik hastalıklarda hücresel etkileşimleri anlamak için hasta kaynaklı dokular kullanır.

İnsan Subkutan Yağ Dokusunda Adipoz Endotel Hücresi/Adiposit Çapraz Konuşmasının İncelenmesi

Daha fazla video keşfet