Encyclopedia of Experiments: Biology
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- C. elegans si verificano in due sessi: gli ermafroditi, che hanno due cromosomi X, e i maschi, che hanno un solo cromosoma X indicato come XO o X null.
Gli ermafroditi producono sia ovociti che spermatozoi e possono riprodursi per autofertilizzazione. Quasi tutti i loro gameti portano un cromosoma X, quindi la prole risultante dall'autofertilizzazione sono per lo più ermafroditi.
Raramente, il cromosoma X viene perso durante la gametogenesi, con conseguente prole maschile solo circa lo 0,1-0,2% delle volte. Questo non è un modo pratico per raccogliere abbastanza maschi per qualsiasi esperimento o croce genetica di cui abbiamo bisogno.
Al contrario, possiamo creare un'ermafrodita con un maschio con il risultato che circa la metà della prole è maschio. Quando si effettua questa croce genetica, assicurarsi di includere più maschi che ermafroditi per garantire un accoppiamento efficiente. Nell'esempio seguente, istituiremo una piastra di accoppiamento e isolamo i vermi maschi in preparazione per raccogliere e studiare gli spermatidi in vitro.
- In primo luogo, ottenere un gran numero di maschi incrociando cinque maschi di tipo selvatico e un'ermafrodita su un piccolo prato di batteri E. coli OP50 seminati al centro di un mezzo di crescita del nematode o di una piastra NGM. Circa il 50% della prossima generazione saranno maschi di tipo selvatico.
Per raccogliere i maschi dello stadio L4, esaminare la morfologia dello stadio di sviluppo e della coda al microscopio sezionato. Un verme dello stadio L4 viene raccolto in base alla morfologia della coda. Un verme maschio ha una coda arrotondata, mentre un'ermafrodita ha una coda appuntita.
Utilizzando un filo di platino, raccogliere da 7 a 10 maschi stadio L4 per esperimento e trasferirli su piastra NGM seminata con OP50 e lasciarli crescere per un giorno o due. La crescita dei maschi celibati in assenza di ermafroditi previene la perdita di spermatozoi e quindi, un gran numero di spermatidi sarà disponibile durante la procedura sperimentale.
